龍牙草石油醚提取物中的揮發(fā)成分研究

周杰， 方英玉， 尹秀梅， 王思宏

(1.延邊大學(xué) 分析測(cè)試中心， 吉林 延吉 133002； 2.延邊大學(xué) 藥學(xué)院， 吉林 延吉 133002)

龍牙草(AgrimoniapilosaLedeb)為薔薇科多年生草本植物，又稱金頂龍牙、地仙草、仙鶴草、石打穿、瓜香草等.龍牙草入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主要用于治療止血、咯血、尿血、便血、崩漏等多種出血癥以及赤白痢疾、勞傷脫力等病癥[1-3].研究顯示：龍牙草中含有黃酮苷類、三萜類、異香豆素和木質(zhì)素等成分[4-6]，具有抗炎、抗氧化、抗菌和抗病毒等多種藥理作用[7-9].另外，龍牙草也是一種食用野菜，具有強(qiáng)化人體免疫能力的功效[10-12].2022年Lee等研究顯示，龍牙草乙醇提取物的抗原蟲選擇指數(shù)(3.35)高于磺胺嘧啶(2.08)[13]，該研究表明龍牙草具有良好的抗寄生蟲作用.為了探討龍牙草(全草)在石油醚中的溶解成分以及開發(fā)利用龍牙草，本文對(duì)延邊產(chǎn)龍牙草石油醚提取物中的成分進(jìn)行了研究.

1 試劑與儀器

1.1 試劑與藥材

正己烷(色譜純)， Merck公司生產(chǎn)； 0.45 μL微孔濾膜、石油醚(60～90 ℃)，麥克林試劑公司生產(chǎn)；無(wú)水碳酸鈉(分析純)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；龍牙草(采自吉林省延邊大學(xué)藥草園)，經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院呂惠子教授鑒定.

1.2 儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(6890N -5937)，安捷倫科技有限公司生產(chǎn)；微型注射器(100 μL)，Hamilton公司生產(chǎn)；超純水機(jī)(Milli -Q系列)，Millipore公司生產(chǎn)；低溫冷卻液循環(huán)泵，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；索式提取器，上海熙揚(yáng)儀器有限公司生產(chǎn)； RV -3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，艾卡儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)； DZF -1真空干燥箱，北京永光明醫(yī)療儀器有限公司生產(chǎn)； WJX -A500高速多功能粉碎機(jī)，上海緣沃工貿(mào)有限公司生產(chǎn)； AL204 -IC電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn).

2 方法

2.1 龍牙草石油醚提取物的制備

龍牙草曬干后粉碎，過(guò)0.15 mm篩.稱取100 g粉末置于索式提取器中，加入400 mL石油醚后置于電熱套中(保持石油醚微沸5 h).共收集石油醚提取物3.20 g，并將提取物用正己烷定容于5 mL的容量瓶中；搖勻后過(guò)0.45 μL微孔濾膜，所得溶液用于GC -MS分析.

2.2 檢測(cè)分析條件

氣相色譜條件：HP -5MS石英毛細(xì)管柱(0.25 μm×0.25 mm×30 m)，載氣為氦氣，流速為1 mL·min-1，進(jìn)樣口溫度為280 ℃，分流進(jìn)樣(分流比為50∶1).

程序升溫條件： 40 ℃保持2 min，再以10 ℃·min-1升溫至300 ℃(保持15 min).

質(zhì)譜條件：離子源為EI源，電子能量為70 eV，離子溫度為230 ℃，四級(jí)桿溫度為150 ℃，倍增管電壓為1.6 kV，掃描質(zhì)量范圍為m/z35～550.

3 結(jié)果與分析

經(jīng)計(jì)算得龍牙草石油醚提取物的收率為3.20%.圖1為龍牙草石油醚提取物的總離子流色譜圖.由圖1可以看出：色譜峰集中出現(xiàn)在30.00～45.00 min和55.00～65.00 min 2個(gè)時(shí)間段；在GC -MS聯(lián)用技術(shù)色譜圖中出現(xiàn)了35個(gè)較強(qiáng)的色譜峰.將質(zhì)譜掃描圖中的各峰與美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(National Institute of Standards and Technology，NTST)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)照后確定了其中27個(gè)成分的結(jié)構(gòu)信息.

上述確定的27個(gè)成分的結(jié)構(gòu)式見圖2.綜合比較各成分的結(jié)構(gòu)式可以發(fā)現(xiàn)，其成分主要為烴類、醇類、酸類、酯類、甾類及酮類化合物.其中：烴類化合物有7個(gè)(其中3個(gè)為大于30個(gè)碳的單鏈烷烴)，醇類化合物有5個(gè)，酸類化合物有2個(gè)，酯類化合物有6個(gè)，甾類化合物有3個(gè)，酮類化合物有4個(gè).

圖1 龍牙草石油醚提取物的總離子流色譜圖

依據(jù)GC -MS聯(lián)用技術(shù)，采用峰面積歸一化法計(jì)算的27個(gè)成分的相對(duì)百分含量見表1.由表1可知： 27個(gè)成分占龍牙草總成分的45.28%，相對(duì)含量大于3%的有4種，大于2%的有2種；相對(duì)含量最多的種類是酯類化合物，其次是烴類和醇類化合物，分別占總石油醚提取物的11.43%、10.63%和7.84%； 相對(duì)含量最多的成分是環(huán)[3,5,7]癸烷 -1-羧酸辛酯(占總石油醚提取物的6.42%，保留時(shí)間為40.43 min)，其次為膽酸乙酯(占總石油醚提取物的3.87%，保留時(shí)間為59.37 min).

將本文研究結(jié)果與文獻(xiàn)[14-15]中的研究結(jié)果進(jìn)行對(duì)比可知，不同產(chǎn)地的龍牙草其化學(xué)揮發(fā)成分存在顯著差異.其中文獻(xiàn)[14]的作者利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)安徽亳州產(chǎn)龍牙草中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析顯示，其相對(duì)百分含量較多的成分是6 -10 -14-三甲基 -2-十五烷酮和α-沒(méi)藥醇；而文獻(xiàn)[15]的作者利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)湖南產(chǎn)龍牙草中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析顯示，其相對(duì)百分含量較多的成分是醇類和單萜類化合物.不同產(chǎn)地的龍牙草其揮發(fā)成分存在顯著差異的原因可能與龍牙草的品種、產(chǎn)地、采收時(shí)間、提取工藝等有關(guān).

圖2 27個(gè)成分的結(jié)構(gòu)

表1 27個(gè)成分的相對(duì)百分含量和保留時(shí)間

續(xù)表1

4 結(jié)論

本文利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)延邊產(chǎn)龍牙草的石油醚提取物中的揮發(fā)成分進(jìn)行了分析，且在較強(qiáng)的35個(gè)色譜峰中共鑒定出27個(gè)成分(占總石油醚提取物的45.28%).在鑒定出的27個(gè)成分中，相對(duì)百分含量最多的成分是環(huán)[3,5,7]癸烷 -1-羧酸辛酯，其次為膽酸乙酯.本文研究結(jié)果可為龍牙草石油醚提取物的活性測(cè)試提供藥效物質(zhì)信息.在今后的研究中，我們將通過(guò)擴(kuò)大質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)容量以及選用不同提取方法來(lái)更全面地鑒定和分析龍牙草中的有效成分，以為開發(fā)和利用龍牙草提供更為全面的物質(zhì)組成信息.