血清miR-140-3p、sLOX-1對急性STEMI患者PCI術后支架內再狹窄的預測能效

陳愿，趙子明，崔留義，馬翔宇，沈蕾

急性ST段抬高型心肌梗死（ASTEMI）是指具有典型缺血性心絞痛和ST段抬高的急性心肌梗死，為冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┑膰乐仡愋停彩腔颊咧滤乐職埖闹饕騕1]。因溶栓適應癥條件限制，經皮冠狀動脈介入治療（PCI）成為ASTEMI患者疏通狹窄或閉塞冠狀動脈管腔、改善心肌血流灌注的主要方法[2]。但相關統計顯示，PCI術后即使規(guī)范用藥仍有較高幾率出現支架內再狹窄，嚴重影響患者預后，因此有必要對PCI術后支架內再狹窄進行早期預測，從而指導臨床治療。研究表明，新生動脈粥樣硬化（AS）是支架內再狹窄和支架晚期治療失敗最為重要的病理機制之一[3]。近年來研究證實，微小RNA（miRNA）參與了多種細胞因子轉錄調控，其中miR-140-3p存在于編碼E3泛素連接酶WWP2基因的內含子中，并在內含子剪切的過程導出。Zhu等[4]研究發(fā)現miR-140-3p在動脈粥樣硬化血管和氧化應激損傷的內皮細胞中顯著下調，并能夠通過上調C-Myb和B淋巴細胞瘤-2基因改善AS。凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）是一種Ⅱ型糖蛋白，通過影響內皮細胞功能、促進平滑肌細胞遷移等過程參與AS發(fā)生和發(fā)展，可溶性LOX-1（sLOX-1）為LOX-1經蛋白酶水解釋放，反映LOX-1的表達情況[5]。本研究旨在分析血清miR-140-3p、sLOX-1水平對ASTEMI患者PCI術后支架再狹窄的預測價值，以期為PCI術后支架再狹窄的防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2019年1月～2021年1月于鄭州市第七人民醫(yī)院心內科收治的247例接受PCI的ASTEMI患者，其中男性147例，女性100例；年齡42～80歲，平均年齡（61.16±8.49）歲；體質指數（BMI）18～26 kg/m2，平均BMI（23.24±2.07）kg/m2；病史：糖尿病77例、高血壓98例、腦卒中19例；病變支數：單支病變56例、雙支病變100例、多支病變91例；急診PCI156例，擇期PCI91例。納入標準：①符合《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》[6]診斷標準；②且接受PCI；③病理資料完整，可接受隨訪者；④患者及家屬均知情研究。排除標準：①合并肝、腎等重要臟器嚴重功能障礙者；②造血、免疫系統疾病者；③惡性腫瘤疾病者；④既往PCI史；⑤合并全身急慢性感染性疾病者。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 基礎資料收集收集患者性別、年齡、體質指數、吸煙飲酒史、病史、病變支數、PCI術式、支架數量、支架內徑、支架長度、藥物使用情況、Gensini積分[7]和基線血脂四項[血清總膽固醇（TC），三酰甘油（TG），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）]、血糖、超敏C反應蛋白（hs-CRP）水平（邁瑞B(yǎng)S-180全自動生化分析儀測定）。左心室射血分數（LVEF）由DW-PE582彩色多普勒超聲診斷儀測定。

1.2.2 血清miR-140-3p、sLOX-1水平測定PCI后次日清晨采集患者空腹靜脈血6 ml，3000 r/min離心10 min（半徑15 cm），取上清分置兩份。一份通過酶聯免疫吸附法（北京百奧萊博科技有限公司提供，編號：ARB10414）檢測血清sLOX-1水平；一份使用總RNA提取試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，編號：R1200）提取血清總RNA，逆轉錄試劑盒（北京智杰方遠科技有限公司，編號：RR036A）轉錄合成cDNA，加入miR-140-3p引物（上游引物：5’-ACACTCCA GCTGGGAGGCGGGGCGCCGCGGGA-3’；下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’）混勻，進行PCR擴增，以U6做內參（上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’；下游引物：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’），擴增條件：95 ℃ 10 min、95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s，循環(huán)40次，反應結束后得到各管Ct，2-ΔΔCt法計算miR-140-3p相對表達量。

