寒涼性活血化瘀中藥及其化學成分抗血小板聚集作用機制的研究進展*

俞佳峰 吳先昊 胡翠 彭智祥 王亞敏 張娣 王小青 李雪

（江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046）

心血管類疾病隨著社會老齡化的加重以及發(fā)病趨勢日漸年輕化，已經(jīng)成為全世界高致死率疾病之一[1]，而血栓又是誘發(fā)心腦血管類疾病的重要因素。血栓的形成原因復(fù)雜，影響因素多，如內(nèi)皮細胞損傷、血小板聚集、血液流變學異常等，其中血小板聚集是導(dǎo)致血栓形成的關(guān)鍵因素，抑制血小板聚集是治療血栓最直接有效的策略之一[2]。目前對于血栓治療的主要藥物是抗血小板聚集類，如氯匹格雷、阿司匹林、替羅非班和阿昔單抗等，按各個藥物作用機制的不同可以分為鈣離子（Ca2+）通道拮抗劑、凝血酶受體拮抗劑、血栓素A2（TXA2）抑制劑、二磷酸腺苷（ADP）受體抑制劑、5-羥色胺（5-HT）受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑和糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體抑制劑等[3]。盡管此類藥物的研發(fā)和使用歷史悠久，且機制研究的相對透徹，但在一定程度上仍然會使患者出現(xiàn)過敏反應(yīng)、出血、再生障礙性貧血、血小板減少及血小板減少性紫癜等不良癥狀?；钛鲱愔兴幵谥委熝“寰奂瘯r具有副作用小、藥性溫和、作用靶點多等特點，且效果較佳[4]，但目前并未明確活血化瘀類中藥抗血小板聚集作用的途徑和靶點，本研究通過查閱《江西省中藥材標準》2014版和《中國藥典》2020版，共搜集并整理了149味具有活血化瘀功效的中藥，其中39味活血化瘀中藥的抗血小板聚集功效具有明確的文獻報道，同時對其藥性進行了歸納整理，并就其中7味寒性（牡丹皮、虎杖、郁金、益母草、赤芍、丹參、大黃）和1味涼性（毛冬青）活血化瘀類中藥抗血小板聚集作用機制進行綜述，以期為進一步研究提供一定的參考?，F(xiàn)綜述如下：

1 抑制花生四烯酸代謝途徑

花生四烯酸（Arachidonic Acid），是全順式-5，8，11，14-二十碳四烯酸（簡稱AA），為一種多不飽和ω-6脂肪酸，廣泛存在于人和動物體內(nèi)，尤其是在神經(jīng)末梢處含量達70%[5～6]，在維持機體細胞膜功能結(jié)構(gòu)等方面具有舉足輕重的作用。抑制AA代謝途徑是抗血小板聚集重要的作用機制之一，當AA進入血液后，在環(huán)氧合酶（COX-1)作用下分解為前列腺素H2（PGH2）和前列腺素G2（PGG2），PGH2和PGG2分別經(jīng)由血栓素合成酶和前列環(huán)素合成酶生成TXA2和前列環(huán)素（PGI2），TXA2和PGI2具有完全相反的藥理活性，其中TXA2具有促進血管收縮、降低環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平、誘導(dǎo)血小板聚集的功效，而PGI2會提高腺苷酸環(huán)化酶活性，導(dǎo)致血小板cAMP水平升高，從而促進血管擴長，抑制血小板聚集。因此保持TXA2和PGI2在機體內(nèi)的動態(tài)平衡對于抑制血小板聚集至關(guān)重要。目前抗血小板聚集機制為抑制花生四烯酸代謝途徑的寒涼性中藥有牡丹皮、郁金、益母草、毛冬青和赤芍。

