槲皮素通過miR-101/EZH2軸介導(dǎo)的EMT途徑改善NSCLC吉西他濱耐藥的機制研究

錢麒鈺，袁改利，馬珊珊，羅莉梅，徐玉

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）為一種高度惡性的難治性腫瘤。NSCLC的高轉(zhuǎn)移性及放化療耐藥性的產(chǎn)生是導(dǎo)致NSCLC患者生存期變短的重要原因［1］。減少NSCLC轉(zhuǎn)移，提高放化療治療效果，對促進患者生存及改善預(yù)后有重要意義。腫瘤上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）表型改變引起的耐藥基因如Zeste基因同源蛋白2（EZH2）表達異常，是促進癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、耐藥性增強的關(guān)鍵因素［2-4］。miR-101與EZH2之間有靶向調(diào)控關(guān)系［5］，且miR-101/EZH2軸已被證實是參與子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞EMT表型改變、耐藥性產(chǎn)生的關(guān)鍵信號通路［6］，但干預(yù)調(diào)控miR-101/EZH2軸對NSCLC細(xì)胞影響的相關(guān)研究較少。

槲皮素為天然黃酮類成分，現(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)，其對乳腺癌、胃癌、胰腺癌等癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有抑制作用［7］，且其對NSCLC細(xì)胞EMT表型改變也有抑制作用［8］。但槲皮素是否可通過抑制EMT表型改變來改善NSCLC對放化療的敏感性尚未可知。本研究通過體外培養(yǎng)NSCLC細(xì)胞，從miR-101/EZH2軸方面對此進行探究驗證，以期為槲皮素用于治療肺癌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 人NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞株購自上海奧陸生物科技有限公司；槲皮素購自北京索萊寶科技有限公司；EMT誘導(dǎo)劑轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β1（重組人TGF-β1蛋白水解加工復(fù)合物）購自美國PEPROTECH公司；吉西他濱（Gb）購自北京伊塔生物科技有限公司；CCK-8試劑盒購自上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司；miR-101抑制物（miR-101-inhibitor）及其陰性對照試劑（miR-NC）均由南京金斯瑞生物科技有限公司設(shè)計合成；EZH2、TGF-β1、果蠅母親DPP同源物4（SMAD4）、磷酸化SMAD4（p-SMAD4）、E鈣黏蛋白（Ecadherin）、N鈣黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、內(nèi)參β-actin兔抗人抗體和辣根過氧化物酶羊抗兔二抗均購自美國abcam公司；SpectraMax iD3酶標(biāo)儀購自美谷分子儀器（上海）有限公司；7500實時熒光定量PCR（qPCR）儀購自美國Thermo Fisher公司。

1.2 細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng) A549細(xì)胞株常規(guī)復(fù)蘇后，取適量細(xì)胞，DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)于恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)傳代培養(yǎng)。參照文獻［9］，按Gb濃度遞增法培養(yǎng)獲得A549耐Gb高濃度（200 nmoL/L）細(xì)胞株，若A549/Gb細(xì)胞能夠在含200 nmol/L Gb培養(yǎng)液培養(yǎng)中穩(wěn)定生長和傳代，則視為耐藥細(xì)胞株造模成功。

1.3 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況 將A549、A549/Gb細(xì)胞按5×104個/孔的密度接種于6孔板內(nèi)，向培養(yǎng)液中加入終濃度為0、4、8、16、32、64、128、256μmol/L的槲皮素，干預(yù)培養(yǎng)48 h后，加入CCK-8溶液10μL繼續(xù)培養(yǎng)2 h，酶標(biāo)儀上于450 nm波長下檢測光密度（OD）值，根據(jù)OD值計算細(xì)胞生存率（%）=實驗組OD值/空白組OD值×100%。繪制生長曲線，計算半數(shù)抑制濃度（IC50），選取IC50的槲皮素濃度作為A549、A549/Gb細(xì)胞的干預(yù)濃度。

