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    新規(guī)程施行后的冷沉淀凝血因子質(zhì)檢結(jié)果分析

    2022-02-23 10:24:56安蓬蓬李浩瀧紀(jì)蓉蓉劉軍
    實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2022年5期
    關(guān)鍵詞:凝血因子血站規(guī)程

    安蓬蓬,李浩瀧,紀(jì)蓉蓉,劉軍

    (天津市血液中心,天津 300110)

    冷沉淀凝血因子是采用特定的方法將保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿在1~6℃融化后,分離出大部分的血漿,并將剩余的冷不溶解物質(zhì)在1 h內(nèi)速凍呈固態(tài)的成分血[1]。冷沉淀凝血因子含有豐富的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子(vWF)以及纖維蛋白原(FIB),臨床上廣泛應(yīng)用于甲型血友病、血管性血友病以及纖維蛋白原缺乏等疾病的治療[2]?!堆炯夹g(shù)操作規(guī)程(2019版)》對冷沉淀凝血因子的制備方法(離心法)做了新的規(guī)定,為保障冷沉淀凝血因子的質(zhì)量,筆者隨即對我單位自2019年9月1日起制備的冷沉淀凝血因子進(jìn)行抽檢和結(jié)果分析,報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料 2019年9月1日起,我單位成分科按《血站技術(shù)操作規(guī)程》(2019版)制備的冷沉淀凝血因子中,隨機(jī)抽檢480袋,均由采血時間≤13 min的400 mL全血于6 h內(nèi)分離出的新鮮冰凍血漿制備,外觀正常,均進(jìn)行容量檢測,其中48袋另外檢測纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量和無菌試驗;匯總2018年9月至2019年8月之間,我單位質(zhì)管科的48袋冷沉淀凝血因子的質(zhì)檢記錄,統(tǒng)計纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量。

    1.2 儀器 電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);CS-2000i全自動凝血分析儀(上海希森美康醫(yī)用電子有限公司);BacT/ALERT 3D全自動細(xì)菌分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)(生物梅里埃美國股份有限公司)。

    1.3 試劑 活化部分凝血活酶時間試劑盒(批號:557295A);纖維蛋白原測定試劑(批號:547578);正常范圍定值質(zhì)控血漿(批號:507765A);因子Ⅷ活性測定試劑盒 (批號:547689A);緩沖液 (批號:554667);氯化鈣溶液(批號:563802);清洗液(批號:A9082),以上試劑均為Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH生產(chǎn)。

    1.4 冷沉淀凝血因子制備方法(離心法) 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿,在1~6℃水浴裝置中融化;當(dāng)血漿基本融化時,在2~6℃的環(huán)境下重離心;將大部分上層血漿移至空袋,制成去冷沉淀的冰凍血漿;將留下的40~50 mL血漿與沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子;冷沉淀凝血因子在制備后1 h內(nèi)完成速凍[3]。

    1.5 冷沉淀凝血因子質(zhì)檢方法 用電子天平稱量冷沉淀凝血因子重量并計算血容量;Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量用全自動凝血分析儀檢測;無菌試驗由全自動細(xì)菌分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)檢測。

    1.6 統(tǒng)計學(xué) 處理方法應(yīng)用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計算樣本中容量、纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的總體水平95%置信區(qū)間(95%CI),分別與GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》中標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較;按新、舊規(guī)程制備的兩組冷沉淀凝血因子的數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1 見表1—2。

    表1 按新規(guī)程制備的冷沉淀凝血因子質(zhì)檢結(jié)果

    表2 兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量比較

    2.2 新規(guī)程組480袋冷沉淀凝血因子中,容量檢測合格率為98%,低于40 mL的有7袋,高于50 mL的有5袋;48袋冷沉淀凝血因子中,纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量,檢測合格率94%;不合格3袋,不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低(127.70 mg),兩袋為Ⅷ因子含量偏低(67.60 IU、72.10 IU)。舊規(guī)程組48袋冷沉淀凝血因子中,纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量,檢測合格率94%;不合格3袋,不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低(114.60 mg),兩袋為Ⅷ因子含量偏低(57.80 IU、56.30 IU)。