1.1 牡丹皮牡丹皮常用于跌撲傷痛、營血、溫毒發(fā)斑、夜熱早涼、癰腫瘡毒、經(jīng)閉痛經(jīng)等的治療[7]。丹皮酚和芍藥苷是牡丹皮中的重要活性物質(zhì)，章麗等[8]對丹皮酚和芍藥苷聯(lián)合抗血小板聚集的作用效果進行了研究，研究結(jié)果顯示高、中、低劑量組的丹皮酚和芍藥苷均能顯著抑制AA誘導(dǎo)的家兔血小板聚集，但其并未對AA誘導(dǎo)的血小板聚集相關(guān)機制進行深入研究。陳曉嫚等[9]通過結(jié)構(gòu)修飾及改造，將丹皮酚分別與肉桂酸、阿魏酸和阿司匹林進行作用得到相應(yīng)的丹皮酚酯類化合物，隨后對丹皮酚酯類化合物進行抗血小板聚集活性實驗，結(jié)果顯示丹皮酚酯類化合物對AA誘導(dǎo)的血小板聚集抑制活性高于丹皮酚。丹皮酚在進行結(jié)構(gòu)修飾之前水溶性較差、體內(nèi)代謝慢，因而其生物利用度較低，在對其進行結(jié)構(gòu)修飾后，通過引入極性基團提高其水溶性，進而提高其生物利用度，因此其抗血小板聚集的活性得到了顯著提高，該研究為今后抗血小板聚集的研究提供了一定的指導(dǎo)意義。

1.2 郁金郁金化學成分復(fù)雜，主要含有萜類、生物堿類和姜黃素類，具有廣泛的藥理學活性，包括鎮(zhèn)痛、抗炎和抗腫瘤等，對心腦血管疾病也有很好的療效[10]。宿玉等[11]報道了桂郁金具有抗三氯化鐵誘導(dǎo)的血小板聚集作用，運用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法測定了血小板中血栓烷素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-K-PGF1α）含量，并對6-K-PGF1α與TXB2之間的比值與血栓濕重的相關(guān)性進行了分析。結(jié)果顯示郁金可以顯著降低TXB2水平，同時促進6-K-PGF1α釋放，因而可以保持兩者之間的平衡，從而達到誘導(dǎo)血管舒張，抑制血小板聚集的目的。

1.3 益母草益母草具有多種藥理作用，如收縮子宮、抗血小板聚集、心肌保護等，被稱之為血家圣藥[12]。目前對益母草的研究主要集中于婦科疾病方面，對其抗血小板聚集研究較少。在家兔體外實驗中，張恩立等[13]發(fā)現(xiàn)益母草堿可不同程度地抑制ADP、AA誘導(dǎo)的血小板聚集。

1.4 毛冬青毛冬青的化學成分復(fù)雜，主要含有黃酮類、萜類、香豆素類等，具有廣泛的藥理學活性，在視網(wǎng)膜炎、心絞痛、咽喉炎和抗血小板聚集等方面均具有較佳的活性。譚慶龍[14]從毛冬青乙酸乙酯提取物中分類出了18個化合物，發(fā)現(xiàn)化合物其中8種化合物表現(xiàn)出顯著的抗血小板聚集活性，其中毛冬青皂苷B3體外抗血小板聚集活性最強。后對其抗血小板聚集的作用機制進行了初步探討，通過一系列研究發(fā)現(xiàn)毛冬青皂苷B3對AA、ADP、膠原蛋白和凝血酶原抑制的血小板聚集均具有抑制作用。

1.5 赤芍赤芍具有廣泛的藥理作用，如抗炎、抗腫瘤、保護心腦血管、抑制血小板聚集的目的。章麗等[8]比較了牡丹皮、赤芍和白芍對急性血瘀癥大鼠的影響，并對三者抗血小板聚集機制進行了探討，研究發(fā)現(xiàn)三者均具有顯著的抗凝作用，同時通過對血清中TXA2與PGI2含量的測定，發(fā)現(xiàn)赤芍可以顯著降低血清中TXA2含量，升高PGI2含量，這說明赤芍抗血小板聚集的機制可能與AA通路有關(guān)。

