蘋果中啶蟲(chóng)脒殘留量快檢測(cè)定及方法評(píng)估

◎ 張健偉，高 華，牛貴洋，譚慧林

（阿克蘇地區(qū)食品安全檢測(cè)中心，新疆 阿克蘇 843000）

啶蟲(chóng)脒別名吡蟲(chóng)清，是一類新煙堿類高效殺蟲(chóng)劑，因具有廣譜、內(nèi)吸、速效、低毒、活性高、用量少和持效期長(zhǎng)等特性，在全球范圍內(nèi)應(yīng)用廣泛[1-2]。此類殺蟲(chóng)劑在瓜果蔬菜等農(nóng)作物中使用范圍廣，其在水體和土壤中的積累量逐年增加。常見(jiàn)的檢測(cè)啶蟲(chóng)脒的方法包括超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[3]、氣相色譜法[4]、超高效液相色譜法[5]等。此類方法選擇性好、靈敏度及準(zhǔn)確度高，但操作復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)。而快檢技術(shù)的可操作性較強(qiáng)，能在短時(shí)間內(nèi)快速出具檢驗(yàn)結(jié)果。

本研究以《水果、蔬菜中啶蟲(chóng)脒殘留的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 23584—2009）為參比方法，根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，對(duì)快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品進(jìn)行適用性評(píng)估，對(duì)3家公司生產(chǎn)的啶蟲(chóng)脒快檢試劑盒的特異性、靈敏度、假陰性率及假陽(yáng)性率等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，為蘋果中啶蟲(chóng)脒的快速篩查工作提供技術(shù)借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

蘋果樣品，均采購(gòu)自阿克蘇市銷售場(chǎng)所的地產(chǎn)蘋果；啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度為100 μg·mL-1）；甲醇；甲酸；乙腈；乙酸；啶蟲(chóng)脒快檢試劑盒，均采用競(jìng)爭(zhēng)法免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)，為避免評(píng)價(jià)結(jié)果成為廠家的宣傳工具，簡(jiǎn)稱為試劑盒1、試劑盒2、試劑盒3。

1.2 試劑與儀器

Waters UPLC/TQD液相色譜-質(zhì)譜儀；電子天平；高速勻漿機(jī)；渦旋儀；振蕩器；超聲波清洗器。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

取蘋果樣品2.5 kg經(jīng)縮分后將其切碎，充分混勻后粉碎，制成待測(cè)樣，放入分裝容器中，于-20 ℃下保存，實(shí)驗(yàn)備用。

1.3.2 液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定

按照《水果、蔬菜中啶蟲(chóng)脒殘留的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 23584—2009）對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行提取、凈化，并采用配有電噴霧電離源的液相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行啶蟲(chóng)脒含量的測(cè)定。檢測(cè)條件：流動(dòng)相A為甲醇、B為0.1%的甲酸水溶液；流速0.30 mL·min-1；柱溫 40 ℃；進(jìn)樣量 10 μL。

1.3.3 快檢試劑盒測(cè)定

（1）試劑盒1。稱?。?±0.1）g待測(cè)樣本表皮于樣品杯中（1 cm2左右，切勿將表皮切太碎，以免影響檢測(cè)結(jié)果），加入2 mL配套啶蟲(chóng)脒稀釋液，手搖混勻（禁止劇烈振蕩），放置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，充分提取5 min，此樣品杯內(nèi)混合液體即為前處理液。從包裝袋中取出檢測(cè)卡，水平放置于桌面上，取450 μL啶蟲(chóng)脒稀釋液到1.5 mL離心管中，加入前處理液50 μL混勻，再取540 μL啶蟲(chóng)脒稀釋液到1.5 mL離心管中，然后依次加入前處理待測(cè)液60 μL混勻此液體即為待測(cè)液。用移液器吸取80 μL的待測(cè)液，垂直緩慢地滴加到檢測(cè)卡加樣孔中，液體流動(dòng)時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，反應(yīng)5～6 min，根據(jù)示意圖判定結(jié)果，其他時(shí)間判定無(wú)效。

（2）試劑盒2。沖洗掉樣品表面的泥土，剪成1 cm2左右的碎片，稱取1.0 g于30 mL透明瓶中，加入5 mL啶蟲(chóng)脒提取液，上下翻轉(zhuǎn)振蕩搖勻50次以上，靜置2 min，待測(cè)。使用前將檢測(cè)卡和待測(cè)樣本溶液恢復(fù)至室溫。從包裝袋中取出試紙條，水平放置，用移液槍移取100 μL待測(cè)液于微孔中，反復(fù)吹打3～5次，混合均勻，靜置3 min，用一次性吸管將微孔待測(cè)液滴于加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，5～8 min即可觀察結(jié)果，超過(guò)8 min后判讀無(wú)效。

（3）試劑盒3。稱取1 g待測(cè)樣品于5 mL刻度離心管中，加入1 mL啶蟲(chóng)脒稀釋液，充分振蕩混勻2 min。使用前將檢測(cè)卡和待測(cè)樣本溶液恢復(fù)至室溫。從包裝袋中取出金標(biāo)微孔，垂直加入4滴待測(cè)液，2 min后用滴管將微孔中的待測(cè)液混勻。從包裝袋中取出檢測(cè)卡，將檢測(cè)卡平放，用一次性吸管將微孔待測(cè)液全部滴加到檢測(cè)卡加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，8～10 min即可觀察結(jié)果，10 min后判讀無(wú)效。

1.4 數(shù)據(jù)處理

依據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》計(jì)算實(shí)驗(yàn)所用試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽(yáng)性率、顯著性差異和相對(duì)準(zhǔn)確度，使用Mcirosoft Excel 2010對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘋果中啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留的測(cè)定結(jié)果

