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    線粒體功能障礙與多囊卵巢綜合征相關(guān)性的研究進展

    2022-02-28 01:51:26王立娜陳慧平田文艷顏琪張慧英
    天津醫(yī)藥 2022年12期

    王立娜,陳慧平,田文艷,顏琪,張慧英△

    多囊卵巢綜合征(PCOS)是常見的生殖和內(nèi)分泌代謝綜合征,主要臨床特征為卵泡發(fā)育異常、高雄激素血癥、脂質(zhì)代謝異常、胰島素抵抗(IR)、糖代謝異常和慢性炎癥等。線粒體作為參與細胞能量代謝等多種生命活動的重要結(jié)構(gòu),其功能障礙與PCOS以上疾病特征密切相關(guān)[1]。本文綜述了近年來線粒體功能障礙與PCOS發(fā)生發(fā)展及相關(guān)并發(fā)癥的研究進展。

    1 線粒體結(jié)構(gòu)與功能

    線粒體是雙層膜結(jié)構(gòu)動態(tài)細胞器,由外膜、間隙、內(nèi)膜和線粒體基質(zhì)組成,線粒體動力學(xué)(包括融合和分裂)可維持線粒體結(jié)構(gòu)完整性,是其發(fā)揮生物學(xué)功能的前提。線粒體為半自主性細胞器,具有獨立的DNA及遺傳表達系統(tǒng),線粒體基因(mtDNA)和核基因共同編碼線粒體功能蛋白。線粒體主要功能是通過氧化磷酸化(OXPHOS)產(chǎn)生腺苷三磷酸(ATP),提供細胞生命活動所需的能量;除參與機體能量代謝之外,線粒體還可參與體內(nèi)氧化應(yīng)激(OS)、鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)、細胞增殖凋亡、自噬等多種細胞活動[2]。因此,線粒體正常結(jié)構(gòu)與功能對機體多項生命活動至關(guān)重要,線粒體功能障礙可能為PCOS的發(fā)病機制之一。

    2 線粒體功能障礙與PCOS

    2.1 線粒體基因組異常與PCOS線粒體基因組異??赡芘cPCOS發(fā)生相關(guān),包括mtDNA基因突變或缺失、mtDNA拷貝數(shù)變化等。mtDNA分為編碼區(qū)和非編碼區(qū),mtDNA編碼區(qū)可編碼22個轉(zhuǎn)移核糖核酸(tRNA)、2種核糖體核糖核酸(rRNA)和13個ATP生成所必需的多肽鏈;mtDNA控制區(qū)(D-loop區(qū))為其非編碼區(qū),此區(qū)域突變會影響mtDNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致線粒體呼吸鏈功能障礙,致使mtDNA拷貝數(shù)減少、ATP水平降低、代謝副產(chǎn)物產(chǎn)生過多。研究發(fā)現(xiàn),PCOS患者線粒體轉(zhuǎn)移RNA(mt-tRNA)高度保守區(qū)存在谷氨酰胺tRNA(Gln-tRNA)、半胱氨酸t(yī)RNA(Cys-tRNA)、天冬氨酸t(yī)RNA(Asp-tRNA)、賴氨酸t(yī)RNA(Lys-tRNA)、精氨酸t(yī)RNA(Arg-tRNA)和谷氨酸t(yī)RNA(Glu-tRNA)等多種變異,mt-tRNA突變與糖尿病和高膽固醇血癥等相關(guān),可能與絲氨酸/蘇氨酸激酶(AKT)介導(dǎo)的胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路障礙、線粒體生物合成酶類表達減少、體內(nèi)脂肪酸水平改變等相關(guān)[3]。最佳的mtDNA拷貝數(shù)和足夠的ATP是卵母細胞發(fā)育成熟的前提,mtDNA拷貝數(shù)變化與PCOS患者卵泡發(fā)育異常以及代謝紊亂等相關(guān),mtDNA拷貝數(shù)降低的卵母細胞的發(fā)育潛能顯著降低,致使卵泡發(fā)育異常、囊胚形成減少;PCOS患者血液中mtDNA拷貝數(shù)與腰圍、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、三酰甘油水平呈負相關(guān)[4]。PCOS患者的骨骼肌線粒體中核基因編碼的OXPHOS相關(guān)基因,如泛醌氧化還原酶復(fù)合體組裝因子3(NDUFA3)、琥珀酸脫氫酶基因D(SDHD)、細胞色素C氧化酶Ⅶ亞基(COX7C)等表達減少,NDUFA3的表達與mtDNA拷貝數(shù)、卵泡發(fā)育和IR密切相關(guān);SDHD單核苷酸多態(tài)性則與肥胖風(fēng)險密切相關(guān)[5]。線粒體基因組異常影響PCOS及其糖脂代謝并發(fā)癥的具體機制仍需進一步探索。