1.2.3 支架內再狹窄標準支架內再狹窄定義為冠狀動脈造影證實支架兩端和/或全程5 mm節(jié)段內管腔丟失，管腔狹窄程度≥50%[7]。所有患者入院后由同一介入團隊進行PCI，術后均隨訪1年，根據是否發(fā)生支架內再狹窄分為再狹窄組和無再狹窄組。

1.3 統計學方法采用SPSS 26.0統計學軟件，計數資料以例數（百分比）表示，兩組間比較采用χ2或Fisher檢驗；正態(tài)分布計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；多因素Logistics回歸分析ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄影響因素；ROC曲線判斷血清miR-140-3p、sLOX-1水平對ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄的預測價值，曲線下面積（AUC）采用Z檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄影響因素的單因素分析隨訪1年，247例患者共出現38例支架內再狹窄，發(fā)生率為15.38%（38/247）。單因素分析顯示，再狹窄組HDL-C、LVEF、支架內徑、miR-140-3p水平明顯低于無再狹窄組（P＜0.05），支架長度、FBG、hs-CRP、sLOX-1水平明顯高于無再狹窄組（P＜0.05）；兩組患者性別、年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、病史、病變支數、TC、TG、LDL-C、支架數量、藥物使用情況比較差異均無統計學意義（P＞0.05），表1。

表1 ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄影響因素的單因素分析

2.2 ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄影響因素的多因素Logistics回歸分析以HDL-C、hs-CRP、FBG、LVEF、急診PCI（是=1，否=0）、支架內徑、支架長度、Gensini積分、sLOX-1、miR-140-3p為自變量，PCI術后是否支架內再狹窄（是=1，否=0）為因變量，多因素Logistics回歸分析顯示，hs-CRP、急診PCI、支架內徑、miR-140-3p為ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄獨立保護因素，Gensini積分、sLOX-1為獨立危險因素（P＜0.05），表2。

表2 ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄影響因素的多因素Logistics回歸分析

2.3 血清miR-140-3p、sLOX-1水平對ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄的預測價值ROC曲線顯示，miR-140-3p聯合sLOX-1預測ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄的AUC為0.892，明顯大于miR-140-3p、sLOX-1單獨預測的0.791、0.784（Z=3.586、3.500，P＜0.001）。miR-140-3p聯合sLOX-1預測ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄的敏感度、特異度、準確度分別為81.58%、85.65%、85.02%，圖1及表3。

圖1 血清miR-140-3p、sLOX-1水平預測ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄的ROC曲線

3 討論

急性ST段抬高型心肌梗死（ASTEMI）是臨床常見心血管急癥，在全球范圍內具有極高的致殘和致死風險。目前，隨著區(qū)域協同救治體系的逐漸完善，ASTEMI死亡率大幅度降低，但PCI術后支架內再狹窄仍然是一個難題，嚴重影響患者治療效果和遠期預后。新生動脈粥樣硬化（AS）是一種潛在致命性的病理過程，指支架術后新生內膜組織中迅速聚集富含泡沫的巨噬細胞，伴或不伴鈣化和（或）壞死核心，是多因素多機制共同參與的過程，慢性炎癥、內皮功能障礙、平滑肌細胞增殖等在其中發(fā)揮重要作用[9]。

