SNHG7-miR-653-5p-STAT2反饋通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)展中的調(diào)節(jié)作用研究

楊檳伊 劉小梅 陳鑫 陳偉明 范煦 李富江 鹿洪亭

1 青島大學(xué)附屬醫(yī)院小兒外科，青島 266000； 2 青島大學(xué)，青島 266071； 3 勝利油田中心醫(yī)院兒科，東營(yíng) 257034； 4 青島大學(xué)附屬婦女兒童醫(yī)院小兒外科，青島 266011

神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)是交感神經(jīng)系統(tǒng)的胚胎性顱外實(shí)體瘤，是兒童交感神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤[1-2]。NB的平均診斷年齡約17個(gè)月，臨床表現(xiàn)多樣，預(yù)后個(gè)體差異較大[3-5]。NB因病死率高、預(yù)后差而被視為一種高風(fēng)險(xiǎn)的兒童惡性腫瘤[3,6-7]。目前大量研究表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA (long noncoding RNAs,lncRNA)在腫瘤進(jìn)展中起著關(guān)鍵作用[8]。LncRNA一般超過(guò)200個(gè)核苷酸，缺乏蛋白質(zhì)編碼能力[9]。此外，lncRNA能夠調(diào)節(jié)與腫瘤異常增殖、凋亡、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)[9-10]。lncRNA SNHG7全長(zhǎng)2176 bp，位于染色體9q34.3上。SNHG7具有促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡的作用。例如，lncRNA SNHG7與miR-34a相互作用，通過(guò)PI3K/Akt/mTOR通路上調(diào)結(jié)直腸癌中GALNT7的表達(dá)水平[11]。LncRNA SNHG7通過(guò)上調(diào)FAIM2蛋白的表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制癌細(xì)胞凋亡[12]。雖然SNHG7被認(rèn)為是多種癌癥的重要調(diào)控因子，但其在神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)展中的作用及機(jī)制尚未明確。

miRNA長(zhǎng)度通常為20～22個(gè)核苷酸，缺乏蛋白編碼潛能，通過(guò)結(jié)合靶mRNA上的互補(bǔ)序列，在轉(zhuǎn)錄后下調(diào)基因表達(dá)[13]。越來(lái)越多的研究表明，lncRNA可以通過(guò)miRNA的海綿作用調(diào)控多種癌癥中mRNA的表達(dá)[14-15]。例如，lncRNA FTH1P3可通過(guò)miR-206/ABCB1激活乳腺癌患兒的紫杉醇耐藥[16]。有報(bào)道SNHG7在多種癌癥中作為miRNA發(fā)揮海綿樣作用[17]。例如，SNHG7通過(guò)分泌miR-503經(jīng)cyclin D1促進(jìn)前列腺癌的增殖和周期進(jìn)展[18]。MiR-653-5p是以前從未被研究過(guò)的miRNA之一，miR-653-5p是否參與NB的進(jìn)展仍有待闡明。本研究旨在探索SNHG7在神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)展中的作用，并進(jìn)一步探討SNHG7中的分子機(jī)制對(duì)NB的潛在影響。

材料與方法

一、研究對(duì)象

從青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的NB患兒體內(nèi)獲得92對(duì)NB組織及相鄰非腫瘤組織。樣品獲取后即置于-80℃低溫冰箱保存。所有患兒未接受術(shù)前治療，患兒家屬簽署書(shū)面知情同意書(shū)，本研究獲得青島大學(xué)附屬婦女兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(QYFYWZLL25816)。

二、研究方法

1.細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染：人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系[SK-N-AS，SK-N-SH，SH-SY5Y，IMR-32，SK-N-BE(2)-C]購(gòu)于美國(guó)ATCC公司。細(xì)胞的培養(yǎng)液(dulbecco’s modified eagle medium，DMEM)及100 U/mL青霉素和100 mg/mL鏈霉素購(gòu)于美國(guó)默賽飛世爾公司，10%的滅活胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)購(gòu)于美國(guó)Hyclone公司，然后置于含有5%CO2,37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以SNHG7為靶點(diǎn)的shRNA和相應(yīng)的對(duì)照組shRNA (sh-NC)由上海吉瑪基因制藥技術(shù)有限公司提供。合成STAT2序列，亞克隆到pcDNA3.1載體(pcDNA/STAT2)購(gòu)于英杰公司。從上海吉瑪公司獲得miR-653-5p模擬物和miR-653-5p抑制。SK-N-SH細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞與質(zhì)粒使用lipofectamine 2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24 h后，收集細(xì)胞并保存，以備后續(xù)研究。

