齊笑笑,郭嘉,溫紀(jì)平
(河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院,河南 鄭州 450001)
小麥?zhǔn)侨髠鹘y(tǒng)谷物之一,是主要的糧食作物。小麥中富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),但由于天氣原因、貯藏條件不當(dāng)?shù)纫蛩?,小麥吸水受潮后品質(zhì)會(huì)發(fā)生劣變,如內(nèi)部酶活性升高,總淀粉、粗脂肪和蛋白質(zhì)含量減少,出粉率、灰分、千粒重和容重降低[1-2]。隨著發(fā)芽程度的加深,面筋越來(lái)越弱,面團(tuán)易流變,小麥加工品質(zhì)和食用品質(zhì)明顯下降,導(dǎo)致價(jià)格降低[3],且多用作飼料生產(chǎn),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和資源浪費(fèi)[4]。研究表明,小麥發(fā)芽過(guò)程中蛋白酶活性增強(qiáng)易導(dǎo)致大部分的蛋白質(zhì)水解,蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)變得更加疏松,部分大分子蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變成小分子蛋白質(zhì),使清蛋白、球蛋白含量增加[5];另外萌動(dòng)也會(huì)使-SH、S-S含量減少、氨基酸含量增加、面筋蛋白的功能特性如持水力、持油力升高[6]。
解決發(fā)芽小麥品質(zhì)劣變的問(wèn)題,一方面可以通過(guò)培育抗穗發(fā)芽的小麥種子[7];另一方面可以從發(fā)芽小麥角度出發(fā),對(duì)芽麥進(jìn)行不同手段的處理,來(lái)改善發(fā)芽小麥品質(zhì),主要包括微波輻照、加熱處理、添加酶抑制劑、剝皮制粉、配粉配麥等[8]。但現(xiàn)有的處理手段具有一定的局限性,如剝皮制粉易使碎麥麩進(jìn)入面粉而降低其質(zhì)量,配粉配麥需要利用正常小麥,微波處理和熱處理會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)造成不利影響。氣流分級(jí)是一種對(duì)組分無(wú)破壞的物理方法,可以有效改善萌動(dòng)小麥粉的品質(zhì)[9]。該法利用顆粒粒徑不同在空氣中受到的氣體曳力、自身重力和離心力的綜合作用不同,將粗粒沉降細(xì)粒帶走,從而對(duì)不同粒徑的顆粒實(shí)現(xiàn)分級(jí)[10]。
本研究對(duì)小麥進(jìn)行發(fā)芽處理,分別得到未發(fā)芽小麥粉(WF)和發(fā)芽小麥粉(SF),并對(duì)SF進(jìn)行氣流分級(jí)后按照粒徑大小分為F1、F2和F3,共5種小麥粉,以此為原料,通過(guò)對(duì)其蛋白質(zhì)含量、面筋指數(shù)、巰基二硫鍵含量、面筋蛋白的功能特性、動(dòng)態(tài)流變學(xué)特性、氨基酸含量等進(jìn)行測(cè)定分析,探究氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白特性的影響規(guī)律。
百農(nóng)307:河南秋樂(lè)種業(yè)科技股份有限公司;L-半胱氨酸、β-巰基乙醇、Tris、甘氨酸、5,5-二硫代-2-2硝基苯甲酸 (5,5-dithio bis-2-2-nitrobenzoic acid,DTNB)、乙二胺四乙酸二鈉(ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt,EDTA):上海麥克林生化科技有限公司;十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulphate,SDS):北京索萊寶科技有限公司;三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)、鹽酸、硼酸、尿素、氯化鈉、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇:天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。以上均為分析純。
LRH-550-S恒溫恒濕培養(yǎng)箱:韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司;MLU-202型布勒實(shí)驗(yàn)?zāi)ィ喝鹗坎祭占瘓F(tuán);AF200氣流分級(jí)機(jī):山東濰坊精華粉體工程有限公司;NKT-2010L激光粒度分析儀:山東耐克特儀器有限公司;HFQ型面粉混合器:開(kāi)封海德機(jī)械有限公司;HJ-6磁力加熱攪拌器:金壇市西城新瑞儀器廠;THZ-82A水浴恒溫振蕩器:金壇市杰瑞爾電器有限公司;LXJ-IIB離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠;UV2150紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):尤尼柯(上海)儀器有限公司;FOSS TM8400凱氏定氮儀:丹麥FOSS儀器公司;Freezone6 plus冷凍干燥機(jī):美國(guó)Labconco有限公司;S-433D氨基酸分析儀:德國(guó)SYKNM公司;MARS60哈克流變儀:美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;VTMR20-010V-T型核磁共振變溫分析系統(tǒng):上海紐邁電子科技有限公司。
