PD-L1在肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義

李龍萍，鄧 飛，陳 芳

（1. 貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心病理科，貴州 貴陽(yáng) 550004 ；2. 遵義市第一人民醫(yī)院病理科，貴州 遵義563000 ；3. 遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤研究室，貴州 遵義 563000）

肺癌在臨床上較為常見(jiàn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，肺癌是近50 年來(lái)全球范圍內(nèi)發(fā)病率和致死率增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤。肺癌可分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。其中非小細(xì)胞肺癌主要包括肺腺癌、大細(xì)胞肺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）等。肺腺癌患者占原發(fā)性肺癌患者總數(shù)的40% 以上。肺腺癌主要起源于支氣管黏膜上皮，少數(shù)起源大支氣管的黏液腺，具有高度浸潤(rùn)和破壞性生長(zhǎng)的特點(diǎn)。肺腺癌患者的臨床表現(xiàn)無(wú)典型性及特異性，因此多數(shù)患者的病情在得到確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，導(dǎo)致其預(yù)后不佳。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌細(xì)胞可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制作用，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫機(jī)制，進(jìn)而可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[1]。程序性死亡配體-1（programmed death-ligand 1，PD-L1）是新近發(fā)現(xiàn)的一種重要免疫抑制分子。PD-L1 可傳導(dǎo)抑制性信號(hào)，抑制T 淋巴細(xì)胞的功能，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到重要的作用[2]。研究證實(shí)，PD-L1 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平可顯著增高[3]。本文主要是探討PD-L1 在肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年6 月至2020 年6 月期間貴陽(yáng)市肺科醫(yī)院收治的100 例肺腺癌患者作為研究對(duì)象。其納入標(biāo)準(zhǔn)是：病情經(jīng)病理學(xué)檢查得到確診；病歷資料完整；自愿參與本研究。在這些患者中，有男性63 例，女性37 例；其年齡為43 ～77 歲，平均年齡為（60.2±3.5）歲。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)本研究中100 例患者肺腺癌標(biāo)本中PD-L1 的表達(dá)情況，具體的檢測(cè)步驟是：用4%的中性福爾馬林對(duì)標(biāo)本進(jìn)行固定，并用石蠟進(jìn)行包埋，將其制成切片。將切片放入烤箱中烘烤（溫度為72℃）60 min，使石蠟切片脫蠟至水。將經(jīng)上述處理的標(biāo)本放入濕盒內(nèi)，用0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS）進(jìn)行沖洗。用酸堿度（pH）為6 的檸檬酸鹽緩沖液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行抗原修復(fù)，并將其在電磁爐上加熱（溫度為2000℃）2 min，冷卻后用PBS 沖洗1 次。用3%的過(guò)氧化氫（H2O2）溶液在室溫下對(duì)標(biāo)本進(jìn)行孵育（時(shí)間為10 min），除去其中的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。用PBS 沖洗玻片3 次，每次沖洗5 min。在標(biāo)本中滴加一抗，放入冰箱內(nèi)孵育2 h，復(fù)溫1 h 或在室溫下放置60 min 后用PBS 連續(xù)沖洗3 次，每次沖洗5 min。在標(biāo)本中滴加二抗，在15 min 內(nèi)用PBS 沖洗3 次，每次沖洗5 min。用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）對(duì)標(biāo)本進(jìn)行顯色處理，顯色的時(shí)間為3 ～5 min，用蒸餾水終止顯色。用蘇木精對(duì)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)染，將其置于蘇木精溶液中浸泡21 s，用鹽酸乙醇分化后進(jìn)行流水返藍(lán)處理1 ～3 min。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行梯度乙醇脫水處理，采用二甲苯對(duì)標(biāo)本進(jìn)行透明處理后，用中性樹(shù)膠封片。本研究中所用的試劑均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜中若出現(xiàn)棕黃色顆粒，則表示PD-L1 呈陽(yáng)性；腫瘤細(xì)胞中若有超過(guò)25%的細(xì)胞染色，則出現(xiàn)任何強(qiáng)度的染色（棕褐色、棕黃色、淺黃色）均表示PD-L1 呈陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)本研究中100 例肺腺癌患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率。對(duì)100 例肺腺癌患者中PD-L1 呈陽(yáng)性表達(dá)患者的性別、年齡、吸煙情況及腫瘤的組織學(xué)分型進(jìn)行分析，總結(jié)PD-L1 的表達(dá)情況與肺腺癌組織學(xué)分型及臨床病理特征之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 22.0 軟件處理本研究中的數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用% 表示，用χ2 或確切概率法檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 100 例肺腺癌患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率