2. RNA提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR：采用Trizol試劑(美國(guó)默賽飛世爾公司)從患兒組織和NB細(xì)胞中提取RNA。采用分光光度法測(cè)定RNA樣品的濃度和純度。純化后的RNA經(jīng)相應(yīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自德國(guó)德商寶公司)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA?；虻南鄬?duì)表達(dá)水平用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(中國(guó)大連的寶生物公司)進(jìn)行驗(yàn)證。用U6作為內(nèi)參，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3. 比色法實(shí)驗(yàn)：將SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞(2×105)分別在96孔板中培養(yǎng)24 h、48 h、72 h、96 h。 向每個(gè)孔中加入3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2、5-二苯基-2-H-四唑溴化物(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT，0.5 mg/mL)溶液。 將細(xì)胞依次孵育4 h，除去剩余的MTT溶液，再向每個(gè)孔中加入二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)以溶解晶體。 此后，使用ELX-800光譜儀讀數(shù)器(美國(guó)寶特儀器有限公司)測(cè)量490 nm處的吸光度。 每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

4. 集落形成實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)染后，將SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞(1×103細(xì)胞/孔)接種到12孔板中。 培養(yǎng)基每3天更換1次。 2周后，用PBS輕輕洗滌細(xì)胞，甲醇固定10 min后用0.1%結(jié)晶紫染色5 min，最后手動(dòng)計(jì)數(shù)含有超過(guò)50個(gè)細(xì)胞的集落。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

5. 細(xì)胞的侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)：利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)(美國(guó)的康寧公司)檢測(cè)上述兩種細(xì)胞，SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞(2×104)置于有200 μL新鮮DMEM培養(yǎng)基的上室中，將含有10%FBS的800 μL培養(yǎng)基加入下室。 孵育24 h后，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞20 min，并用0.1%結(jié)晶紫染色5 min。 然后通過(guò)光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯公司，型號(hào)BX51)放大200倍對(duì)膜底部侵入或遷移的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

6. 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)：將含有預(yù)測(cè)的miR-653-5p結(jié)合位點(diǎn)和SNHG7的全長(zhǎng)序列的STAT2的3’-UTR序列克隆到psiCHECK-2載體(普洛麥格公司，美國(guó))上來(lái)產(chǎn)生野生型STAT2報(bào)告基因(STAT2-Wt)和野生型SNHG7報(bào)告基因(SNHG7-Wt)。 突變型STAT2報(bào)告基因(STAT2-Mut)和突變型SNHG7報(bào)告基因(SNHG7-Mut)由定點(diǎn)突變?cè)噭┖?購(gòu)于默賽飛世爾公司)產(chǎn)生。 用HEK-293T細(xì)胞與miRNA(miR-NC，miR-653-5p模擬物)以及miRNA抑制物(miR-NC，miR-653-5p抑制物)一起轉(zhuǎn)染這些構(gòu)建的分子報(bào)告基因。 在轉(zhuǎn)染48 h后，用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)(普洛麥格系統(tǒng)，美國(guó))測(cè)量熒光素酶活性。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

7. RIP測(cè)定法(RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀法)：運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫沉淀試劑盒對(duì)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行處理。將細(xì)胞裂解物(SK-N-SH和SH-SY5Y)在含有磁珠的RIP緩沖液中孵育，所述磁珠與人抗-Ago2抗體結(jié)合，正常IgG和Input分別充當(dāng)對(duì)照組。用蛋白酶K分離免疫沉淀的RNA。最后，提取純化的RNA，通過(guò)實(shí)時(shí)PCR測(cè)量。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

(3)加強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)規(guī)范管理。強(qiáng)化數(shù)據(jù)分析應(yīng)用，推進(jìn)財(cái)產(chǎn)行為稅風(fēng)險(xiǎn)管理，加強(qiáng)信息比對(duì)，完善各稅種風(fēng)險(xiǎn)特征庫(kù)、管理模型和指標(biāo)體系，建立財(cái)產(chǎn)行為稅風(fēng)險(xiǎn)管理機(jī)制，不斷提高風(fēng)險(xiǎn)管理的規(guī)范化水平。