參考《水果、蔬菜中啶蟲(chóng)脒殘留的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 23584—2009）對(duì)樣品進(jìn)行啶蟲(chóng)脒殘留的測(cè)定，結(jié)果顯示未檢出，說(shuō)明在市場(chǎng)銷售環(huán)節(jié)的蘋果沒(méi)有啶蟲(chóng)脒殘留。

采用3個(gè)不同公司生產(chǎn)的快檢試劑盒對(duì)阿克蘇市市面銷售的蘋果樣品進(jìn)行啶蟲(chóng)脒殘留量的檢測(cè)。結(jié)果顯示，3種啶蟲(chóng)脒快檢試劑盒檢測(cè)結(jié)果均為陰性，該結(jié)果與啶蟲(chóng)脒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法結(jié)果一致。

2.2 快檢試劑盒的評(píng)估

2.2.1 試劑盒1的適應(yīng)性評(píng)估

用空白作為陰性對(duì)照，將檢測(cè)卡平放在桌面上，吸取啶蟲(chóng)脒待測(cè)液，緩慢滴加80 μL（約3滴）于加樣孔中，開(kāi)始計(jì)時(shí)，在5～6 min時(shí)讀取結(jié)果。樣品進(jìn)行加標(biāo)，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1為陽(yáng)性樣品，＜0.5 mg·kg-1為陰性樣品，對(duì)同一濃度樣品進(jìn)行10次檢驗(yàn)。

由表1可知，通過(guò)對(duì)蘋果樣品添加系列啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)溶液，試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，樣品在0.3 mg·kg-1時(shí)就開(kāi)始顯色。依據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》計(jì)算此試劑盒的假陽(yáng)性率、假陰性率、靈敏度、特異性和顯著性差異，此試劑盒靈敏度100%，特異性66.67%，假陰性率0，假陽(yáng)性率33.33%，顯著性差異8.1，相對(duì)準(zhǔn)確度80%。

表1 試劑盒1蘋果中添加啶蟲(chóng)脒的顯色情況表

2.2.2 試劑盒2的適應(yīng)性評(píng)估

以空白作為對(duì)陰性對(duì)照，用移液槍移取100 μL待測(cè)液于微孔中，反復(fù)吹打3～5次?；旌暇鶆?，靜置3 min，用一次性吸管將微孔待測(cè)液滴于加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，5～8 min后觀察結(jié)果。樣品進(jìn)行加標(biāo)，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和 1.0 mg·kg-1。 此 試 劑 盒 的 檢 出 限 為0.2 mg·kg-1，≥ 0.2 mg·kg-1即為陽(yáng)性樣品。對(duì)同一濃度進(jìn)行10次檢驗(yàn)。

由表2可知，通過(guò)對(duì)蘋果樣品添加系列啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)溶液，試劑盒的檢出限為0.2 mg·kg-1，樣品在0.2 mg·kg-1開(kāi)始顯色。依據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》計(jì)算此試劑盒的假陽(yáng)性率、假陰性率、靈敏度、特異性和顯著性差異，結(jié)果為此試劑盒的假陽(yáng)性率0、假陰性率0、靈敏度100%、特異性100%、顯著性差異0及相對(duì)準(zhǔn)確度為100%。

表2 試劑盒2蘋果中添加啶蟲(chóng)脒的顯色情況表

2.2.3 試劑盒3的適應(yīng)性評(píng)估

以空白作為陰性對(duì)照，從包裝袋中取出檢測(cè)卡，將檢測(cè)卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，10 min可觀察結(jié)果。樣品進(jìn)行加標(biāo)，濃度梯度分別為 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.80 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1為陽(yáng)性樣品，＜0.5 mg·kg-1為陰性樣品，對(duì)同一濃度樣品進(jìn)行10次檢驗(yàn)。

由表3可知，試劑盒的檢出限為0.5 mg·kg-1，樣品在0.25 mg·kg-1時(shí)開(kāi)始顯色，依據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》計(jì)算此試劑盒的假陽(yáng)性率、假陰性率、靈敏度、特異性及顯著性差異，結(jié)果為假陽(yáng)性率50%、假陰性率0、靈敏度100%、特異性50%、顯著性差異8.1及相對(duì)準(zhǔn)確度80%。

表3 試劑盒3蘋果中添加啶蟲(chóng)脒的顯色情況表

3 結(jié)論與討論

通過(guò)采用啶蟲(chóng)脒的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法和啶蟲(chóng)脒的的快檢試劑盒對(duì)阿克蘇市售蘋果樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為未檢出。對(duì)蘋果樣品添加不同濃度的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以試劑盒的檢出限區(qū)分陰性樣品、陽(yáng)性樣品，按《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》評(píng)估啶蟲(chóng)脒快檢試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽(yáng)性率、顯著性差異和相對(duì)準(zhǔn)確度，結(jié)果表明試劑盒2的相對(duì)準(zhǔn)確度較高，靈敏度、特異性較強(qiáng)。

根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021），啶蟲(chóng)脒在蘋果中的限量要求是0.8 mg·kg-1，試劑盒1及試劑盒2的檢出限為0.2 mg·kg-1，試劑盒 3 的檢出限為 0.5 mg·kg-1，3 種試劑盒的檢出限均在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求之下，且3種試劑盒在檢出限以上均呈陽(yáng)性，因此此3種啶蟲(chóng)脒快檢試劑盒均適用于開(kāi)展蘋果中啶蟲(chóng)脒的快速篩查。