DMDC對(duì)假單胞菌浮游菌和被膜菌的殺菌效果及其應(yīng)用

李春柳， 劉鑫鑫， 方金玉， 朱軍莉， 陸海霞

（浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院 浙江省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 杭州310018）

我國(guó)是果蔬生產(chǎn)大國(guó)， 蔬菜年產(chǎn)量8 億多t，果品年產(chǎn)量近3 億t。 然而，由于采后流通保鮮及加工技術(shù)發(fā)展相對(duì)滯后，果蔬在運(yùn)輸、儲(chǔ)藏和銷售過(guò)程中未經(jīng)過(guò)深加工處理， 只做簡(jiǎn)單的保鮮處理即上架銷售，很容易引起表面破損汁液流出，易受到微生物的污染。研究顯示，我國(guó)每年因腐敗損失的果蔬數(shù)量約占總產(chǎn)量20%以上[1]，不僅造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，還帶來(lái)嚴(yán)重的環(huán)境污染。隨著社會(huì)生活水平的提高，人們對(duì)果蔬品質(zhì)更加關(guān)注，探索一種安全、快捷的殺菌方式，提供更高品質(zhì)的生鮮果蔬，延長(zhǎng)其貨架期十分必要。

新鮮果蔬表面存在多種微生物，如細(xì)菌、酵母菌和霉菌， 植物表面的細(xì)菌大多為革蘭氏陰性菌[2]。 假單胞菌屬隸屬于革蘭氏陰性菌，該菌屬與環(huán)境、醫(yī)學(xué)、生態(tài)以及動(dòng)植物等都密切相關(guān)，是自然界微生物分布廣泛的細(xì)菌之一， 部分假單胞菌屬于植物病原菌，侵染范圍很廣，可以危害多種農(nóng)作物，導(dǎo)致果蔬腐爛[3]。研究表明[4-5]，多種食源性致病菌和腐敗菌容易在食品表面和加工環(huán)境形成生物被膜。生物被膜是微生物黏附于物體表面，通過(guò)分泌多糖、蛋白質(zhì)、核酸等而形成的具有三維結(jié)構(gòu)的胞外聚合物， 細(xì)菌被膜菌是微生物為適應(yīng)生存環(huán)境黏附并包被于自體產(chǎn)生的黏性聚合基質(zhì)中，形成的一種與浮游細(xì)胞生長(zhǎng)方式不同的群體[6]。假單胞菌能夠在果蔬表面及其加工、 運(yùn)輸和儲(chǔ)藏過(guò)程中， 通過(guò)分泌胞外復(fù)合物在其附著表面形成菌膜。 菌膜的形成能夠顯著增強(qiáng)其對(duì)外部環(huán)境應(yīng)激和抑菌劑的抵抗力。

二甲基二碳酸鹽 （Dimethyl dicarbonate，DMDC）常被用作果蔬飲料中的防腐劑，又名維果靈，它與微生物體內(nèi)的酶系基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，通過(guò)改變酶的活性，有效抑制微生物的生長(zhǎng)。DMDC 在我國(guó)食品飲料中規(guī)定添加的最大質(zhì)量濃度為250 mg/L[7]，由于其能夠快速殺滅細(xì)菌、酵母等微生物，無(wú)不良?xì)馕叮?并且能在短時(shí)間內(nèi)分解成二氧化碳和甲醇，因此DMDC 是一種綠色高效的抑菌劑[8]。目前DMDC 多應(yīng)用在果酒飲料中，如在茶枝柑果酒發(fā)酵中添加DMDC 和巴氏殺菌均能有效殺滅污染的雜菌，提高乙醇得率和糖的有效利用率[9]。 巨峰冰葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中，DMDC 能夠有效抑制發(fā)酵過(guò)程中微生物的生長(zhǎng)，減少還原糖、總糖的無(wú)效消耗和總酸的生成與積累， 提高葡萄酒發(fā)酵的酒精度[10]。 DMDC 殺菌效果好，安全、快速，然而目前其對(duì)果蔬腐敗菌及生物被膜的清除鮮有研究報(bào)道。 本研究將比較DMDC 對(duì)食源性致腐、致病微生物的殺菌作用，重點(diǎn)分析DMDC 對(duì)假單胞菌的浮游菌和被膜菌的殺菌效果， 并將其應(yīng)用于生菜和番茄中，評(píng)價(jià)DMDC 的殺菌效果，以期探索一種簡(jiǎn)便、快捷的清洗方式，延長(zhǎng)蔬菜貨架期。