1.3.1 樣品制備
發(fā)芽小麥制備:將除雜后的小麥籽粒室溫(25℃)下浸泡4 h,瀝干水分后鋪在托盤(pán)上,放入恒溫恒濕培養(yǎng)箱中于 20℃、相對(duì)濕度(relative humidity,RH)85%條件下培養(yǎng)12 h,將發(fā)芽好的小麥放入45℃的電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥12 h,使水分降到13%以下,室溫(25℃)保存。
小麥粉制備:小麥在室溫(25℃)下潤(rùn)麥,加水調(diào)質(zhì)約24 h,目標(biāo)水分為15%。采用MLU-202型布勒實(shí)驗(yàn)?zāi)ツシ郏占飨到y(tǒng)粉混勻,控制出粉率在70%左右。將部分發(fā)芽小麥粉(SF)進(jìn)行氣流分級(jí),得到3種不同粒徑的發(fā)芽小麥粉(F1、F2、F3),5種粉的粒徑分布見(jiàn)表1,相同環(huán)境下密封保存于4℃冰箱中。
表1 5種小麥粉的粒徑分布Table 1 Particle size distribution of 5 kinds of wheat flour
面筋蛋白制備:參考徐小青等[11]的方法,并略作修改,將小麥粉制成面團(tuán)后,采用水洗法提取面筋蛋白,真空冷凍干燥48 h,用高速粉碎機(jī)粉碎后過(guò)80目篩,密封保存于4℃冰箱中備用。
1.3.2 蛋白組分的提取及蛋白含量測(cè)定
總蛋白含量的測(cè)定:參照GB 5009.5—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》中自動(dòng)凱氏定氮儀法進(jìn)行測(cè)定,系數(shù)為5.70。
谷蛋白大聚體(glutenin macropolymer,GMP)含量的測(cè)定:1.00 g小麥粉,加入20 mL 1.5%十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulphate,SDS)溶液,旋渦振蕩混勻,30℃水浴30 min,4 000 r/min離心15 min,棄上清液,用凱氏定氮法測(cè)定其含量,系數(shù)為6.25。
清蛋白含量的測(cè)定:1.00 g小麥粉加10 mL蒸餾水,50℃水浴30min,4 000 r/min離心20 min,收集上清液;蒸餾水洗沉淀2次,每次10 mL,50℃水浴10 min,4 000 r/min離心10 min,收集所有上清液,待測(cè)。
球蛋白含量的測(cè)定:上述沉淀用10%的氯化鈉溶液提取,提取方法同清蛋白的提取方法。
麥醇溶蛋白含量的測(cè)定:沉淀用75%的乙醇溶液提取,提取方法同清蛋白的提取方法。
麥谷蛋白含量的測(cè)定:沉淀用0.2%的氫氧化鈉溶液提取,提取方法同清蛋白的提取方法。
上清液收集合并后,用凱氏定氮法測(cè)定其含量,換算系數(shù)為6.25。
1.3.3 面筋含量和指數(shù)的測(cè)定
濕面筋含量的測(cè)定:參照GB/T 5506.2—2008《小麥和小麥粉面筋含量第2部分:儀器法測(cè)定濕面筋》測(cè)定;干面筋含量測(cè)定:參照GB/T 5506.4—2008《小麥和小麥粉面筋含量第4部分:快速干燥法測(cè)定干面筋》測(cè)定;面筋指數(shù)的測(cè)定:參照LS/T 6102—1995《小麥粉濕面筋質(zhì)量測(cè)定法面筋指數(shù)法》測(cè)定。
1.3.4 面筋蛋白總巰基、游離巰基和二硫鍵含量的測(cè)定
參考郭興鳳等[12]的方法,并略作修改,繪制L-半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。用0.2 mol/L Tris-Gly緩沖溶液配制2 mmol/L L-半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,在412 nm處測(cè)定其吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(吸光度為橫坐標(biāo)),得到y(tǒng)=0.076 3x+0.000 2,R2=0.999 5。
游離巰基(-SH)含量的測(cè)定:0.03 g面筋蛋白,溶于10 mL 0.2 mol/L Tris-Gly緩沖溶液,4 000 r/min離心15 min;取4 mL上清液,加0.1 mL 10 mmol/L的DTNB溶液,混勻后顯色20 min,在412 nm處測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離巰基的含量。