    2.2 線粒體能量代謝障礙與PCOS線粒體為機體能量代謝的中心,顆粒細胞、卵母細胞分別以糖酵解、OXPHOS為主要能量來源。線粒體功能障礙可導(dǎo)致多種生物合成中間體和ATP產(chǎn)生減少,致使PCOS患者獲卵數(shù)、成熟卵母細胞比例、胚胎質(zhì)量、著床率均下降,甚至出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局等[1]。PCOS小鼠卵巢中胰島素信號通路相關(guān)的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平升高,但葡萄糖攝取量正常,轉(zhuǎn)運蛋白表達水平顯著升高,提示PCOS小鼠存在利用葡萄糖能力下降且存在IR;同時,單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白(MCT)和乳酸脫氫酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PKM)等限速酶基因的表達下調(diào),也可使能量代謝水平下降[6]。研究發(fā)現(xiàn),與健康女性相比,PCOS患者卵泡生長所需的乳酸和丙酮酸增多,且丙酮酸消耗量增加與卵母細胞核型異常相關(guān)[7]。IR可使線粒體耦合效率受損,氧化型/還原型輔酶Ⅰ(NAD+/NADH)比例下降,乳酸及ATP產(chǎn)生減少;高水平的睪酮也可抑制小鼠卵巢顆粒細胞乳酸生成,導(dǎo)致腺苷二磷酸(ADP)/ATP比例升高、線粒體生物合成減少等[8]。以上研究均表明,PCOS患者卵泡發(fā)育一方面所需乳酸和丙酮酸等能源物質(zhì)增多,另一方面IR及高雄激素血癥又可抑制以上能量物質(zhì)的生成,卵泡發(fā)育所需代謝物質(zhì)供不應(yīng)求,致使卵泡發(fā)育障礙。

    2.3 線粒體氧化應(yīng)激與PCOS活性氧(ROS)為線粒體能量代謝的副產(chǎn)物,適量的ROS可作為調(diào)控細胞分化和炎癥等途徑的信號分子,ROS過多則可引發(fā)OS,導(dǎo)致線粒體功能障礙,參與PCOS的發(fā)生發(fā)展。ROS相關(guān)代謝物的濃度可用來評估組織的氧化還原狀態(tài)和線粒體功能,常用標志物有丙二醛(MDA)、總 抗 氧化能 力(TAC)、總抗氧 化 狀態(tài)(TAOS)、羰基等。研究發(fā)現(xiàn),PCOS患者OS發(fā)生在線粒體復(fù)合體Ⅰ,OS可導(dǎo)致mtDNA突變、氧化還原途徑中斷和分子損傷、ATP合成受阻并破壞線粒體正常結(jié)構(gòu)形態(tài)等,與IR、脂質(zhì)代謝異常和卵泡發(fā)育障礙等PCOS多種臨床特征相關(guān)[9]。PCOS患者卵泡液MDA水平、TAOS及氧化應(yīng)激指數(shù)升高,TAC和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)水平升高,提示OS可能通過Caspase系統(tǒng)導(dǎo)致顆粒細胞凋亡增多、卵泡微環(huán)境破壞、卵母細胞發(fā)育成熟障礙,致使PCOS卵泡閉鎖、排卵障礙和不孕等[10]。OS可增強促炎基因表達,誘發(fā)體內(nèi)慢性炎癥,進而通過干擾胰島素信號傳導(dǎo)通路,如胰島素受體底物1-磷脂肌醇3激酶-蛋白激酶B(IRS1-PI3K-PKB/AKT)途徑參與IR的形成[11]。OS可促進前脂肪細胞增殖和分化,誘發(fā)下丘腦神經(jīng)元飽腹感調(diào)節(jié)機制受損進而導(dǎo)致肥胖,OS標志物與體質(zhì)量指數(shù)(BMI)和腰臀比等肥胖指數(shù)之間存在正相關(guān),提示OS可能與PCOS患者發(fā)生代謝綜合征的風(fēng)險增加相關(guān)[12]。OS還可通過增強類固醇激素轉(zhuǎn)化酶的活性促進雄激素的產(chǎn)生,提示OS可能參與了PCOS高雄激素血癥的形成[12]。