1 材料與方法

1.1 菌種與試劑

1.1.1 菌株 熒光假單胞菌 （Pseudomonas fluorescens）PF07 和隆德假單胞菌（Pseudomonas lundensis）PL28 分別是從生鮮腐敗食品中分離得到，細(xì)菌經(jīng)過(guò)純化和鑒定之后保存于本實(shí)驗(yàn)室，其16S rDNA 的NCBI 登錄號(hào)分別為KU173832 和MK041549；單增李斯特菌ATCC19115、鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、金黃色葡萄球菌ATCC 6538購(gòu)于中國(guó)微生物菌種保存中心。

1.1.2 試劑 二甲基二碳酸鹽（DMDC），SIGMA公司；胰酪大豆胨脂培養(yǎng)基（TSA）、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基TSB、孟加拉紅（虎紅）培養(yǎng)基，杭州微生物試劑有限公司； 假單胞菌CFC 選擇性培養(yǎng)基，青島海博生物技術(shù)有限公司；API ZYM 酶活性試劑條，法國(guó)生物梅里埃公司；XTT 細(xì)胞活性測(cè)定試劑盒，凱基生物。

1.2 主要儀器設(shè)備

LRH-250A 生化培養(yǎng)箱， 上海一恒科技有限公司；SIGMA3-30K 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，SIGMA公司；Infinite 200 酶標(biāo)儀， 瑞士Tecan 公司；Zeiss LSM 710 共聚焦掃描顯微鏡， 德國(guó)蔡氏公司；CR400 色差儀，杭州柯盛行儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌株活化 將保存在-80 ℃冰箱的假單胞菌PF07 和PL28、 單增李斯特菌、 鼠傷寒沙門氏菌、 金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于TSB 培養(yǎng)基中，30 ℃過(guò)夜活化兩次，備用。

1.3.2 DMDC 對(duì)5 種腐敗菌和致病菌的體外殺菌效果測(cè)定 將過(guò)夜活化的單增李斯特菌、 鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、熒光假單胞菌和隆德假單胞菌震蕩均勻后， 取100 μL 菌液加入PBS中，使菌體濃度達(dá)到107CFU/mL，添加DMDC 的質(zhì)量濃度為250 mg/L， 在30 ℃下分別處理0，3，5 min，取樣、稀釋，平板計(jì)數(shù)。 進(jìn)一步向活化和稀釋的熒光和隆德假單胞菌中分別添加50，100，150，200，250 mg/L DMDC，處理0，1，3 min 后，平板計(jì)數(shù)。

1.3.3 胞內(nèi)酶活性測(cè)定 取5 mL 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液于10 mL 離心管中，8 000 r/min 離心10 min，去上清液， 用無(wú)菌生理鹽水洗滌1 次， 重懸稀釋至108CFU/mL，處理組用250 mg/L 的DMDC 處理20 min，未處理組為對(duì)照。采用API ZYM 培養(yǎng)條檢測(cè)酶活，具體步驟參照試劑盒使用說(shuō)明書。加入菌體后置于28 ℃培養(yǎng)箱中靜置4 h 后取出， 加入表面活性劑ZYM A 和顯色劑ZYM B， 觀察每孔的顏色變化。

1.3.4 被膜菌的活菌計(jì)數(shù) 將過(guò)夜活化的熒光假單胞菌和隆德假單胞菌以1‰接種量分別接種于TSB 培養(yǎng)基中，為，放入滅菌的不銹鋼片（1 cm×1 cm），在28 ℃靜置培養(yǎng)，使菌體在不銹鋼片表面形成被膜菌。 培養(yǎng)24 h 時(shí)間后取出不銹鋼片，用無(wú)菌PBS 中沖洗3 次后除去表面浮游菌。 向含有被膜菌的不銹鋼片上加入250 mg/L DMDC，處理0，5，10，15 min 后，加入無(wú)菌玻璃珠震蕩，稀釋，平板計(jì)數(shù)。