式中:y為樣品在412 nm處吸光度對(duì)應(yīng)的L-半胱氨酸濃度,μmol/mL;m為樣品質(zhì)量,g。
總巰基、二硫鍵含量的測(cè)定:取上述上清液1 mL,加入0.1 mL β-巰基乙醇和3 mL緩沖液,25℃下保溫1 h;再加入10 mL 12%的三氯乙酸,再次25℃下保溫1 h,4 500 r/min離心15 min;除去上清液,將沉淀用5 mL 12%的三氯乙酸洗滌兩次后,溶于8 mL緩沖液,取4 mL上述溶解于沉淀的溶液,加入0.1 mL DTNB,混勻后顯色20 min,在412 nm處測(cè)定吸光度。
式中:y為樣品在412 nm處吸光度對(duì)應(yīng)的L-半胱氨酸濃度,μmol/mL;m為樣品質(zhì)量,g。
1.3.5 面筋蛋白功能特性測(cè)定
持水力的測(cè)定:1.00 g面筋蛋白(m1)于50 mL離心管中,放入轉(zhuǎn)子后稱量總質(zhì)量m2,加入25 mL蒸餾水磁力攪拌30 min,2 000 r/min下離心30 min,除去上層水分后稱質(zhì)量(m3),計(jì)算公式如下。
持油力的測(cè)定:2.00 g面筋蛋白(m1)用10 mL大豆色拉油攪拌,操作如持水力的測(cè)定,計(jì)算公式如下。
1.3.6 面筋蛋白動(dòng)態(tài)流變學(xué)特性測(cè)定
參考黃蓮燕等[13]的方法,并略作修改,按照1.3.3中儀器法測(cè)定濕面筋含量的方法洗出濕面筋,從中心部位取2 g左右濕面筋,揉成小球置于35 mm圓形平板中央,平板間距1 mm,用刮板刮去多余樣品,頻率變化范圍為0.1 Hz~10.0 Hz,測(cè)試溫度為30℃,應(yīng)力為1%。用哈克流變儀測(cè)定其彈性模量(G′)、黏性模量(G″)和損耗角正切值(tan δ)隨頻率的變化。
1.3.7 面筋蛋白中氨基酸含量的測(cè)定
參照GB 5009.124—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定》進(jìn)行測(cè)定。
每個(gè)試驗(yàn)至少重復(fù)3次,試驗(yàn)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。采用Excel和SPSS 20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理,采用Duncan極差法分析數(shù)據(jù)在P<0.05水平上的顯著性。采用Origin 8.0軟件進(jìn)行作圖。
小麥中的蛋白質(zhì)是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉蛋白質(zhì)含量的影響如圖1所示。
圖1 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉蛋白質(zhì)含量的影響Fig.1 The effect of air classification on the protein content of sprouted wheat flour
由圖1可知,小麥發(fā)芽后,SF總蛋白含量顯著降低,這是由于發(fā)芽會(huì)導(dǎo)致蛋白酶活性增強(qiáng),將部分蛋白質(zhì)水解成氨基酸或轉(zhuǎn)化為酰胺來(lái)滿足自身的生長(zhǎng)需要,使蛋白質(zhì)含量降低。GMP不溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的SDS緩沖溶液,GMP占總蛋白的比例不大,但與小麥的加工品質(zhì)密切相關(guān),可以用于面筋品質(zhì)和面團(tuán)特性的預(yù)測(cè)[14]。發(fā)芽前后和氣流分級(jí)后GMP含量沒(méi)有顯著差異。
小麥中的蛋白質(zhì)根據(jù)溶解性不同可以分為清蛋白、球蛋白、麥醇溶蛋白和麥谷蛋白。清蛋白和球蛋白是小分子蛋白,被稱為生理活性蛋白,含有較高水平的氨基酸,不參與面筋網(wǎng)絡(luò)的形成;而麥醇溶蛋白和麥谷蛋白是大分子蛋白,被稱為面筋蛋白,參與面筋網(wǎng)絡(luò)的形成。如圖1所示,發(fā)芽后SF清蛋白含量升高,球蛋白含量無(wú)顯著差異,麥醇溶蛋白和麥谷蛋白降低,這與金玉紅等[15]的研究一致,說(shuō)明在發(fā)芽過(guò)程中蛋白質(zhì)處于不斷分解與合成的動(dòng)態(tài)。氣流分級(jí)后,隨著粒徑的減小,F(xiàn)1、F2、F3清蛋白含量逐漸減少,球蛋白含量逐漸增加,麥醇溶蛋白與麥谷蛋白都是先增加再減小。說(shuō)明清蛋白、麥醇溶蛋白和麥谷蛋白主要分布于大中粒徑粉中,球蛋白分布在小粒徑粉中。小麥胚乳中蛋白質(zhì)含量從中心到皮層依次增加[16],由此說(shuō)明小粒徑粉更接近于胚乳中心,而大中粒徑粉更接近于皮層。