2 抑制血小板內(nèi)容物釋放類中藥

血小板中的亞細胞器如α顆粒和致密顆粒會釋放出相應(yīng)的內(nèi)容物，如血管性血友病因子（vWF）、血小板因子、P-選擇素、纖維蛋白原、蘇氨酸（THR）、5-HT、腺苷三磷酸（ATP）、ADP、血小板活化因子（PAF）和Ca2+等，這些內(nèi)容物會導(dǎo)致血栓和動脈粥樣硬化斑塊的形成。目前抗血小板聚集機制為抑制血小板內(nèi)容物釋放的寒涼性中藥有赤芍、牡丹皮、虎杖、益母草和毛冬青。

2.1 赤芍由于中藥成分的復(fù)雜性，其抗血小板聚集可能有多條途徑。王瀟毅等[15]首先通過Ingenuity通路分析軟件（IPA）篩選出了赤芍已知單體成分的作用靶點，隨后通過實驗進行驗證。IPA結(jié)果顯示：赤芍有可能通過影響一氧化氮（NO）水平、Ca2+濃度和環(huán)磷酸腺苷（cAMP）濃度抑制血小板聚集，研究結(jié)果顯示赤芍可以顯著降低ADP誘導(dǎo)的血小板內(nèi)Ca2+濃度，能顯著提升凝血酶激活血小板時所導(dǎo)致的NO水平降低的作用，同時赤芍對cAMP含量沒有調(diào)控作用。另外有研究報道，赤芍乙醇提取物可以激活K型ATP和K型Ca2+通路，抑制L型Ca2+通道，通過松弛血管平滑肌達到抑制血小板聚集的目的[16]。

2.2 牡丹皮章麗等[8]不僅對牡丹皮抗AA誘導(dǎo)的血小板聚集活性進行了研究，還對其抗膠原和ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性進行了評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牡丹皮中的有效成分丹皮酚與芍藥苷具有顯著的抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性，該研究結(jié)果表明牡丹皮抗血小板聚集的機制可能和抑制致密顆粒釋放ADP有關(guān)。

2.3 虎杖虎杖具有保肝、抗炎和抗腫瘤等藥理作用[17]，有研究報道了其通過抑制血小板內(nèi)容物的釋放途徑來達到抑制血小板聚集的目的[18]，該研究發(fā)現(xiàn)虎杖主要成分黎蘆醇可以抑制細胞內(nèi)Ca2+的釋放，同時較少細胞內(nèi)儲存的Ca2+流入血小板；Ca2+在血小板內(nèi)的含量變化是影響血小板聚集的重要因素，通過減少Ca2+含量可以有效抑制血小板的聚集，該研究提供了一個新的虎杖抗血小板聚集機制，也為其臨床用藥提供了一定的理論指導(dǎo)價值。

2.4 益母草楊槐等[19]對益母草抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性進行了研究，該研究首先從益母草中提取出了十種香豆素類化合物，隨后對這十種化合物進行了體外抗血小板聚集活性實驗，結(jié)果顯示異栓翅芹醇和九里香酮具有顯著的抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性。劉娟等[20]同樣對益母草的化學成分和抗血小板聚集活性進行了研究，其中益母草堿、蒙花苷和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集具有顯著的抑制作用，抑制率最高達33.82%。從上述研究可以看出，益母草對血小板聚集的機制可能和其抑制血小板內(nèi)容物釋放ADP有關(guān)，雖然抑制率達到了30%以上，但要真正運用于臨床，還需要對其相關(guān)成分的結(jié)構(gòu)進行進一步的研究。

2.5 毛冬青付曉春等[21]對縮醛基毛冬青化合物R4的抗血栓作用進行了研究，發(fā)現(xiàn)其具有抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性。林麗萍等[22]運用Born比濁法對毛冬青不同部位提取物的抗血小板聚集活性進行了研究，結(jié)果顯示毛冬青浸膏、水提取物、正丁醇提取物、D101-50%乙醇提取物、D101-95%乙醇提取物和D101-水提物均能夠顯著抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集。從上述研究可以看出，毛冬青對血小板聚集的抑制機制除了花生四烯酸代謝通路之外，還可以通過抑制血小板內(nèi)容物釋放ADP來達到抑制血小板聚集的目的。