1.3.5 XTT 法檢測(cè)被膜菌的細(xì)胞活性 將使用TSB 稀釋后的過(guò)夜活化菌液（約104CFU/mL）加入96 孔板中，每孔100 μL，在28 ℃培養(yǎng)24 h。 到達(dá)培養(yǎng)時(shí)間后，除去菌液，用無(wú)菌生理鹽水輕輕洗去表面浮游菌，處理組每孔加入100 μL 質(zhì)量濃度為50 mg/L 的DMDC， 分別處理5，10，15 min， 除去DMDC， 每孔加入100 μL 無(wú)菌生理鹽水和50 μL配制好的XTT 檢測(cè)工作液。37 ℃下培養(yǎng)1～4 h，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450 nm 處測(cè)每孔的OD 值。1.3.6 CLSM 顯微鏡觀察生物被膜 將過(guò)夜活化的熒光假單胞菌和隆德假單胞菌分別接種于3 mL TSB 液體培養(yǎng)基中，接種量為1‰，在28 ℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)24 h。到達(dá)培養(yǎng)時(shí)間后，去除液體培養(yǎng)基， 用無(wú)菌生理鹽水輕輕洗去表面液體培養(yǎng)基，然后用250 mg/L 的DMDC 分別處理0，5，10，15 min，除去DMDC，在平皿底部均勻滴加syto9 染料和PI 染料，室溫條件下避光處理15 min，使用CLSM 觀察生物被膜。

1.3.7 DMDC 對(duì)生菜和西紅柿中的殺菌效果及色澤影響 取若干新鮮完好的生菜葉和小西紅柿（大小均勻、質(zhì)量相等）。 以滅菌水浸泡為對(duì)照組，處理組分別在含有250 mg/L DMDC 中浸泡5，10，15 min，取樣，自然晾干10 min 后無(wú)菌取樣25 g，拍打均質(zhì)、稀釋，分別用TSB、CFC 選擇性培養(yǎng)基和孟加拉紅平板培養(yǎng)菌落總數(shù)、 假單胞菌和霉菌酵母，置于28 ℃下培養(yǎng)2～5 d 計(jì)數(shù)。色差采用色差儀直接測(cè)量， 每組樣品在相同處理?xiàng)l件下測(cè)3次。

1.3.8 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)均設(shè)計(jì)3 或5 個(gè)平行試驗(yàn)， 采用Microsoft Excel 2010 和Origin 9.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖， 并利用SPSS 19.0 軟件的AVOVA 進(jìn)行方差分析，P＜0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）。

2 結(jié)果與討論

2.1 DMDC 對(duì)5 種食源性腐敗菌和致病菌的殺菌效果

DMDC 對(duì)單增李斯特菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、 熒光假單胞菌和隆德假單胞菌5種菌在PBS 中的殺菌效果如圖1 所示。 250 mg/L的DMDC 對(duì)5 種菌都表現(xiàn)出殺菌作用，不同細(xì)菌對(duì)DMDC 的敏感性具有差異性。 單增李斯特菌對(duì)DMDC 的耐受性最強(qiáng)， 當(dāng)處理5 min 時(shí)僅減少了0.66 lg（CFU/mL），而鼠傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌在5 min 時(shí)分別減少了2.96 lg（CFU/mL）和2.48 lg（CFU/mL），熒光假單胞菌和隆德假單胞菌對(duì)DMDC 的敏感性最高， 處理3 min 就未檢測(cè)到活菌生長(zhǎng)。在相同的處理?xiàng)l件下，DMDC 對(duì)假單胞菌的殺菌效果高于其它3 種細(xì)菌。相似地，劉紅艷等[11]使用250 mg/L DMDC 處理葡萄醪，使總菌、霉菌、酵母、乳酸菌和大腸菌活菌數(shù)分別減少1.89，0.18，1.47，0.20，1.89 lg（CFU/mL）。 韓波[12]報(bào)道DMDC 在極低濃度下對(duì)酵母菌、霉菌和細(xì)菌具有高效廣譜的殺菌效果。

圖1 DMDC 對(duì)5 種食源性細(xì)菌在PBS 中的殺菌效果Fig.1 Bactericidal effect of DMDC in PBS on five foodborne bacteria