在100 例肺腺癌患者中，PD-L1 呈陽(yáng)性表達(dá)的患者有22 例，其PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率為22.0%（22/100）。

2.2 PD-L1 的表達(dá)情況與肺腺癌組織學(xué)分型及臨床病理特征之間的關(guān)系

在22 例PD-L1 呈陽(yáng)性表達(dá)的患者中，男性患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率高于女性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；吸煙患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率高于不吸煙患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；年齡≥60 歲的患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率高于年齡＜60 歲的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；貼壁型肺腺癌患者與腺泡型肺腺癌患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率均高于實(shí)性肺腺癌患者和黏液性肺腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 PD-L1 的表達(dá)情況與肺腺癌組織學(xué)分型及臨床病理特征之間的關(guān)系[ 例（%）]

3 討論

肺癌是一種發(fā)病率較高的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤。在所有男性罹患的惡性腫瘤中，肺癌的發(fā)病率和致死率均居第一位；在所有女性罹患的惡性腫瘤中，肺癌的發(fā)病率和致死率均居第二位。肺腺癌是肺癌常見(jiàn)的一種病理類型。與肺鱗癌好發(fā)于男性及吸煙群體不同，肺腺癌在女性和不吸煙群體中具有較高的發(fā)病率。多數(shù)肺腺癌均起源于較小的支氣管，為周圍型肺癌。PD-L1 由CD274 基因編碼，是免疫球蛋白超家族中的Ⅰ型跨膜蛋白。正常情況下，人體的免疫系統(tǒng)會(huì)對(duì)外來(lái)的抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)，激活抗原特異性細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞，使T 淋巴細(xì)胞分化出多種T 細(xì)胞（包括抑制性T 細(xì)胞、殺傷性T 細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞等），從而起到殺傷靶細(xì)胞的作用。免疫監(jiān)視、免疫相持和免疫逃逸是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展必經(jīng)的三個(gè)階段。其中免疫逃逸是三者中的重中之重。研究發(fā)現(xiàn)，在免疫逃逸階段，若T 淋巴細(xì)胞的功能受限或失調(diào)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體抵抗腫瘤細(xì)胞的能力減弱，使腫瘤細(xì)胞大量生成[4]。PD-L1 在多種細(xì)胞中均有表達(dá)，包括胎盤(pán)干細(xì)胞、胰島細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。研究表明，惡性腫瘤組織中PD-L1 的表達(dá)水平明顯高于正常組織，PD-L1 的表達(dá)水平與惡性腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移、侵襲程度及患者的預(yù)后密切相關(guān)。相關(guān)的前瞻性研究顯示，PD-L1 的表達(dá)水平與惡性腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)，因此可將PD-L1作為評(píng)估惡性腫瘤患者療效及預(yù)后的重要參考指標(biāo)[5-6]?，F(xiàn)階段，臨床上對(duì)肺腺癌患者主要是進(jìn)行手術(shù)治療、化療或放療，但療效均不理想。近年來(lái)，PD-L1 免疫療法在肺腺癌的治療中逐漸得到應(yīng)用，并取得了較好的效果。采用該療法治療肺腺癌的機(jī)制是：程序性細(xì)胞死亡蛋白-1（PD-1）/PD-L1 抑制劑可通過(guò)與PD-1、PD-L1 結(jié)合阻止PD1 與PD-L1 之間的識(shí)別，激活蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）和蛋白酪氨酸磷酸酶2（SHP-2），促進(jìn)下游通路中磷脂酰肌醇3 激酶/ 蛋白激酶B（PI3K/Akt）的磷酸化及哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的活化，促使CD4+Foxp3 陰性T 淋巴細(xì)胞向陽(yáng)性調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞轉(zhuǎn)化，恢復(fù)或增強(qiáng)T 淋巴細(xì)胞的功能，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤的作用[7]。

本研究的結(jié)果證實(shí)，PD-L1 在肺腺癌中存在陽(yáng)性表達(dá)的情況。肺腺癌患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)與其性別、年齡、吸煙與否及肺腺癌的組織學(xué)分型有關(guān)，男性、吸煙、年齡≥60 歲及組織學(xué)分型為貼壁型、腺泡型的肺腺癌患者PD-L1 的陽(yáng)性表達(dá)率較高。