3 血小板膜蛋白受體拮抗

血小板膜上的蛋白質(zhì)種類多樣，這些蛋白質(zhì)不僅能夠維持血小板形態(tài)完整及功能正常運行，同時也構(gòu)成了血小板上各種活性化合物的受體，這些受體根據(jù)其功能及相應(yīng)配體的差異可分為選擇素受體、誘導(dǎo)劑受體和黏附受體，通過抑制血小板膜蛋白上的受體與相應(yīng)化合物結(jié)合可達到抗血小板聚集的目的。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）是血小板膜上的主要受體，該受體會和纖維蛋白原結(jié)合，從而引起血小板聚集，當加入相應(yīng)抗血小板聚集藥物時，該藥物會抑制纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa受體結(jié)合，從而降低TXA2的含量，抑制血小板聚集。黏附受體包括血小板膜糖蛋白VⅠ（GPVⅠ）和血小板膜糖蛋白Ⅰa/Ⅱa（GPⅠa/Ⅱa）兩個亞型，通過對GPVⅠ受體誘導(dǎo)劑CRP或GPⅠa/Ⅱa受體的抑制，可以對膠原誘導(dǎo)的磷酸化作用起到抑制，從而抑制血小板的聚集。另外，當血管受損后，血小板會黏附于受到損傷的血管上，使血小板被激活并且釋放活性誘導(dǎo)劑（ADP、TXA2和5-HT等），從而加快血小板聚集，因此抑制血小板聚集的途徑之一便是要抑制血小板激活后釋放的誘導(dǎo)劑與血小板膜糖蛋白受體的相應(yīng)結(jié)合。除了上述受體之外，中藥抗血小板聚集也可以通過拮抗血小板THR受體、內(nèi)源PAF受體和P2Y12受體等達到抑制血小板聚集的目的。目前抗血小板聚集機制為血小板膜蛋白受體拮抗的寒涼性中藥有丹參和大黃。

3.1 丹參丹參在抗腫瘤、保護心血管、抗纖維化及神經(jīng)系統(tǒng)疾病和抗血小板聚集等方面具有很好的藥理活性[23]。目前對丹參抗血小板聚集機制研究主要以網(wǎng)絡(luò)藥理學和分子對接技術(shù)為主，唐惠蘭[24]以分子對接技術(shù)和斑馬魚血栓模型，篩選出了丹參中抗血小板聚集的活性成分，分別為丹參酚酸B（SAB）、迷迭香酸（MA）、紫草（LA）和木犀草苷（LG），隨后對這些活性成分進行了抗血小板聚集實驗，發(fā)現(xiàn)其均能有效抑制AH和PHZ誘導(dǎo)的血小板聚集。霍蘇等[25]運用網(wǎng)絡(luò)藥理學對丹參抗血小板聚集的活性成分、作用靶點和信號通路進行了預(yù)測，結(jié)果顯示丹參中含有65個抗血小板聚集活性化合物和84個作用靶點，GO富集分析結(jié)果顯示丹參能夠抑制ADP與血小板G蛋白偶聯(lián)受體和P2Y12受體的結(jié)合，因而可以抑制血小板激活并釋放ADP，以達到抗血小板聚集的目的。除此之外，李謝等[26]運用生物活性評價和化學計量學對三葉丹參抗血小板聚集活性物質(zhì)進行了篩選，發(fā)現(xiàn)丹參中的活性物質(zhì)丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸均與P2Y12受體表現(xiàn)出很好的結(jié)合能力，該研究表明丹參中的某些活性成分是很好的P2Y12受體拮抗劑。

