蘋果中腐霉利殘留快檢測定及方法評估

◎ 李 娟，高 華，陳海元，譚慧林

（阿克蘇地區(qū)食品安全檢測中心，新疆 阿克蘇 843000）

腐霉利是二甲酰亞胺類殺菌劑，是一種新型殺菌劑，也是低毒性殺菌劑，具有安全、低價、效果好等優(yōu)勢，因此廣泛應用于蔬菜和水果的栽培中，防治灰霉病和菌核病。腐霉利不規(guī)范使用會在植物中富集，長期暴露會對人體生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響，美國環(huán)境保護署（Environmental Protection Agency，EPA）認為，腐霉利能引發(fā)人體雄激素依賴組織發(fā)生組織學變化，或?qū)ζ渌愃苾?nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生負面影響，嚴重影響人類健康[1]；腐霉利對土壤微生物的能量合成、DNA合成、蛋白質(zhì)合成等多種生理功能都有負面影響，且腐霉利還會增加土壤中致病菌毒力因子基因的豐度，對環(huán)境健康構(gòu)成一定風險[2]。因此，腐霉利殘留的測定對人們的健康和保護環(huán)境具有非常重要的意義。目前，腐霉利殘留的檢測主要利用熒光光譜法、高效液相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等，這些方法具有選擇性好、靈敏度及準確度高的優(yōu)點，但存在耗時長、出結(jié)果慢等特點；快檢法樣品前處理簡單，結(jié)果分析準確快速，攜帶方便，可隨時隨地進行現(xiàn)場實時檢測。

國際上的快檢產(chǎn)品評價體系已經(jīng)發(fā)展得比較完善，但國內(nèi)快檢產(chǎn)品評價體系剛剛起步，存在質(zhì)量參差不齊、穩(wěn)定性不足、靈敏度偏低、重現(xiàn)性差等缺點，原食品藥品監(jiān)督管理總局印發(fā)的《食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范》為快檢試劑盒的評估提供了綱領(lǐng)性文件，本研究以《食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范》為依據(jù)，旨在為腐霉利的殘留快篩提供技術(shù)借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗所用蘋果樣品均采購于阿克蘇市銷售場所，均為阿克蘇市當?shù)靥O果。腐霉利標準物質(zhì)（濃度為1 000 μg·mL-1），北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；乙腈（色譜純）、正己烷（色譜純），北京邁瑞達科技有限公司；腐霉利快檢試劑盒，均采用競爭法免疫膠體金檢測技術(shù)，為避免評價結(jié)果作為廠家宣傳工具，簡稱為試劑盒A、試劑盒B、試劑盒C。

1.2 儀器與設備

GC 2010 Pro氣相色譜儀，日本島津；NNW弗羅里矽柱，上海納諾微新材料科技有限公司；高速勻漿機、渦旋儀，艾卡（廣州）儀器設備有限公司；氮吹儀，上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

取蘋果樣品2.5 kg，縮分后切碎，充分混勻后粉碎，制成待測樣，放入分裝容器中，于-20 ℃下進行保存，實驗備用。

1.3.2 測定方法

按照行業(yè)標準《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）對蔬菜和水果中有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多殘留的測定要求，對待測樣品進行提取、凈化，并采用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進行腐霉利含量的測定。

1.3.3 色譜條件

采用1.0 m內(nèi)徑的預柱和100%聚甲基硅氧烷分析柱；進樣口溫度200 ℃，檢測器溫度320 ℃；載氣為純度≥99.999%、流速為1 mL·min-1的氮氣，輔助氣為純度≥99.999%、流速為60 mL·min-1的氮氣；分流進樣，分流比為10∶1；進樣量為1.0 μL。

1.3.4 快檢試劑盒測定

分別按照3種試劑盒的說明書要求進行具體操作。

（1）試劑盒A。稱?。?±0.1）g待測樣本于樣品杯中（1 cm2左右，切勿將表皮切太碎，以免影響檢測結(jié)果），加入5 mL配套腐霉利稀釋液，手搖混勻30 s，放置于水平實驗臺上，充分提取1 min，此樣本杯內(nèi)混合液體即為前處理待測液。從包裝袋中取出檢測卡，水平放置于觀察者正面，用移液器吸取80 μL稀釋后的前處理待測液，垂直緩慢滴加到檢測卡加樣孔（S）中，液體流動時開始計時，反應5～6 min，根據(jù)示意圖判定結(jié)果，其他時間判定無效。

