梅毒患者血漿中IL-27和IL-35水平變化及其臨床意義

賀勇鋒 謝惠琴 程曉慧 余進(jìn)勝

摘要：目的 探討梅毒患者血漿中IL-27、IL-35的水平變化及臨床意義。方法 選取2021年3月～2022年4月我院皮膚科門診收治梅毒患者54例（試驗(yàn)組）， 根據(jù)梅毒滴度水平分為高滴度組30例和低滴度組24例。同時(shí)收集10例在我院進(jìn)行體檢的健康職工志愿者為對(duì)照組。采用ELISA法測(cè)定各組血漿中IL-27、IL-35水平并進(jìn)行比較，分析其水平差異與RPR滴度的相關(guān)性。另外，抽取10例跟蹤治療患者樣本，分析梅毒患者治療前后血漿中IL-27和IL-35的水平變化情況。結(jié)果 試驗(yàn)組血漿IL-27、IL-35水平均高于對(duì)照組（P＜0.05）；高滴度組IL-27、IL-35水平均高于低滴度組，但兩組IL-27、IL-35的水平均無顯著差異（P＞0.05）；治療后梅毒患者IL-27和IL-35水平較治療前均降低，但兩者治療前后水平均無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論 梅毒患者具有較高的血漿IL-27、IL-35水平，提示IL-27和IL-35可能和梅毒細(xì)胞免疫有一定的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞： IL-27；IL-35；梅毒RPR滴度

梅毒是一種系統(tǒng)性的性傳播疾病，能夠引起人體全身組織和器官的損害和病變[1]?，F(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展，城市化進(jìn)程也逐步加快，高密度的人口加快了性疾病傳播速度，梅毒發(fā)病率逐年上升，對(duì)我國經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展都造成了嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[2]。廣東省的常住人口和流動(dòng)人口數(shù)量居于我國前列，因此它也是我國性病疫情較為嚴(yán)重的地區(qū)，梅毒報(bào)告發(fā)病數(shù)和報(bào)告發(fā)病率居高不下[3]。當(dāng)前對(duì)機(jī)體感染梅毒螺旋體（TP）后的免疫反應(yīng)機(jī)制尚未闡明。TP不激發(fā)先天病原識(shí)別系統(tǒng)，而是在梅毒感染的不同時(shí)期出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞免疫和體液免疫。早期的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)對(duì)清除TP具有重要的作用，晚期的細(xì)胞免疫反應(yīng)是梅毒患者組織損傷的關(guān)鍵原因[4]。IL-27具有較為多樣的生物學(xué)功能，其主要作用是抗感染免疫以及增強(qiáng)自身免疫力；IL-35是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮抑制效應(yīng)所需的抑制性細(xì)胞因子，主要作用是抗炎和免疫抑制[5]。本研究主要通過測(cè)定梅毒患者中血漿IL-27和IL-35的表達(dá)水平，分析其與梅毒細(xì)胞免疫的相關(guān)性及其對(duì)梅毒病程發(fā)展的作用，以期能為患者的臨床治療提供一定的參考作用。

1資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年3月～2022年4月于我院就診的58例梅毒患者為研究對(duì)象（試驗(yàn)組），根據(jù)RPR滴度分為高滴度組（RPR≥1：8）30例和低滴度組（RPR＜1：8）24例。同時(shí)選取在我院體檢的健康職工人群10例作為對(duì)照組；另外，抽取10例跟蹤治療患者樣本，分析治療前后血漿中IL-27和IL-35的水平變化情況。對(duì)照組10例（男6例，女4例），年齡22～50歲，平均年齡（32.20±10.24）歲；高滴度組30例（男18例，女12例），年齡19～50歲，平均年齡（30.13±11.58）歲；低滴度組25例（男12例，女13例），年齡19～50歲，平均年齡（33.83±13.30）歲。各組患者性別、年齡等比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：此次究病例選取均按照《梅毒診斷（WS273—2018）》的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后，所有患者均知情同意并自愿參與本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：需要復(fù)雜、全面監(jiān)測(cè)和處理的嚴(yán)重心肺疾病患者；嚴(yán)重肝腎功能不全或衰竭患者；有顯著呼吸系統(tǒng)疾病患者，近期患上呼吸道感染有明顯發(fā)熱、喘息、鼻塞和咳嗽等；不愿意參加或不積極配合的患者；因各種原因無法配合此次研究的患者；依據(jù)篩選條件通過科室信息管理系統(tǒng)對(duì)每天進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測(cè)（TPPA、RPR及TRUST）的患者數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選整理并建立檔案。

1.3 方法

確診后的梅毒患者及健康志愿者立即進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)，抽取患者和志愿者外周肘靜脈血5 ml，先室溫靜置20 min，待血液凝固后將標(biāo)本放入離心機(jī)，以3000 r/min的速度離心20 min，將患者血漿置于-80℃環(huán)境中保存待檢；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿IL-27、IL-35水平；然后采用快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)檢測(cè)RPR滴度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用ｔ檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用比率表示，采用χ2檢驗(yàn)，（P＜0.05）為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組IL-27、IL-35表達(dá)水平比較

實(shí)驗(yàn)組血漿IL-27和IL-35水平均高于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

2.2 高滴度組與低滴度組IL-27、IL-35表達(dá)水平比較

高滴度組、低滴度組患者血漿IL-27、IL-35水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 治療前后梅毒患者IL-27、IL-35表達(dá)水平比較

治療前后梅毒患者血漿IL-27水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療前后患者IL-35水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.059）。見表3。