1.4 細(xì)胞分組及處理 取對數(shù)期A549細(xì)胞，以5×104個/孔的密度接種于6孔板內(nèi)，并設(shè)置為空白組（A549細(xì)胞入正常培養(yǎng)基培養(yǎng)）、A549+EMT誘導(dǎo)劑［10］組（4μg/L TGF-β1處理）、A549+槲皮素組（64μmol/L槲皮素處理）、槲皮素+EMT誘導(dǎo)劑組（64μmol/L槲皮素+4μg/L TGF-β1處理），每組6個復(fù)孔。取對數(shù)期A549細(xì)胞及A549/Gb細(xì)胞，以5×104個/孔的密度接種于6孔板內(nèi)，并設(shè)置為A549組、A549/Gb組、A549/Gb+槲皮素組（128μmol/L槲皮素處理）、A549/Gb+EMT誘導(dǎo)劑組（4μg/L TGF-β1處理）、miR-101-inhibitor組（A549/Gb細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-101-inhibitor）、miR-NC組（A549/Gb細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-NC）、槲皮素+miR-101-inhibitor組（A549/Gb細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-101-inhibitor+128μmol/L槲皮素），每組設(shè)置6個復(fù)孔。各組干預(yù)培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞進行后續(xù)研究。

1.5 qPCR檢測各組細(xì)胞miR-101表達水平 取各組干預(yù)培養(yǎng)后的細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液勻漿粉碎后，RNA提取試劑盒提取總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，以cDNA為模板（10×cDNA模板1μL），加入上、下游引物各0.5μL，H2O 8μL，2×SYBR mix 10μL，行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性14 min；95℃變性40 s，60℃退火45 s，72℃延伸20 min，50個循環(huán)。以U6為內(nèi)參，用2-ΔΔCt法計算miR-101表達水平。各引物序列由生工生物工程（上海）有限公司合成，見表1。

Tab.1 Primer sequence表1 引物序列

1.6 Western blot法檢測EZH2、TGF-β1/SMAD4和EMT標(biāo)志蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin表達 取各組干預(yù)培養(yǎng)后的細(xì)胞，洗滌后裂解、勻漿粉碎獲得細(xì)胞勻漿液，蛋白提取試劑盒及BCA法提取并測定勻漿液中蛋白濃度后，取25μg蛋白，行SDS-PAGE、PVDF轉(zhuǎn)膜，加入1∶800的EZH2、TGF-β1、SMAD4、p-SMAD4、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin兔抗人一抗，及1∶1 000β-actin兔抗人內(nèi)參抗體，4℃孵育過夜，次日加入1∶1 500的辣根過氧化物酶羊抗兔二抗室溫孵育2.5 h，增強化學(xué)發(fā)光法顯影曝光，化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)拍照，Image-J軟件分析相對灰度值。

1.7 細(xì)胞對Gb的耐藥性檢測 取各組細(xì)胞，按1×105個/孔的密度接種于6孔板中，各組均加入不同濃度（0、5、10、20、40、80、100、200 nmol/L）的Gb培養(yǎng)24 h后，加入CCK-8溶液10μL繼續(xù)培養(yǎng)2 h，在酶標(biāo)儀上于450 nm波長下檢測OD值，根據(jù)OD值繪制生長曲線，計算IC50及耐藥指數(shù)（IR），IR=實驗組IC50/A549細(xì)胞IC50。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Graphpad Prism 6.0進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 槲皮素對A549細(xì)胞及A549/Gb細(xì)胞生存率的影響 隨著槲皮素濃度的升高，A549細(xì)胞及A549/Gb細(xì)胞生存率均逐漸降低。當(dāng)槲皮素濃度為64、128μmol/L時，A549及A549/Gb細(xì)胞存活在50%左右，選用64、128μmol/L的槲皮素為A549及A549/Gb細(xì)胞的干預(yù)濃度，見圖1。

Fig.1 Effects of different concentrations of quercetin on the survival rates of A549 cells and A549/Gb cells圖1 不同濃度槲皮素對A549細(xì)胞及A549/Gb細(xì)胞生存率的影響

2.2 槲皮素對A549細(xì)胞EMT逆轉(zhuǎn)作用及耐藥性的影響 與空白組相比，A549+槲皮素組細(xì)胞Ecadherin蛋白表達水平升高，N-cadherin及Vimentin蛋白表達水平、IC50及IR降低（P＜0.05）；與A549+槲皮素組相比，A549+EMT誘導(dǎo)劑組和槲皮素+EMT誘導(dǎo)劑組細(xì)胞E-cadherin蛋白表達水平降低、Ncadherin及Vimentin蛋白表達水平、IC50及IR升高（P＜0.05），見圖2、表2。