2.2 DMDC 對(duì)假單胞菌的體外殺菌作用

不同質(zhì)量濃度DMDC 對(duì)熒光假單胞菌和隆德假單胞菌的殺菌作用如表1 所示。 熒光假單胞菌和隆德假單胞菌在50 mg/L DMDC 作用下，細(xì)菌減少緩慢；高于100 mg/L DMDC 時(shí)，兩種假單胞菌活菌數(shù)顯著降低； 兩種假單胞菌在200 mg/L DMDC 處理10 min 后都未檢測(cè)到活菌，250 mg/L作用5 min 即可將兩種菌全部殺滅。 可見， 隨著DMDC 質(zhì)量濃度增加，DMDC 對(duì)兩種假單胞菌的殺菌能力顯著增加，呈現(xiàn)出質(zhì)量濃度依賴性。相似地，章亞?wèn)|等[13]報(bào)道稱，隨著DMDC 在溶液中的處理濃度增加，殺菌效果顯著增加，而增幅并非完全呈正比例關(guān)系。 王威利[14]采用不同濃度DMDC 處理荔枝汁，隨著DMDC 濃度增加，殺菌效率顯著增強(qiáng)。 Gouma 等[15]報(bào)道稱，UV-C 處理前添加75 mg/L DMDC，短時(shí)間內(nèi)即可有效殺滅大腸桿菌。

表1 不同質(zhì)量濃度DMDC 對(duì)兩種假單胞菌在PBS 中的殺菌作用Table 1 Bactericidal effect of DMDC at the different mass concentration on two Pseudomonas strains in PBS

2.3 DMDC 對(duì)假單胞菌胞內(nèi)酶活性的影響

經(jīng)DMDC 處理后，熒光假單胞菌兩種胞內(nèi)酶出現(xiàn)明顯變化，其中白氨酸芳氨酶（6）失去酶活性，萘酚-AS-BI-磷酸水解酶（12）活性顯著降低。相似地，隆德假單胞菌處理前、后白氨酸芳氨酶活性（6）喪失，萘酚-AS-BI-磷酸水解酶（12）活性下降。結(jié)果表明，DMDC 主要通過(guò)抑制假單胞菌兩種胞內(nèi)酶活性， 擾亂細(xì)胞內(nèi)正常代謝， 影響細(xì)菌活性。 類似地，DMDC 處理大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、 釀酒酵母和明串珠菌后也可以看出多種酶活性發(fā)生變化，從而導(dǎo)致微生物的失活[12，16]。 研究表明，DMDC 能夠殺滅微生物與其細(xì)胞內(nèi)的酶被焦碳酸基團(tuán)修飾失活有很大關(guān)系，酶蛋白內(nèi)的胺基、咪唑基、 羥基等極易和焦碳酸基團(tuán)發(fā)生親核反應(yīng)[17]。Davidson 等[18]通過(guò)焦碳酸基團(tuán)與部分氨基酸進(jìn)行反應(yīng)， 證實(shí)了細(xì)胞中的關(guān)鍵酶蛋白（如甘油醛-3-磷酸脫氫酶、乙醇脫氫酶）的組氨酸咪唑基部位甲氧基發(fā)生羧化反應(yīng)， 產(chǎn)生甲氧甲酰咪唑基團(tuán)，酶的構(gòu)象發(fā)生改變，活性消失，從而導(dǎo)致微生物的死亡。

圖2 DMDC 對(duì)熒光假單胞菌和隆德假單胞菌胞內(nèi)酶活的影響Fig.2 Effect of DMDC on intracellular enzyme activities of P. fluorescein and P. lund

2.4 DMDC 對(duì)假單胞菌成熟生物被膜的清除作用

假單胞菌為強(qiáng)的被膜形成菌株，DMDC 對(duì)兩種假單胞菌被膜菌的清除作用如圖3 所示。 熒光和隆德假單胞菌經(jīng)24 h 培養(yǎng)后形成生物被膜，其活菌數(shù)分別為7.37 lg（CFU/cm2）和7.04 lg（CFU/cm2）。當(dāng)250 mg/L DMDC 處理5 min 時(shí)，熒光和隆德假單胞菌被膜菌分別減少3.23 lg（CFU/cm2）和2.64 lg（CFU/cm2），而10 min 后兩種被膜菌分別繼續(xù)減少1.04 lg（CFU/cm2）和0.99 lg（CFU/cm2），處理至15 min 兩種被膜菌減少緩慢（圖3a）。 進(jìn)一步采用XTT 法分析250 mg/L DMDC 處理下熒光和隆德假單胞菌被膜菌細(xì)胞活力的變化（圖3b）。當(dāng)DMDC 處理5 min 時(shí)， 兩種假單胞菌細(xì)胞活力迅速降低，OD 值分別下降了0.92 和0.55，處理10 min 后OD 值分別繼續(xù)下降0.10 和0.21。 可見，DMDC 處理顯著降低假單胞菌被膜菌的數(shù)量和細(xì)胞活性，然而隨著DMDC 處理的時(shí)間延長(zhǎng)，殺菌速率減慢，生物被膜活菌計(jì)數(shù)和XTT 法結(jié)果較一致。