（2）試劑盒B。將樣品剪成1 cm左右碎片，稱取1.0 g于離心管中，加入6 mL腐霉利提取液，手動振蕩30 s，靜置1 min后得到樣品待檢液。使用前將檢測卡和待測樣本溶液恢復至室溫。從包裝袋中取出試紙條，水平放置，取樣品待測液70 μL垂直滴于加樣孔中，加樣后開始計時，10 min后即可觀察結(jié)果，超過12 min后判讀無效。

（3）試劑盒C。檢測前將樣品剪碎成小于1 cm的碎片或細碎小丁，稱取1 g剪碎的樣品于15 mL離心管中，加入6 mL腐霉利稀釋液，蓋上蓋子，手動振蕩30 s，靜置1 min。從包裝袋中取出檢測卡，將檢測卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時，10 min后即可觀察結(jié)果。

（4）加標測定。分別取腐霉利終濃度為0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.3 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的加標樣品，分別用3種快檢試劑盒按操作說明進行檢測，并判斷檢測結(jié)果。

1.4 數(shù)據(jù)處理

依據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范》計算實驗所用試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率、顯著性差異和相對準確度，使用Mcirosoft Excel 2010對數(shù)據(jù)進行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘋果中腐霉利農(nóng)藥殘留的測定結(jié)果

采用行業(yè)標準《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）對所選樣品進行腐霉利殘留的測定，結(jié)果均顯示未檢出，見表1，說明在市場銷售環(huán)節(jié)的蘋果沒有腐霉利殘留，該結(jié)果與腐霉利行業(yè)標準檢測結(jié)果一致，未出現(xiàn)檢測結(jié)果的偏離。

表1 不同批次蘋果樣本中腐霉利殘留檢測情況表

2.2 快檢試劑盒的評估

根據(jù)3家快檢試劑盒提供信息檢出限均為0.2 mg·kg-1，因此規(guī)定≥ 0.2 mg·kg-1即為陽性樣品，＜0.2 mg·kg-1為陰性樣品。對3家快檢試劑盒添加不同濃度的加標基質(zhì)進行檢測，結(jié)果如表2所示，表明3家快檢試劑盒在檢出限臨界值時的檢測結(jié)果存在差異。

表2 不同腐霉利加標濃度快檢結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

本研究采用的3家試劑盒檢出限規(guī)定均在腐霉利濃度為0.2 mg·kg-1以上顯色，但在本次研究驗證過程中，試劑盒A和試劑盒C在0.3 mg·kg-1以上才顯色，較說明書規(guī)定的檢出限高；試劑盒B在0.1 mg·kg-1濃度顯色，導致假陽性率偏高。通過本次結(jié)果也可以看出，試劑盒B的靈敏度較其他兩者高，但其容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，試劑盒A和試劑盒C的靈敏度相對較低，容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果，這與蔡新發(fā)、劉婷等[3-4]的研究結(jié)果一致。羅俊霞等[5]利用6種商品化農(nóng)殘試劑盒對5種氨基酸甲酯類農(nóng)藥進行檢測比對，結(jié)果顯示對同一種農(nóng)藥而言，不同試劑盒的敏感性也不相同。因此，不同廠家生產(chǎn)的試劑盒效能不同，建議在使用之前對其適用性進行評價。

根據(jù)行業(yè)標準法和快檢試劑盒法對阿克蘇地產(chǎn)蘋果進行腐霉利殘留測定，結(jié)果均未檢出腐霉利殘留。通過在蘋果樣品中添加不同濃度的腐霉利標準品，結(jié)果顯示試劑盒B的靈敏度高于試劑盒A和試劑盒C，特異性較低，假陽性率高達50%，假陰性率低；3家快檢試劑盒的顯著性差異和相對準確度相同。綜上所述，腐霉利快檢試劑盒適于在基層開展蘋果中腐霉利篩查。