Fig.2 Immunoblotting of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein expression in cells of each group圖2 各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平免疫印跡圖

2.3 槲皮素對A549細(xì)胞miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平的影響 與空白組相比，A549+槲皮素組細(xì)胞miR-101表達升高，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均降低（P＜0.05）；A549+EMT誘導(dǎo)劑組miR-101表達降低，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均升高（P＜0.05）。與A549+槲皮素組相比，槲皮素+EMT誘導(dǎo)劑組細(xì)胞miR-101表達降低，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均升高（P＜0.05），見圖3、表3。

Tab.2 Comparison of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein expression levels,IC50 and IR between the four groups表2 各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平及IC50、IR比較 （±s）

Tab.2 Comparison of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein expression levels,IC50 and IR between the four groups表2 各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平及IC50、IR比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與空白組比較，b與A549+槲皮素組比較，c與A549+EMT誘導(dǎo)劑組比較，P＜0.05。

組別空白組A549+槲皮素組A549+EMT誘導(dǎo)劑組槲皮素+EMT誘導(dǎo)劑組F n6 6 6 6 E-cadherin 0.99±0.09 1.93±0.19a 0.66±0.05ab 0.99±0.09bc 131.310＊＊N-cadherin 1.01±0.10 0.54±0.04a 1.69±0.18ab 1.01±0.09bc 103.228＊＊Vimentin 1.04±0.09 0.47±0.03a 1.75±0.20ab 1.10±0.10bc 111.539＊＊IC50（nmol/L）6.77±0.61 1.04±0.10a 49.38±0.47ab 6.98±0.53bc 13 617.58＊＊IR 1.00±0.00 0.15±0.01a 7.29±0.72ab 1.04±0.11bc 494.242＊＊

Fig.3 EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression levels detected by Western blot assay in each group圖3 各組細(xì)胞EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平免疫印跡圖

Tab.3 Comparison of miR-101 and EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression levels between the four groups表3各組細(xì)胞miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平比較 （n=6，±s）

Tab.3 Comparison of miR-101 and EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression levels between the four groups表3各組細(xì)胞miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平比較 （n=6，±s）

＊＊P＜0.01；a與空白組比較，b與A549+槲皮素組比較，c與A549+EMT誘導(dǎo)劑組比較，P＜0.05。

組別空白組A549+槲皮素組A549+EMT誘導(dǎo)劑組槲皮素+EMT誘導(dǎo)劑組F miR-101 1.08±0.09 1.95±0.19a 0.56±0.03ab 1.19±0.11bc 137.972＊＊EZH2 1.04±0.09 0.44±0.05a 1.87±0.17ab 1.11±0.10bc 166.675＊＊TGF-β1 1.17±0.11 0.24±0.20a 1.88±0.17ab 1.19±0.08bc 124.430＊＊p-SMAD4/SMAD4 1.00±0.10 0.55±0.05a 1.69±0.22ab 1.02±0.09bc 76.765＊＊

2.4 抑制miR-101后槲皮素對A549/Gb細(xì)胞EMT及耐藥性的影響 與A549組相比，A549/Gb組細(xì)胞E-cadherin表達降低，N-cadherin及Vimentin、IC50及IR指數(shù)升高（P＜0.05）。與A549/Gb組相比，A549/Gb+槲皮素組E-cadherin表達升高，N-cadherin及Vimentin表達、IC50及IR降低（P＜0.05），A549/Gb+EMT誘導(dǎo)劑組及miR-101-inhibitor組E-cadherin表達降低，N-cadherin及Vimentin、IC50及IR升高（P＜0.05）。與A549/Gb+槲皮素組相比，槲皮素+miR-101-inhibitor組及miR-NC組細(xì)胞E-cadherin表達降低，N-cadherin及Vimentin表達、IC50及IR升高（P＜0.05），見圖4、表4。

Fig.4 Immunoblotting results of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin expression in cells of each group圖4 各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表達免疫印跡圖

2.5 抑制miR-101后槲皮素對miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平影響 與A549組相比，A549/Gb組細(xì)胞miR-101表達降低，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均升高（P＜0.05）。與A549/Gb組細(xì)胞相比，A549/Gb+槲皮素組細(xì)胞miR-101表達升高，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均降低（P＜0.05）；A549/Gb+EMT誘導(dǎo)劑組及miR-101-inhibitor組細(xì)胞miR-101表達降低，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均升高（P＜0.05）。與A549/Gb+槲皮素組相比，槲皮素+miR-101-inhibitor組及miR-NC組細(xì)胞miR-101表達降低，EZH2、TGF-β1及p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平均升高（P＜0.05），見表5、圖5。