    2.4 線粒體鈣穩(wěn)態(tài)失衡與PCOS Ca2+可作為第二信使參與細胞信號傳導(dǎo),同時參與蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)相關(guān)分解酶的激活,是調(diào)控細胞生命活動的重要元素之一。線粒體協(xié)同內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細胞外基質(zhì)等共同調(diào)節(jié)Ca2+的攝取和釋放以維持細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)。mtDNA突變、OS等均可導(dǎo)致線粒體鈣穩(wěn)態(tài)失衡。鈣穩(wěn)態(tài)失衡可導(dǎo)致線粒體膜去極化,引起線粒體呼吸鏈氧化磷酸化解偶聯(lián),ATP產(chǎn)生減少;同時ROS產(chǎn)生增多,使膜脂質(zhì)過氧化,進而增加線粒體內(nèi)膜通透性,Ca2+內(nèi)流增加,與OS形成正反饋,共同導(dǎo)致線粒體功能障礙。鈣穩(wěn)態(tài)失衡與PCOS的多種疾病特征有關(guān)。鈣穩(wěn)態(tài)失衡刺激G蛋白偶聯(lián)的鈣感受器,通過肌醇/Ca2+途徑級聯(lián)激活炎癥反應(yīng),核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(NLRP3)炎癥小體產(chǎn)生,導(dǎo)致高水平的白細胞介素(IL)和腫瘤壞死因子(TNF)等炎性因子釋放;此外,鈣依賴性磷脂酶-A2(PLA2)也可通過激活環(huán)氧化酶-2(COX-2)誘導(dǎo)花生四烯酸釋放,促進炎癥反應(yīng)[13]。以上均提示鈣穩(wěn)態(tài)失衡與PCOS的慢性炎癥狀態(tài)相關(guān)。編碼線粒體融合蛋白(Mfn)的基因Mfn1和Mfn2缺乏,可通過B淋巴細胞瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、Ca2+途徑破壞線粒體的正常形態(tài)結(jié)構(gòu),致使卵母細胞發(fā)育異常[14]。在胰腺β細胞中,PI3K/AKT信號通路激活可刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運和糖原合成,鈣穩(wěn)態(tài)失衡可導(dǎo)致上述信號通路持續(xù)級聯(lián)激活,使胰島素受體底物過度磷酸化和AKT活性減弱,導(dǎo)致IR等代謝異常[15]。

    2.5 線粒體生物合成減少與PCOS研究發(fā)現(xiàn)PCOS大鼠模型中與線粒體生物合成相關(guān)的關(guān)鍵基因,如線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α(PGC-1α)等表達水平顯著降低,提示線粒體生物合成減少所致的線粒體功能障礙可能與PCOS發(fā)生密切相關(guān)[16]。PGC-1α可上調(diào)編碼線粒體蛋白的基因表達水平,增加線粒體的生物合成。一氧化氮(NO)和腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMPK)可刺激PGC-1α表達,促進線粒體生物合成,而mtDNA拷貝數(shù)和PGC-1α基因表達水平降低可造成線粒體生物合成和ATP生成減少,導(dǎo)致線粒體功能障礙。PGC-1α通過與核呼吸因子1/2(NRF1/2)、雌激素相關(guān)受體α(ERRα)等特定的核轉(zhuǎn)錄因子相互作用,影響線粒體呼吸鏈功能、氧化還原平衡、細胞凋亡水平、性激素合成以及糖脂代謝等,參與PCOS的發(fā)生[17]。研究發(fā)現(xiàn),PCOS患者的卵丘細胞線粒體生物發(fā)生水平、mtDNA含量明顯低于對照組,而PGC-1α基因啟動子甲基化率較高,基因甲基化可下調(diào)基因轉(zhuǎn)錄水平,使線粒體生物合成能力下降,導(dǎo)致PCOS卵泡發(fā)育異常,而甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑可逆轉(zhuǎn)超甲基化所致的線粒體功能障礙[18]。PCOS動物實驗存在上述類似表型,并且存在線粒體結(jié)構(gòu)改變、卵母細胞囊胚率降低[19]。以上研究均提示線粒體生物合成減少與PCOS密切相關(guān)。