圖3 DMDC 對(duì)假單胞菌的成熟生物被膜菌體活菌數(shù)（a）和活性(b)的影響Fig.3 Effect of DMDC on the bacterial number （a） and activity （b） in matured biofilm of Pseudomonas

吳曉曉等[19]通過(guò)XTT 法測(cè)得大蒜素的濃度與OD450nm值呈反比， 低濃度大蒜素處理老化菌株也可以明顯抑制其生物被膜的生長(zhǎng)。 XTT 僅反應(yīng)活菌的代謝，如XTT 法檢測(cè)茶多酚和葡萄籽提取物能夠降低銅綠假單胞菌的活力，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，抑制生物被膜菌的活力逐步增強(qiáng)[20]。 結(jié)果顯示，250 mg/L DMDC 對(duì)熒光假單胞菌和隆德假單胞菌的被膜菌有較好的清除作用， 并且相對(duì)于浮游菌， 假單胞菌被膜菌對(duì)DMDC 具有較強(qiáng)的耐受性。 張麗蓉等[21]用含800 mg/L 的過(guò)氧乙酸消毒劑和150 mg/L 的二氧化氯消毒劑處理鮑曼不動(dòng)桿菌、 金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌游離菌時(shí)發(fā)現(xiàn)， 形成生物被膜的細(xì)菌對(duì)消毒劑抗性都比游離菌強(qiáng)。

2.5 DMDC 對(duì)假單胞菌成熟被膜結(jié)構(gòu)的影響

D MDC 處理后， 兩種假單胞菌生物被膜的結(jié)構(gòu)明顯破壞，處理5 min 后被膜中的活細(xì)菌明顯降低，死細(xì)胞增加， 被膜厚度分別降低到40 μm 和30 μm。 當(dāng)樣品處理10 min 時(shí)生物被膜厚度降低到16 μm，而處理15 min 后樣品中存在大量死菌，被膜厚度顯著降低。 可見，隨著DMDC 處理時(shí)間的延長(zhǎng)，兩種假單胞菌生物被膜結(jié)構(gòu)被破壞，被膜厚

采用CLSM 觀察兩種假單胞菌在DMDC 處理前、后的生物被膜三維結(jié)構(gòu)的變化，如圖4 和圖5所示。 熒光假單胞菌和隆德假單胞菌經(jīng)24 h 培養(yǎng)后形成致密的生物被膜， 在三維和二維結(jié)構(gòu)中布滿強(qiáng)烈的綠色熒光信號(hào)，兩種細(xì)菌菌體分布密集，被膜厚度分別為80 μm 和75 μm。 經(jīng)250 mg/L度降低，表現(xiàn)良好地清除效果。Liu 等[22]通過(guò)CLSM也觀察到磺化殼聚糖和殼聚糖鹽酸鹽對(duì)銅綠假單胞菌的生物被膜有明顯的抑制作用， 且呈現(xiàn)濃度依賴性。

圖4 CLSM 觀察DMDC（250 mg/L）處理對(duì)熒光假單胞菌和隆德假單胞菌生物被膜結(jié)構(gòu)的影響Fig.4 Effect of DMDC （250 mg/L） on the biofilm structures of P. fluorescens and P. lund observed by CLSM

圖5 DMDC（250 mg/L）處理對(duì)兩種假單胞菌生物被膜厚度的影響Fig.5 Effects of DMDC （250 mg/L） treatment on biofilm thickness of the two Pseudomonas