Tab.4 Comparison of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein expression levels,IC50 and IR after miR-101 inhibition between the seven groups表4 抑制miR-101后各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平及IC50、IR比較 （±s）

Tab.4 Comparison of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein expression levels,IC50 and IR after miR-101 inhibition between the seven groups表4 抑制miR-101后各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平及IC50、IR比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與A549組比較，b與A549/Gb組比較，c與A549/Gb+槲皮素組比較，P＜0.05。

組別A549組A549/Gb組A549/Gb+槲皮素組A549/Gb+EMT誘導(dǎo)劑組miR-101-inhibitor組槲皮素+miR-101-inhibitor組miR-NC組F n6 6 6 6 6 6 6 E-cadherin 1.00±0.09 0.39±0.03a 1.43±0.14ab 0.16±0.04abc 0.10±0.01abc 0.41±0.04ac 0.40±0.03ac 298.561＊＊N-cadherin 1.01±0.10 2.41±0.24a 0.44±0.04ab 2.99±0.19abc 2.91±0.20abc 2.40±0.16ac 2.44±0.19ac 192.489＊＊Vimentin 1.04±0.09 2.33±0.19a 0.57±0.05ab 2.85±0.20abc 2.80±0.21abc 2.30±0.19ac 2.33±0.18ac 162.612＊＊IC50（nmol/L）6.70±0.60 99.33±2.97a 26.32±0.49ab 169.38±4.77abc 166.77±4.83abc 98.18±2.50ac 97.90±2.63ac 2368.450＊＊IR 1.00±0.00 14.89±1.42a 3.95±0.20ab 25.29±1.62abc 24.84±1.60abc 14.74±1.39ac 14.60±1.34ac 329.579＊＊

Tab.5 Comparison of miR-101 and EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression levels after miR-101 inhibition between the seven groups表5 抑制miR-101后各組細(xì)胞miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平比較 （±s）

Tab.5 Comparison of miR-101 and EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression levels after miR-101 inhibition between the seven groups表5 抑制miR-101后各組細(xì)胞miR-101及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與A549組比較，b與A549/Gb組比較，c與A549/Gb+槲皮素組比較，P＜0.05。

組別A549組A549/Gb組A549/Gb+槲皮素組A549/Gb+EMT誘導(dǎo)劑組miR-101-inhibitor組槲皮素+miR-101-inhibitor組miR-NC組F n6 6 6 6 6 6 6 miR-101 1.08±0.09 0.36±0.03a 1.76±0.17ab 0.10±0.01abc 0.11±0.01abc 0.34±0.03ac 0.30±0.02ac 404.736＊＊EZH2 1.04±0.09 2.27±0.19a 0.64±0.06ab 2.74±0.20abc 2.70±0.21abc 2.21±0.19ac 2.25±0.22ac 128.908＊＊TGF-β1 1.01±0.09 2.44±0.24a 0.38±0.03ab 2.99±0.28abc 2.94±0.24abc 2.40±0.21ac 2.42±0.22ac 141.142＊＊p-SMAD4/SMAD4 1.17±0.08 2.09±0.20a 0.75±0.07ab 2.62±0.19abc 2.64±0.20abc 2.01±0.18ac 2.06±0.14ac 116.861＊＊

Fig.5 Western blot assay of EZH2,TGF-β1,p-SMAD4/SMAD4 protein expression in each group圖5 各組細(xì)胞EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表達水平免疫印跡圖