    2.6 線粒體調(diào)控的細胞凋亡失衡與PCOS PCOS患者卵巢顆粒細胞凋亡率升高,并與線粒體介導(dǎo)的細胞凋亡途徑相關(guān)[20]。線粒體調(diào)控的細胞凋亡失衡可能與PCOS排卵障礙、高雄激素血癥、IR及慢性炎癥等多種疾病特征有關(guān)。Caspase和Bcl-2/Bax是細胞凋亡的主要調(diào)節(jié)因子,Caspase是調(diào)控細胞凋亡的特異性蛋白酶,線粒體在其激活中起關(guān)鍵作用;Bcl-2為抗凋亡基因,可與線粒體膜上的Bax等基因結(jié)合來抑制線粒體內(nèi)細胞色素C(Cytc)等促凋亡因子的釋放,進而調(diào)控下游基因,抑制細胞凋亡。PCOS卵巢顆粒細胞Bax表達升高,Bcl-2表達下降,細胞凋亡指數(shù)增加[21]。卵巢顆粒細胞凋亡比例達到10%以上時,可導(dǎo)致卵泡閉鎖,并被卵泡膜細胞及成纖維細胞代替從而影響卵巢功能,導(dǎo)致PCOS患者排卵障礙、生育力下降,甚至不孕,且顆粒細胞凋亡率與妊娠率呈負相關(guān);同時,卵巢顆粒細胞大量凋亡時,影響睪酮轉(zhuǎn)化為雌激素,導(dǎo)致雄激素水平升高,進而導(dǎo)致卵母細胞成熟、卵泡發(fā)育停滯[22]。此外,機體ROS積聚、慢性炎癥反應(yīng)、顆粒細胞和卵母細胞自噬異常激活均可導(dǎo)致細胞凋亡失衡,誘發(fā)PCOS。

    2.7 線粒體動力學(xué)改變與PCOS線粒體動力學(xué)是指線粒體調(diào)控自身分裂和融合,維持線粒體穩(wěn)態(tài)的過程,參與調(diào)控細胞增殖、分化、凋亡與自噬等生命活動。Mfn1/2、視神經(jīng)萎縮蛋白1(OPA1)介導(dǎo)線粒體融合,動力相關(guān)蛋白1(Drp1)則介導(dǎo)線粒體分裂。線粒體融合與其發(fā)揮能量代謝等正常功能有關(guān),線粒體過度分裂則通過破壞線粒體結(jié)構(gòu)、促進ROS產(chǎn)生導(dǎo)致線粒體功能障礙[23]。線粒體動力學(xué)失衡與PCOS多種疾病特征相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),小鼠卵母細胞線粒體融合與分裂失衡可使線粒體結(jié)構(gòu)異常,導(dǎo)致線粒體膜電位下降、ATP生成不足、卵母細胞紡錘體組裝障礙、細胞染色體排列異常和非整倍體增加,影響卵母細胞以及顆粒細胞的增殖,致使卵泡發(fā)育受阻與卵泡閉鎖[24]。線粒體動力學(xué)失衡可增加ROS的產(chǎn)生,ROS可誘導(dǎo)Drp1活化后與其受體相互作用,導(dǎo)致線粒體膜電位下降、分裂增多及OS等。線粒體動力學(xué)參與調(diào)節(jié)多種組織器官的胰島素敏感性,參與PCOS患者IR、肥胖等代謝異常的發(fā)生發(fā)展。小鼠脂肪細胞選擇性敲除Mfn2或OPA1可導(dǎo)致線粒體結(jié)構(gòu)異常,使細胞內(nèi)三酰甘油累積,引發(fā)IR及肥胖,在高脂飲食小鼠中Mfn1/2表達下降,Drp1表達上升[25]。綜上,線粒體動力學(xué)與IR、OS、糖脂代謝異常、肥胖等密切相關(guān),且可相互調(diào)控,參與PCOS的發(fā)生和發(fā)展。

    2.8 線粒體自噬異常與PCOS線粒體自噬是指細胞通過自噬選擇性包裹和降解細胞內(nèi)受損的線粒體,維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的過程。自噬不僅受多種自噬相關(guān)基因(ATG)Beclin1(又稱ATG6)的調(diào)控,同時受微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ核心調(diào)節(jié)因子的調(diào)控。線粒體自噬異常與卵泡發(fā)育、糖脂代謝異常等密切相關(guān)。研究證實PCOS動物模型及患者的卵巢組織均存在自噬基因和相關(guān)通路的異常激活;PCOS患者中異常激活的自噬基因包括叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O亞族1(FOXO1)、細胞外蛋白調(diào)節(jié)激酶1/9(MAPK1/9)、胰島素樣生長因子1(IGF1)、抑癌基因P53(TP53)、表皮生長因子受體(EGFR)等,以上基因可通過雷帕霉素靶蛋白(MTOR)、受體酪氨酸激酶(ERBB)等相關(guān)信號通路導(dǎo)致自噬異常激活[26]。在合并IR的PCOS患者中,自噬基因ATG7異常激活、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例升高、細胞自噬增加、顆粒細胞損傷破壞及凋亡增多,誘發(fā)卵泡發(fā)育異常[27]。自噬可通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)參與PCOS的發(fā)生發(fā)展,炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子核因子κB(NF-κB)在合并IR的PCOS患者中顯著升高,其可上調(diào)自噬相關(guān)蛋白Beclin1和p62轉(zhuǎn)錄水平[28]。Toll樣受體(TLR)信號通路在合并肥胖的PCOS患者中異常激活,Beclin1與銜接蛋白相互作用后減少了與Bcl-2的結(jié)合,激活TLR通路誘導(dǎo)細胞自噬[29]。腫瘤壞死因子α(TNF-α)和干擾素-γ(IFN-γ)等炎性細胞因子水平升高可增加線粒體自噬,加速炎癥反應(yīng)進程,提高卵泡膜細胞類固醇生成酶活性,導(dǎo)致雄激素水平增加[26]。線粒體自噬異常與PCOS密切相關(guān),其具體致病機制仍需進一步研究。