8.RNA下拉測(cè)定法：Bio-SNHG7-WT，Bio-SNHG7-Mut和Bio-NC由中國(guó)上海吉瑪公司生物素化所得。 將生物素標(biāo)記的RNA轉(zhuǎn)染到SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中。 轉(zhuǎn)染48 h后，收集細(xì)胞并裂解。 將細(xì)胞裂解物與含有抗-Ago2或抗-IgG的珠子一起孵育10 min。 通過(guò)qRT-PCR分析純化的RNA復(fù)合物。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、SNHG7在NB組織和細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)

為了探討SNHG7在NB進(jìn)展中的作用，首先用qRT-PCR檢測(cè)92對(duì)NB組織中SNHG7的表達(dá)。如圖1A所示，與相應(yīng)的非腫瘤組織相比，SNHG7在腫瘤組織中的表達(dá)明顯上調(diào)。檢測(cè)NB細(xì)胞[SK-N-SH,SH-SY5Y,IMR-32,SK-N-AS,SK-N-BE(2)-C]中SNHG7的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，SNHG7在SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中高表達(dá)(圖1B)，提示SNHG7可能參與NB的發(fā)生發(fā)展。

二、SNHG7表達(dá)與NB臨床預(yù)后的關(guān)系

為了進(jìn)一步確定SNHG7對(duì)NB的影響，分析臨床病理特征與NB患兒SNHG7表達(dá)水平之間的關(guān)系，根據(jù)實(shí)時(shí)PCR分析得到SNHG7的平均表達(dá)水平，將所有患兒分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。如表1所示，SNHG7的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=4.843,P=0.035)、INSS分期(χ2=5.101,P=0.034)、視神經(jīng)侵犯(χ2=10.163,P=0.003)有關(guān)，但SNHG7的表達(dá)與年齡、性別、分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，SNHG7高表達(dá)的患兒預(yù)后較差(圖1C)。此外，SNHG7的表達(dá)(P=0.042)可以作為NB患兒預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(表2)，NB患兒SNHG7的表達(dá)水平可能與預(yù)后有關(guān)。

圖1 SNHG7在NB組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)相關(guān)結(jié)果圖 注 A：與配對(duì)的非腫瘤組織相比，92例NB組織中SNHG7表達(dá)上調(diào)； B：SNHG7在5株NB細(xì)胞中的表達(dá)情況； C：Kaplan-Meier分析低(n=39)和高(n=53) SNHG7表達(dá)的NB患兒總生存期(*代表P<0.05，**代表P<0.01)

表1 SNHG7表達(dá)等級(jí)與臨床特征的關(guān)聯(lián)性(n=92)Table 1 Correlation between SNHG7 expression and clinical features (n=92)變量分類SNHG7表達(dá)等級(jí)低高χ2值P值年齡(歲)<2.5≥2.5241535180.1980.667性別(例)男女261333200.1890.826淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否162334194.8430.035INSS分期(例)1～2A2B～4S241520335.1010.034分化程度好差112813400.1580.811視神經(jīng)侵犯否是2415153810.1630.003

為了探討SNHG7在NB進(jìn)展中的作用，使用特異性shRNA來(lái)沉默具有SNHG7高表達(dá)的兩個(gè)NB細(xì)胞系SK-N-SH和SH-SY5Y。 如圖2A所示，在SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中，shSNHG7有效降低了SNHG7的表達(dá)。 MTT測(cè)定顯示SNHG7的下調(diào)明顯抑制了SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞的活力(圖2B)。 此外，SNHG7下調(diào)顯著減少了SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中的集落數(shù)(圖2C)。

圖2 SNHG7在體外抑制NB細(xì)胞增殖、體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的相關(guān)結(jié)果圖 注 A：采用qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染shCtrl或shSNHG7后SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中SNHG7的相對(duì)表達(dá)水平； B：通過(guò)MTT法檢測(cè)SNHG7下調(diào)對(duì)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞存活和增殖的作用； C：菌落形成法檢測(cè)答案顯示SNHG7下調(diào)對(duì)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞存活和增殖有明顯抑制作用