3 討論

NSCLC占肺癌的85%［1］。EMT作為引起NSCLC耐藥性產(chǎn)生的關(guān)鍵因素也逐漸受到臨床的關(guān)注。研究認(rèn)為，EMT可賦予NSCLC細(xì)胞更高的侵襲能力，從而限制癌細(xì)胞的化療療效［11］。Assani等［12］發(fā)現(xiàn)EMT調(diào)節(jié)可改變肺癌和乳腺癌細(xì)胞對化療的抵抗性，用EMT誘導(dǎo)劑促進EMT特性增加的同時，可降低化療藥物治療的敏感性；反之，抑制EMT進程，可提高癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性，證實EMT是癌細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生的關(guān)鍵因素。本研究用EMT誘導(dǎo)劑進一步增強A549及A549/Gb細(xì)胞EMT特性（Ecadherin降低，N-cadherin及Vimentin表達升高）后，A549及A549/Gb細(xì)胞表現(xiàn)出更強的耐藥性，IC50及IR進一步升高，證實EMT增強可促進癌細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生。槲皮素對NSCLC細(xì)胞EMT進程有抑制作用，且槲皮素可增強NSCLC細(xì)胞對X線輻射及紫杉醇化療等治療敏感度［13-14］。本研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素降低A549及A549/Gb細(xì)胞EMT進程的同時，其對Gb的耐藥性也明顯降低，而槲皮素與EMT誘導(dǎo)劑聯(lián)合應(yīng)用后，槲皮素抑制A549細(xì)胞耐藥性作用被顯著削弱，證實槲皮素降低A549細(xì)胞對Gb的耐藥性作用可能與抑制EMT進程有關(guān)。

EZH2不僅可直接結(jié)合E-cadherin并抑制其轉(zhuǎn)錄而促進EMT進程［15］，還可通過激活TGF-β/SMAD4通路，進一步促進EMT進程，產(chǎn)生更強的耐藥性［16］。另外EZH2還是重要的耐藥基因，研究證實，EZH2可直接調(diào)控或結(jié)合Schlafen家族成員11（SLFN11）基因的結(jié)合位點，使其降解及抑制化學(xué)抗性基因作用減弱、癌細(xì)胞DNA損傷及修復(fù)作用增強，而產(chǎn)生耐藥性［17］。Murai等［18］認(rèn)為腫瘤細(xì)胞缺乏SLFN11基因是引起癌細(xì)胞對DNA合成抑制劑如Gb、阿糖胞苷等化療藥物敏感性降低的關(guān)鍵原因，用EZH2組蛋白抑制劑降低EZH2，重新激活SLFN11，是提高化療藥物殺滅癌細(xì)胞效果的重要措施。本研究發(fā)現(xiàn)，A549及A549/Gb細(xì)胞EMT特性及耐藥性升高的過程中，EZH2、EMT活化途徑TGF-β/SMAD4也隨之升高，證實EZH2參與EMT及耐藥性產(chǎn)生過程。

miRNA在EMT及耐藥性產(chǎn)生過程中發(fā)揮重要作用。EMT活化可引起多種miRNA的異常表達，介導(dǎo)耐藥性產(chǎn)生，miRNA中的miR-101在多種癌細(xì)胞中表達下調(diào)，且其低表達與癌細(xì)胞EMT升高及耐藥性產(chǎn)生關(guān)系密切［19］。Jiang等［20］發(fā)現(xiàn)，miR-101可靶向抑制EZH2表達，降低結(jié)腸癌細(xì)胞EMT進程。本研究發(fā)現(xiàn)，A549及A549/Gb細(xì)胞EMT特性及耐藥性升高的過程中，miR-101表達降低，單獨下調(diào)miR-101表達或加入EMT誘導(dǎo)劑后，EZH2表達升高，A549及A549/Gb細(xì)胞耐藥性及EMT特性均升高，證實miR-101/EZH2軸也參與細(xì)胞EMT介導(dǎo)的耐藥性產(chǎn)生過程。槲皮素降低A549及A549/Gb細(xì)胞耐藥性及EMT進程作用的同時，miR-101表達升高，EZH2表達降低，提示槲皮素逆轉(zhuǎn)EMT介導(dǎo)的耐藥性產(chǎn)生作用可能與上調(diào)miR-101、抑制EZH2有關(guān)。下調(diào)miR-101或誘導(dǎo)EMT均可逆轉(zhuǎn)槲皮素的上述作用。

綜上所述，槲皮素可通過上調(diào)miR-101、抑制EZH2表達，改善EMT介導(dǎo)的NSCLC細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生。這為闡明槲皮素抗肺癌細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生的靶向調(diào)控機制提供了一定參考。肺癌耐藥性及EMT發(fā)生機制復(fù)雜，涉及多個miRNA及多條通路共同調(diào)節(jié)。槲皮素緩解肺癌細(xì)胞EMT，阻斷耐藥性產(chǎn)生的其他機制有待進一步探究。