    3 線粒體功能修復(fù)在PCOS治療中的應(yīng)用

    目前治療PCOS的常見方式有生活方式干預(yù)、藥物治療等,線粒體移植為近年來新的治療方向,以上治療基于線粒體功能修復(fù)的機制可能包括:(1)修復(fù)受損的mtDNA,減少由mtDNA損傷導(dǎo)致的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細胞凋亡。(2)增加能量代謝中間代謝物生成,增加ATP合成。(3)上調(diào)細胞因子和趨化因子,促進細胞增殖并減少細胞凋亡,增加線粒體生物生成。適當限制高熱量飲食、運動等生活方式干預(yù)可通過激活A(yù)MPK-PGC1α通路促進線粒體生物合成、減少ROS生成和氧化損傷來修復(fù)線粒體功能[30]。研究發(fā)現(xiàn),部分新型藥物通過多靶點促進卵泡生長發(fā)育,改善PCOS患者的卵巢內(nèi)環(huán)境:線粒體營養(yǎng)劑,如L-肉堿、α-硫辛酸、輔酶Q10、白藜蘆醇等可提高細胞抗氧化負荷,降低有害物質(zhì)對線粒體的損害,維持正常線粒體功能;肌醇則可通過白細胞介素-6/轉(zhuǎn)錄激活因子-3/微小RNA-155/過氧化物酶體增殖物激活受體γ(IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ)通路改善IR、調(diào)節(jié)細胞自噬水平來改善線粒體功能[31]。線粒體分裂抑制劑,如Mdivi1、P110、Dynasore等可靶向保護線粒體結(jié)構(gòu)完整性,維持線粒體動力學(xué)穩(wěn)定[30]。

    線粒體移植包括異體移植與自體移植兩種,因前者存在倫理爭議和異質(zhì)性風(fēng)險,自體線粒體移植更易被接受,是PCOS治療的新方向。自體移植的線粒體來自未成熟的卵母細胞、顆粒細胞、卵巢干細胞和脂肪干細胞等。動物研究發(fā)現(xiàn),分離純化的線粒體可快速、直接進入哺乳動物細胞中并正常發(fā)揮自身功能,線粒體移植可提高線粒體功能、改善胚胎發(fā)育質(zhì)量,得到可存活的動物后代[32]。Oktay等[33]以10例反復(fù)移植失敗患者為研究對象,通過卵泡漿內(nèi)單精子注射(ICSI)將分類篩選后的自體線粒體與精子一同注射到卵細胞中,與同一患者先前移植周期結(jié)果相比,此次受精率更高(78.3%和47.9%,P=0.036)、胚胎質(zhì)量更好(3.1%和2.3%,P=0.082)。但另有研究發(fā)現(xiàn),在57例既往體外受精-胚胎移植(IVF-ET)失敗且有充分證據(jù)證明胚胎質(zhì)量差的不良妊娠患者實施線粒體移植后,每個移植胚胎的累積活產(chǎn)率無明顯差異(41.2%和41.7%,P=0.970)[34]。上述結(jié)論不一致可能由樣本量、研究方法以及患者生殖助孕周期方案差異等多方面因素導(dǎo)致,未來仍需進一步研究線粒體移植是否為改善PCOS的卵母細胞及胚胎質(zhì)量的可行方法。

    4 展望

    基于線粒體功能修復(fù)的治療方法在PCOS動物模型和臨床研究已有初步探索,確證其安全性和有效性后,未來有望成為PCOS治療的潛在方法和手段;但也還需要進一步研究線粒體功能障礙與PCOS的發(fā)病機制及與PCOS臨床表型之間的聯(lián)系、篩選評估疾病預(yù)后的生物標記物,以期為以線粒體為靶點的精準治療提供科學(xué)依據(jù)和新思路。

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