表2 NB患兒預(yù)后相關(guān)因素的Cox回歸分析結(jié)果Table 2 Multivariate analysis of prognostic parameters in NB children by Cox regression 變量分類P值年齡(歲)<2.5≥2.50.360性別男女0.765淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否0.031分期1～2A2B～4S0.041分化程度好中/差0.881視神經(jīng)侵犯否是0.076SNHG7表達(dá)等級(jí)高低0.042

四、SNHG7的下調(diào)抑制NB細(xì)胞的遷移、侵襲

為了進(jìn)一步研究SNHG7對(duì)NB轉(zhuǎn)移的影響，應(yīng)用Transwell測(cè)定法驗(yàn)證SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞遷移和侵襲能力。 從圖3A和圖3B可以看出，SNHG7的下調(diào)明顯抑制了SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞遷移和侵襲的能力，這表明沉默SNHG7可抑制NB細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

圖3 SNHG7基因敲除抑制NB細(xì)胞遷移、侵襲能力的相關(guān)結(jié)果圖 注 A和B：Transwell試驗(yàn)結(jié)果表明，敲低SNHG7可明顯抑制SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞遷移和侵襲能力 (**代表P<0.01)

五、SNHG7在NB細(xì)胞中與miR-653-5p的相互作用及相關(guān)性

最近，越來(lái)越多的證據(jù)表明，lncRNA含有與miRNA互補(bǔ)的序列，并且對(duì)miRNA的表達(dá)和活性具有抑制作用[18-19]。我們通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，SNHG7 RNA含有一個(gè)保守元件，可能是miR-653-5p的靶位點(diǎn)。為了確保這種可能性，本研究分別用SNHG7的野生型序列(SNHG7-WT)和突變型序列(SNHG7-Mut)構(gòu)建了兩個(gè)pMIR熒光素酶報(bào)告基因(圖4A)。 如圖4B所示，miR-653-5p模擬物僅能降低SNHG7-WT的熒光素酶活性，但不能降低SNHG7-Mut的熒光素酶活性，而對(duì)miR-NC則沒(méi)有影響。 此外，RIP測(cè)定結(jié)果顯示，與對(duì)照IgG免疫沉淀物相比，SNHG7和miR-653-5p均含來(lái)自SK-N-SH和SH-SY5Y提取物的Ago2沉淀(圖4C)。 另外，miR-653-5p與SNHG7之間存在一定的相互作用并受其影響，其促進(jìn)作用可被SNHG7抑制(圖4D)。

為了進(jìn)一步證實(shí)SNHG7與miR-653-5p的相關(guān)性，本研究分析了它們?cè)贜B組織中的表達(dá)情況。 qRT-PCR結(jié)果顯示，與非腫瘤組織相比，miR-653-5p在NB組織中表達(dá)下調(diào)(圖4E)。Spearman相關(guān)分析顯示，miR-653-5p表達(dá)與SNHG7的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.281，P=0.007)，詳見(jiàn)圖4F。

圖4 SNHG7在NB細(xì)胞中與miR-653-5p結(jié)合的相關(guān)結(jié)果圖 注 A：miR-653-5p與SNHG7序列的預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)； B：熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定用于檢測(cè)轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞的熒光素酶活性； C：RIP法檢測(cè)珠子中SNHG7和miR-653-5p的qRT-PCR結(jié)果； D：采用qRT-PCR檢測(cè)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中RNA下拉法拉低復(fù)合物中miR-653-5p的相對(duì)表達(dá)情況； E：NB組織中miR-653-5p表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果； F：Spearman相關(guān)顯示NB組織中SNHG7與miR-653-5p呈負(fù)相關(guān)(**代表P<0.01)

六、STAT2是受SNHG7和SNHG7/miR-653-5p 軸調(diào)控的靶基因

使用StarBase 2.0發(fā)現(xiàn)，STAT2是miR-653-5p的一個(gè)假定靶點(diǎn)(圖5A) 。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)顯示，miR-653-5p模擬物可降低STAT2-WT的熒光素酶活性，而其他組的熒光素酶活性變化不大，說(shuō)明miR-653-5p與STAT2-WT存在特異性的相互作用(圖5B)。Spearman相關(guān)分析表明,STAT2表達(dá)與miR-653-5p水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.295，P=0.004)，而與NB組織中的SNHG7表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.296，P=0.004),見(jiàn)圖5C和5D 。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明SNHG7通過(guò)調(diào)節(jié)miR-653-5P/STAT2途徑在NB進(jìn)展中發(fā)揮作用。