面筋是由麥谷蛋白與麥醇溶蛋白通過(guò)二硫鍵交聯(lián)形成的凝聚物,面筋指數(shù)反映面筋的品質(zhì),面筋含量和品質(zhì)是評(píng)價(jià)面團(tuán)品質(zhì)的重要標(biāo)志[17]。氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋特性的影響見(jiàn)表2。
表2 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋含量和指數(shù)的影響Table 2 The effect of air classification on the gluten content and quality of sprouted wheat flour
由表2可知,發(fā)芽后SF的面筋含量與面筋指數(shù)均降低;氣流分級(jí)后,隨著粒徑的減少,F(xiàn)1、F2、F3的面筋含量與面筋指數(shù)均呈下降趨勢(shì),且F1的濕面筋含量和面筋指數(shù)與SF相比有顯著升高,與WF相比也有升高。這是由于隨著粒徑的減小,蛋白質(zhì)碎片流失,從而導(dǎo)致面筋含量降低[18]。面筋由麥谷蛋白和麥醇溶蛋白組成,其含量越高,面筋的品質(zhì)越好,結(jié)合圖1分析可知,隨著麥谷蛋白與麥醇溶蛋白的比例減小,面筋品質(zhì)變差,手洗面筋時(shí)難以成團(tuán),面筋含量也會(huì)降低。結(jié)果表明F1中面筋品質(zhì)更好。
巰基的存在方式和含量與面筋的性質(zhì)息息相關(guān),二硫鍵是一種共價(jià)鍵,S-S的含量代表蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,S-S與還原酶作用會(huì)產(chǎn)生游離-SH,游離-SH對(duì)蛋白質(zhì)的交聯(lián)作用有很大影響,會(huì)破壞蛋白質(zhì)構(gòu)象的穩(wěn)定性[19]。氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉中巰基、二硫鍵含量的影響見(jiàn)圖2。
圖2 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉中巰基、二硫鍵含量的影響Fig.2 The effect of air classification on the content of sulfhydryl and disulfide bonds in sprouted wheat flour
如圖2所示,發(fā)芽后,SF的總巰基、二硫鍵含量降低;氣流分級(jí)后,隨著粒徑的減小,F(xiàn)1、F2、F3的總巰基與二硫鍵含量逐漸減少,且F1與WF相比有顯著增加,F(xiàn)2、F3與SF無(wú)顯著差異;游離巰基的含量先下降后上升。這說(shuō)明隨著粒徑的減小,面團(tuán)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)從穩(wěn)定的S-S結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)椴环€(wěn)定的-SH結(jié)構(gòu),導(dǎo)致內(nèi)部交聯(lián)聚合緊密度的變化,面團(tuán)中面筋網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)變得疏松,面團(tuán)強(qiáng)度變?nèi)酢=Y(jié)果表明F1中蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。
蛋白質(zhì)的持水力是決定食品彈性和可塑性的主要因素,決定了蛋白質(zhì)分子的內(nèi)聚力和可分散性;持油力是蛋白質(zhì)和脂類結(jié)合能力的表現(xiàn),在不同的油脂中作用能力不同。氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白持水力和持油力的影響見(jiàn)表3。
表3 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白持水力和持油力的影響Table 3 Effect of air classification on water holding capacity and oil holding capacity of sprouted wheat flour gluten
由表3可知,發(fā)芽后,SF的持水力和持油力均有增加,且持水力有顯著差異;氣流分級(jí)后,隨著粒徑的減小,F(xiàn)1、F2、F3的持水力和持油力逐漸增加,且F1、F2與WF無(wú)顯著差異。這是由于在正常情況下,蛋白質(zhì)分子中的帶電基團(tuán)和極性基團(tuán)在分子內(nèi)部無(wú)法與水或油結(jié)合。但在發(fā)芽后,蛋白酶活性升高,使部分蛋白質(zhì)發(fā)生分解,這些基團(tuán)被暴露出來(lái),且隨著粒徑的減小更容易被暴露出來(lái),從而加速與水或油結(jié)合,增強(qiáng)了持水力或持油力[20]。