3討論

目前，梅毒仍然是全球較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。它的病程長，臨床癥狀復(fù)雜多樣，累及全身多個(gè)器官和組織，臨床上常會(huì)造成漏診和誤診，影響梅毒患者的診斷和治療。雖然目前梅毒的發(fā)病機(jī)制不明確，但已知其與細(xì)胞免疫密切相關(guān)，且認(rèn)為細(xì)胞免疫抑制對(duì)梅毒病程的發(fā)展具有關(guān)鍵作用[6]。梅毒的細(xì)胞免疫機(jī)制極其復(fù)雜，T細(xì)胞免疫、巨噬細(xì)胞免疫、樹突狀細(xì)胞免疫、NK細(xì)胞免疫和細(xì)胞因子等形成了復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)，它們密切相關(guān)且都對(duì)梅毒的感染以及病程的發(fā)展有著重要的影響[7]。早在1992年就有國外學(xué)者提出梅毒病程Th1/Th2反應(yīng)失衡的學(xué)說：早期發(fā)病以Th1型反應(yīng)介導(dǎo)為主，隨著病程發(fā)展逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)門h2型反應(yīng)介導(dǎo)為主，認(rèn)為TP的清除主要是Th1細(xì)胞免疫，但是當(dāng)Th1/Th2失衡，往Th2細(xì)胞方向分化，抑制了機(jī)體的細(xì)胞免疫，從而導(dǎo)致梅毒病程的遷延。另外，在梅毒細(xì)胞免疫機(jī)制中研究較多的還有Treg/Th17的失衡。有研究表明，患者體內(nèi)Treg/Th17細(xì)胞失衡會(huì)造成免疫抑制，削弱了機(jī)體對(duì)梅毒螺旋體的控制。

IL-27是由EB病毒誘導(dǎo)基因3（EBI3）和p28兩個(gè)亞基通過二硫鍵連接組成的異源二聚體復(fù)合物。IL-27主要由活化的抗原提呈細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌，是一種具有抗炎和促炎效應(yīng)的多效細(xì)胞因子，與T細(xì)胞免疫密切相關(guān)。IL-27可以誘導(dǎo)初始CD4＋T細(xì)胞往Th1型細(xì)胞方向分化，介導(dǎo)了Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)，抑制Th2細(xì)胞應(yīng)答，通過刺激自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ抑制了Th2型細(xì)胞及因子IL-4的產(chǎn)生，糾正Th2型細(xì)胞免疫的漂移，維持Th1/Th2比例平衡[8]。IL-35是由EB病毒誘導(dǎo)基因3（EBI13）和IL-12的p35亞基組成的異二聚體。Collison等首先發(fā)現(xiàn)IL-35是由Treg細(xì)胞產(chǎn)生，在Treg細(xì)胞的抑制功能中具有關(guān)鍵作用的抑制性細(xì)胞因子。Treg細(xì)胞能夠分泌相關(guān)的細(xì)胞因子，如TGF-β、IL-35、IL-10等，發(fā)揮負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用。而梅毒患者中具有抑制性效應(yīng)的Treg細(xì)胞增多會(huì)導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能受到抑制，從而減少了機(jī)體對(duì)TP的清除作用[9]。

本研究對(duì)比了梅毒患者和健康人群血漿IL-27和IL-35水平，結(jié)果顯示兩組之間IL-27和IL-35的水平均存在顯著差異，梅毒患者IL-27和IL-35水平均高于健康人群。IL-27的研究結(jié)果與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似，說明了IL-27對(duì)梅毒的細(xì)胞免疫抑制功能存在一定的作用。此外，梅毒患者IL-35的表達(dá)升高也可以說明了IL-35可能與梅毒細(xì)胞免疫具有相關(guān)性，但相關(guān)報(bào)道較少，因此IL-35的具體作用機(jī)制有待深入探究。

本研究還檢測(cè)了不同RPR滴度梅毒患者IL-27和IL-35的水平，同時(shí)也追蹤了10例治療前后的梅毒患者，對(duì)其進(jìn)行了IL-27和IL-35的水平比對(duì)，結(jié)果顯示各組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。考慮原因：IL-27和IL-35在復(fù)雜的梅毒細(xì)胞免疫網(wǎng)絡(luò)中也是需要通過與其他細(xì)胞因子以及信號(hào)通路的相互影響來發(fā)揮作用的。未來可能需要增加聯(lián)合檢測(cè)TGF-β、IL-10、IL-4IFN-γ等相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平，分析它們與IL-27、IL-35的相互作用，進(jìn)而研究是否存在其他免疫機(jī)制影響這兩種細(xì)胞因子發(fā)揮作用，進(jìn)一步影響了梅毒細(xì)胞免疫機(jī)制以及梅毒病程的發(fā)展。其次，梅毒患者經(jīng)過規(guī)范的抗梅治療后，大部分一期梅毒會(huì)在1年內(nèi)血清學(xué)試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰，二期梅毒在2年內(nèi)陰轉(zhuǎn)，尚有部分患者會(huì)長期維持梅毒血清固定狀態(tài)。因此，在接下來的研究中可能需要延長對(duì)患者治療前后的追蹤觀察時(shí)間以及增加相關(guān)的病例數(shù)進(jìn)一步觀察。

綜上所述，梅毒患者血漿IL-27和IL-35水平均升高，二者參與了梅毒發(fā)展的免疫應(yīng)答過程，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。IL-27和IL-35可作為觀察指標(biāo)為梅毒診斷及了解其細(xì)胞免疫功能的重要依據(jù)。

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