3.2 大黃大黃中有效成分以蒽醌類和蒽酮類為主，具有抗炎、抗癌和抗血小板聚集等廣泛的藥理活性[27]。譚鵬等[28]運用生物效價測定法對大黃中的10個蒽醌類化合物抗血小板聚集活性強弱進行了對比，與此同時，為驗證生物效價的檢測結(jié)果，作者采用分子對接術(shù)對大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黃酸與P2Y12受體蛋白受體在最佳結(jié)合時的抑制常數(shù)（Ki）進行了計算，結(jié)果顯示，大黃酸和大黃素具有顯著的抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集活性，從分子對接結(jié)果來看，大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黃酸對P2Y12受體具有較強親和力，抑制常數(shù)達到了5.73和2.51μmol/L，該研究說明大黃可以通過抑制P2Y12受體來發(fā)揮其抗血小板聚集的功效。大黃在實際應(yīng)用過程中存在生物利用度低和溶解性差的問題，為解決此問題，丁樂等[29]基于拼合原理，以烷基鏈為基本骨架，將大黃酸與煙酸偶聯(lián)，得到了5個新的化合物，隨后對這5個化合物進行抗血小板聚集活性測試，發(fā)現(xiàn)3a、3b和3e抗血小板聚集的活性比阿司匹林強，且3a的活性最強。

4 影響核苷酸系統(tǒng)

核苷酸系統(tǒng)包括cAMP系統(tǒng)和環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）系統(tǒng)，其中cAMP是由腺苷酸環(huán)化酶水解三磷酸腺苷生成，是細胞內(nèi)的重要信號傳輸物質(zhì)，在PLC介導(dǎo)的血小板聚集和釋放具有重要的調(diào)控作用。cGMP是由三磷酸鳥苷經(jīng)由鳥苷酸環(huán)化酶分解產(chǎn)生的，它可以經(jīng)由非依賴性通路和依賴性通路對血小板聚集進行調(diào)控，并且可以降低細胞內(nèi)Ca2+濃度，使得血管得到舒張從而達到抑制血小板聚集的目的。因此，提高血小板內(nèi)cAMP和cGMP的水平或者抑制其水解是抑制血小板聚集的重要通路。目前抗血小板聚集機制為影響核苷酸系統(tǒng)的寒涼性中藥有丹參。

4.1 丹參霍蘇等[25]在文章中不僅發(fā)現(xiàn)丹參可以抑制ADP與血小板上的P2Y12和P2Y1受體結(jié)合，還發(fā)現(xiàn)丹參中的水溶性成分丹酚酸A和丹酚酸B可以增加血小板的cAMP通路，其中丹酚酸A可以抑制P13K/AKT信號通路中的下游磷酸化，丹酚酸B可以增強cAMP調(diào)控磷酸二酯酶活性水平，磷酸二酯酶具有抑制cAMP降解的功效，因此丹參中的丹酚酸可以通過抑制cAMP降解和增加cAMP通路的方式達到抑制血小板聚集的目的。

5 討論

綜上所述，寒涼性活血化瘀藥物抑制血小板聚集的作用機制主要分為抑制花生四烯酸代謝途徑、抑制血小板內(nèi)容物釋放、血小板膜蛋白受體拮抗和影響核苷酸系統(tǒng)四種，以前兩種居多。目前對于寒涼性活血化瘀中藥抗血小板聚集機制的研究較少，部分中藥的機制研究僅僅局限于其中的一種或者幾種，并未進行系統(tǒng)深入的研究，因此對寒涼性活血化瘀中藥抗血小板聚集的機制進行系統(tǒng)且深入的研究確有必要。經(jīng)調(diào)研大量文獻，發(fā)現(xiàn)寒涼性中藥大黃、丹參、郁金的抗聚集作用值得深入研究。中藥活性成分復(fù)雜，藥理活性普遍比較廣泛，運用現(xiàn)代信息學技術(shù)如分子模擬對接技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學、蛋白質(zhì)組學等，全方位的探索中藥抗血小板聚集作用機制，更能精確地闡明作用通路（靶點）。因此本研究對寒涼性活血化瘀類中藥從抗血小板聚集的作用機制角度進行了系統(tǒng)歸納和總結(jié)，可以為活血化瘀中藥抗血小板聚集后續(xù)研究提供新的研究思路。