圖5 STAT2是SNHG7調(diào)控miR-653-5p的靶點(diǎn)，以及SNHG7/miR-653-5p/STAT2軸在NB進(jìn)展中的作用 注 A：miR-653-5p與STAT2序列的預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)； B：采用HEK-293T細(xì)胞熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miR-653-5p與STAT2的結(jié)合； C、D：Spearman相關(guān)分析揭示了STAT2的表達(dá)與NB組織中miR-653-5p或SNHG7水平存在相關(guān)性

討 論

越來(lái)越多的證據(jù)表明，lncRNA在多種惡性腫瘤(包括神經(jīng)母細(xì)胞瘤)的進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用。 例如，新型長(zhǎng)非編碼RNA的linc-NeD125攜帶miR-125b-1，并負(fù)向控制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖[20]。CASC15在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中起腫瘤抑制劑的作用[21]。SNHG7是一種lncRNA，已被鑒定為幾種癌癥的致癌基因[12,18,22]。然而，其在神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)展中的作用和調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。 本研究發(fā)現(xiàn)NB組織和細(xì)胞系中，SNHG7的表達(dá)水平顯著升高，而SNHG7的表達(dá)具有重要的臨床意義，可以預(yù)測(cè)NB患兒的預(yù)后。 隨后，細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SNHG7的下調(diào)會(huì)抑制NB細(xì)胞增殖，并抑制細(xì)胞遷移、侵襲。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，與miRNA序列互補(bǔ)的lncRNA能夠抑制miRNA的表達(dá)和活性[19,23]。例如，長(zhǎng)鏈非編碼RNA GAPLINC作為miR-378分子的靶基因可通過(guò)海綿作用調(diào)控MAPK1表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖[24]。LncRNA CCAT1通過(guò)下調(diào)miR-143在FTC-133甲狀腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[25]。本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，miR-653-5p與SNHG7和STAT2含有預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)，提示SNHG7通過(guò)類似機(jī)制調(diào)控神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)展。本研究證實(shí)了miR-653-5p與SNHG7或STAT2的相互作用。此外，STAT2表達(dá)與miR-653-5p水平呈負(fù)相關(guān)，但與NB組織中SNHG7水平呈正相關(guān)。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(signal transduction and activator of transcription， STATs)是JAKs-STATs信號(hào)通路中常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子。經(jīng)常參與多種細(xì)胞因子信號(hào)通路的調(diào)控[26]。STAT2是著名的STAT家族蛋白之一，在調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄方面發(fā)揮重要作用[27]。諸多文獻(xiàn)報(bào)道STAT2參與了某些癌癥的發(fā)生[28-29]。例如，與宮頸炎和發(fā)育不良組織相比，宮頸癌組織中STAT2上調(diào)[28]。與這些研究一致，本研究發(fā)現(xiàn)NB組織中STAT2水平較非腫瘤組織顯著上調(diào)，說(shuō)明STAT2與NB腫瘤進(jìn)展有關(guān)。此外，STAT2過(guò)表達(dá)和miR-653-5p抑制shSNHG7誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的恢復(fù)表明，SNHG7通過(guò)調(diào)控miR-653-5p/STAT2通路參與NB的進(jìn)展。

綜上所述，本研究初步闡明了SNHG7-miR-653-5p-STAT2信號(hào)通路在調(diào)節(jié)NB進(jìn)展中的作用，為進(jìn)一步探索新的NB治療靶點(diǎn)和預(yù)后生物標(biāo)志物提供了依據(jù)，后續(xù)會(huì)通過(guò)蛋白印跡及免疫組化等試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證此實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，未來(lái)還需要更多的NB動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及臨床實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)本研究結(jié)果。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明文獻(xiàn)檢索為楊檳伊、陳偉明，論文調(diào)查設(shè)計(jì)為楊檳伊、劉小梅、陳鑫，數(shù)據(jù)收集與分析為楊檳伊、范煦、陳偉明、李富江、陳鑫、劉小梅，論文結(jié)果撰寫(xiě)為楊檳伊、陳偉明、范煦、鹿洪亭，論文討論分析為楊檳伊，劉小梅，鹿洪亭