彈性模量G′又稱儲(chǔ)能模量,反映了彈性特征的減少量;黏性模量G″又稱損耗模量,反映了黏性特征的增加量;損耗角正切值 tan δ 是 G″與 G′的比值,tan δ<1表明在線性范圍內(nèi)的形變是可壓縮和可恢復(fù)的,tan δ越小說(shuō)明面筋體系聚合度越大或高聚物含量越多[21]。在固定應(yīng)力下,通過(guò)改變振蕩頻率來(lái)觀察面筋蛋白的G′和G″的變化。氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白動(dòng)態(tài)流變學(xué)特性的影響如圖3所示。
圖3 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白動(dòng)態(tài)流變學(xué)特性的影響Fig.3 Effect of air classification on the dynamic rheological properties of sprouted wheat flour gluten
由圖3可知,在0.1 Hz~10.0 Hz的頻率掃描范圍內(nèi),5種粉的面筋蛋白的G′和G″隨著頻率的增加整體呈增大趨勢(shì),且彈性模量始終大于黏性模量,說(shuō)明表現(xiàn)出固體的性質(zhì)。在同一頻率下,F(xiàn)3的G′和G″均是最高的,說(shuō)明F3的彈性變得越來(lái)越差,黏性越來(lái)越好,發(fā)生形變后不易恢復(fù)。如圖3所示,隨著頻率的增加,WF、SF和F3的tan δ先減小后增大,F(xiàn)1和F2的tan δ逐漸增大,且均小于1。在同一頻率下,發(fā)芽后SF的tan δ與WF相比增大了,說(shuō)明SF面筋體系中的彈性比例變小,流動(dòng)性變大,面筋強(qiáng)度下降,與2.2中面筋指數(shù)結(jié)果是一致的。
氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白中氨基酸的含量變化如表4所示。
表4 氣流分級(jí)對(duì)發(fā)芽小麥粉面筋蛋白中氨基酸的影響Table 4 Effect of airflow classification on amino acids in gluten protein of sprouted wheat flour g/100 g
由表4可知,發(fā)芽前后與氣流分級(jí)后,小麥粉中的氨基酸種類數(shù)量齊全,共檢測(cè)到17種氨基酸,其中谷氨酸含量最高;在必需氨基酸中,亮氨酸含量最高。小麥發(fā)芽后,除半胱氨酸外,其余16種氨基酸含量均增加,這與龍杰等[22]的研究結(jié)果一致。氣流分級(jí)后,F(xiàn)1的氨基酸含量是5種粉中最高的,F(xiàn)2、F3與SF相比沒(méi)有顯著變化,與WF相比有增加。賴氨酸作為小麥蛋白質(zhì)的第一限制氨基酸,在發(fā)芽后增加,F(xiàn)1時(shí)達(dá)到最大值。這是由于小麥發(fā)芽后部分蛋白質(zhì)受酶活性升高而水解為游離氨基酸,使氨基酸含量上升[23]。結(jié)果表明F1中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高。
小麥發(fā)芽后,SF的總蛋白含量下降、清蛋白含量升高、麥醇溶蛋白與麥谷蛋白含量降低;面筋指數(shù)顯著降低、總巰基與二硫鍵含量顯著下降,面筋品質(zhì)與蛋白質(zhì)穩(wěn)定結(jié)構(gòu)變差;面筋蛋白的持水力和持油力升高,彈性下降、黏性上升;代表營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的氨基酸含量發(fā)芽后增加。
氣流分級(jí)后,與 SF 相比,F(xiàn)1、F2、F3 的 GMP、球蛋白與麥醇溶蛋白含量均無(wú)顯著變化,F(xiàn)1的總蛋白與清蛋白含量顯著增加,F(xiàn)1面筋含量與指數(shù)升高、F2無(wú)顯著差異、F3明顯下降;F1的總巰基與二硫鍵含量顯著增加,F(xiàn)2、F3無(wú)顯著變化;F1的持水力和持油力顯著下降、F2也有下降且二者與WF無(wú)顯著差異,F(xiàn)3升高;F1與F2的彈性模量和黏性模量均下降,F(xiàn)3升高,且F1的tan δ低于SF;F1的大部分氨基酸含量呈增加趨勢(shì),F(xiàn)2與F3整體降低。
綜上所述,小麥發(fā)芽后面筋含量、品質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性變差,面筋蛋白的功能特性、黏性與氨基酸含量升高,彈性降低;經(jīng)氣流分級(jí)后,F(xiàn)1的面筋品質(zhì)變好、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定、面筋蛋白彈性增加、黏性降低、氨基酸含量增加,其余指標(biāo)與WF無(wú)顯著差異。因此氣流分級(jí)在發(fā)芽小麥上的應(yīng)用值得更多研究。