2.6 DMDC 對(duì)兩種生鮮蔬菜品質(zhì)的影響

鮮切果蔬表面微生物多為腐敗菌， 如歐文氏菌、假單胞菌屬于優(yōu)勢(shì)菌群。當(dāng)果蔬表面微環(huán)境改變時(shí)，還會(huì)導(dǎo)致梭狀芽孢桿菌、李斯特菌、耶爾森氏菌等致病菌的加速生長(zhǎng)，并產(chǎn)生毒素，危及人們的身體健康甚至生命[23]。 DMDC 對(duì)西紅柿和生菜兩種蔬菜表面殺菌效果如表2 所示，DMDC 對(duì)兩種蔬菜表面的菌落總數(shù)、假單胞菌數(shù)、霉菌酵母總數(shù)表現(xiàn)相似的殺菌作用， 隨質(zhì)量濃度的增加殺菌效果增強(qiáng)。 在250 mg/L DMDC 處理15 min 時(shí)，西紅柿菌落總數(shù)降低2.6 lg（CFU/g），假單胞菌降低1.98 lg（CFU/g）；生菜表面的菌落總數(shù)和假單胞菌總數(shù)分別降低2.59 lg（CFU/g）和1.73 lg（CFU/g）。相對(duì)于細(xì)菌，DMDC 對(duì)蔬菜中真菌的殺菌效果顯著，經(jīng)150 mg/L DMDC 處理5 min 后西紅柿和生菜中均未檢測(cè)出霉菌和酵母。另外，在相同質(zhì)量濃度的處理?xiàng)l件下，生菜的殺菌速率低于西紅柿，可能是西紅柿表面較光滑，更容易殺滅細(xì)菌。陳夢(mèng)曦等[24]通過(guò)臭氧消毒柜對(duì)不同載體表面的消毒效果， 也發(fā)現(xiàn)消毒柜對(duì)光滑硬質(zhì)表面的細(xì)菌更容易殺滅。 Chen 等[25]也報(bào)道DMDC 對(duì)大白菜不同組織的滅菌效果有差異，DMDC 處理白菜莖和葉時(shí)菌落總數(shù)分別降低4.49 lg（CFU/g）和4.45 lg（CFU/g），而在處理花和花蕾時(shí)，菌落總數(shù)僅降低2.74 lg（CFU/g）。 研究還發(fā)現(xiàn)， 果蔬表面的假單胞菌對(duì)DMDC 比體外PBS 中的假單胞菌具有更強(qiáng)耐受性， 在250 mg/L DMDC 處理15 min 后兩種蔬菜表面仍能檢測(cè)少量的假單胞菌， 可能是果蔬表面的細(xì)菌多為被膜菌有關(guān)。 Marlies 等[26]和Tamara等[27]報(bào)道細(xì)菌主要以生物膜的形式在非生物接觸面生長(zhǎng)，其比浮游細(xì)胞或菌落更具抵抗力。

表2 不同質(zhì)量濃度DMDC 處理對(duì)西紅柿和生菜中微生物總數(shù)的影響Table 2 Effects of DMDC at different mass concentrations on total number of microorganisms in tomato and lettuce

DMDC 對(duì)西紅柿和生菜色澤的影響如圖6 所示。 西紅柿和生菜在15 min 內(nèi)樣品色澤無(wú)顯著性變化，ΔE 值在15 min 內(nèi)均無(wú)顯著性差異，表明經(jīng)DMDC 短時(shí)間處理，對(duì)蔬菜的色澤無(wú)顯著性影響。DMDC 有效地抑制菜心中微生物的生長(zhǎng)繁殖，延緩鮮切菜心的衰老和腐敗變質(zhì)， 保持了鮮切菜心的外觀品質(zhì)[28]。

圖6 DMDC（250 mg/L）對(duì)西紅柿和生菜色澤的影響Fig.6 Effects of DMDC （250 mg/L） on color of tomato and lettuce

3 結(jié)論

DMDC 是一種綠色高效的果汁飲料防腐劑。研究發(fā)現(xiàn)，DMDC 對(duì)生鮮食品中的優(yōu)勢(shì)腐敗菌熒光假單胞菌和隆德假單胞菌具有良好的殺菌作用，其顯著降低胞內(nèi)的白氨酸芳胺酶和萘酚-ASBI-磷酸水解酶的活性，有效地殺滅兩種假單胞菌的浮游菌， 殺菌效果呈現(xiàn)質(zhì)量濃度和時(shí)間的依賴性。 并且高質(zhì)量濃度的DMDC 還能夠顯著清除兩種假單胞菌的被膜菌，降低細(xì)胞活性、增加死細(xì)胞數(shù)量，破壞被膜結(jié)構(gòu)。DMDC 處理在不影響蔬菜色澤條件下，能有效的降低菌落總數(shù)、假單胞菌數(shù)，殺滅霉菌酵母。 DMDC 有望成為一種新型的果蔬清洗劑， 降低果蔬表面的初始菌落和腐敗假單胞菌，提高生鮮蔬菜的品質(zhì)。