微小RNA（miRNA）是一組非編碼小分子RNA，通過抑制靶miRNA翻譯在轉錄后水平調控基因表達[10]。近年研究表明，部分miRNAs在保護心肌細胞和維持內皮細胞功能方面發(fā)揮重要作用，且在循環(huán)系統中具備高度穩(wěn)定性，因此被認為是心血管疾病的理想生物標志物[11]。miR-140基因位于染色體17p13.1上，早期下肢動脈硬化閉塞癥miRNA芯片和RT-PCR芯片分析發(fā)現，下肢動脈硬化閉塞癥組織中miR-140-3p表達顯著下調[12]。張海濤等[13]通過基因芯片分析也發(fā)現，ASTEMI患者外周血外泌體中miR-140-3p表達顯著下調。本研究發(fā)現，再狹窄組血清miR-140-3p水平明顯降低，且miR-140-3p為PCI術后支架內再狹窄的獨立保護因素，說明高血清miR-140-3p水平有利于預防PCI術后支架內再狹窄發(fā)生，但尚不明確其保護機制。血管平滑肌細胞增殖和凋亡是AS發(fā)生發(fā)展的關鍵因素[14]。Zhu等[4]研究發(fā)現，將miR-140-3p模擬物轉染至血管平滑肌細胞中，能減弱血小板源性生長因子BB誘導的血管平滑肌細胞增殖和凋亡，抑制支架內再狹窄。生物信息學分析顯示，miR-140-3p是Toll樣受體4的上游miRNAs之一，具有負向調控作用。已有研究證實[15]，Toll樣受體4可通過損傷內皮功能和增強系統炎性反應促進支架內再狹窄發(fā)生。因此我們推測miR-140-3p可能通過負向調控Toll樣受體4和抑制血管平滑肌細胞增殖、凋亡發(fā)揮支架內再狹窄保護作用。

氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是AS發(fā)生和發(fā)展過程中重要參與者，其可通過結合巨噬細胞表面清道夫受體形成巨噬細胞源性泡沫細胞，使泡沫細胞壞死崩解，促進AS形成并加速破裂[16]。凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）為血管內皮細胞攝取ox-LDL主要受體，參與ox-LDL結合、內吞、蛋白降解等過程[17]。研究表明，LOX-1能促進泡沫細胞形成和加重內皮細胞功能損傷促進AS形成[18]。大量研究顯示[19,20]，血清sLOX-1水平與冠心病患者AS形成、血管內皮損傷、冠狀動脈慢血流、心肌缺血等密切相關，但關于sLOX-1是否參與PCI術后支架內再狹窄尚不明確。本研究結果顯示，再狹窄組血清sLOX-1水平明顯高于無再狹窄組，且再狹窄組血清FBG和hs-CRP水平明顯高于無再狹窄組，推測血清高sLOX-1水平與再狹窄患者機體炎癥反應和血糖水平較高促進sLOX-1分泌有關。排除其他影響因素后，高血清sLOX-1水平仍然是ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄獨立危險因素，提示高血清sLOX-1水平可能通過促進AS形成參與PCI術后支架內再狹窄。此外本研究結果還顯示，急診PCI、支架內徑、Gensini積分為ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄獨立影響因素，考慮與急診PCI患者發(fā)病至入院時間更短，心肌損傷更小有關；較大支架內徑血管直徑更大，不易發(fā)生血流堵塞；Gensini積分是評估冠脈病變狹窄程度積分，分值越大反映冠脈病變狹窄程度越高，說明ASTEMI患者病情越嚴重，PCI術后支架內再狹窄風險高。ROC曲線顯示，血清miR-140-3p、sLOX-1水平均對ASTEMI患者PCI術后支架內再狹窄具有一定預測價值，且miR-140-3p聯合sLOX-1預測AUC顯著提升，敏感度、特異度、準確度為81.58%、85.65%、85.02%，說明聯合檢測血清miR-140-3p、sLOX-1水平可提升支架內再狹窄預測價值。

綜上所述，PCI術后支架內再狹窄ASTEMI患者血清miR-140-3p水平明顯降低，sLOX-1水平明顯提升，兩者均為支架內再狹窄獨立影響因素，均對支架內再狹窄具有一定預測價值，聯合預測價值更高。但本研究為單中心研究，且研究僅限于PCI術前血清miR-140-3p、sLOX-1水平，沒有動態(tài)觀察隨訪期間血清指標變化，還需多中心大樣本研究驗證。