    3 討論

    《血站技術(shù)操作規(guī)程》(2019版)將離心法制備冷沉淀凝血因子時,冷沉淀凝血因子中的血漿容量由原來的20~30 mL[4]變?yōu)?0~50 mL[3],與虹吸法制備冷沉淀凝血因子時,冷沉淀凝血因子中的血漿容量進(jìn)行了統(tǒng)一[3]。我單位使用離心法和全自動血液成分分離機(jī)制備冷沉淀凝血因子,自2019年9月1日起,成分科及時對全自動血液成分分離機(jī)的設(shè)置參數(shù)進(jìn)行了修改,以確保冷沉淀凝血因子的血漿容量與新規(guī)程要求一致。

    GB18469-2012對冷沉淀凝血因子的質(zhì)控項目和要求見表1。其中容量要求為標(biāo)示量(mL)±10%,沒有給出確切范圍,因此我單位冷沉淀凝血因子的容量一直以《血站技術(shù)操作規(guī)程》中的相關(guān)規(guī)定為標(biāo)準(zhǔn)。新規(guī)程規(guī)定冷沉淀凝血因子的血漿容量為40~50 mL,未算上其中沉淀物的體積,我單位制備的冷沉淀凝血因子容量總體水平95%CI為39.36~50.10 mL,基本符合要求;盡管如此,由于GB18469-2012中對冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的要求均與容量有關(guān),而且,冷沉淀凝血因子在臨床上特別適用于難以給予大量的FFP(防止發(fā)生循環(huán)超負(fù)荷)來提供足量的凝血因子的患者,更多的是配合性輸注[5],因此,建議成分科從分離機(jī)參數(shù)設(shè)置及工作人員的標(biāo)準(zhǔn)操作方面進(jìn)一步要求細(xì)化,確保冷沉淀凝血因子的容量在合格范圍。

    《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019版)》在6.2.5.1中指出,血液抽檢結(jié)果分析時,對由于獻(xiàn)血者個體差異引起的,且不影響血液安全性的指標(biāo),如果檢查符合率≥75%,可認(rèn)為血液采集、制備和儲存等過程受控。個體因素對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響需引起重視,在隨機(jī)抽檢的新規(guī)程組48袋冷沉淀凝血因子中,有一袋纖維蛋白原含量偏低。纖維蛋白原性質(zhì)較穩(wěn)定,只要樣本不與玻璃表面接觸,纖維蛋白原被激活變?yōu)槔w維蛋白的可能性很小,同時,纖維蛋白原含量與獻(xiàn)血者性別、年齡等個體因素有關(guān),有研究表明[6],在所調(diào)查的獻(xiàn)血人群中,纖維蛋白原含量在女性中高于男性,>30歲組明顯高于<30歲組。Ⅷ因子是不穩(wěn)定凝血因子,在獻(xiàn)血員個體因素方面,除與纖維蛋白原有上述相同分布規(guī)律外,相較于其他三種血型,B型冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子含量最高[6];除外個體因素,由于Ⅷ因子在體外半衰期較短,活性易喪失,制備冷沉淀凝血因子過程中任何一個環(huán)節(jié)的誤差均會影響Ⅷ因子含量:400 mL全血采集時間控制在13 min內(nèi),采集后儲存于冷藏環(huán)境中;我單位在6 h內(nèi)完成血漿分離并速凍;制備冷沉淀凝血因子時,新鮮冰凍血漿在1~6℃水浴裝置中融化,在2~6℃環(huán)境下重離心,冷沉淀凝血因子在制備后1 h內(nèi)完成速凍,在60 min內(nèi)將中心溫度降至-30℃以下。由此可見,整個制備過程中的時間和溫度是影響冷沉淀凝血因子質(zhì)量的關(guān)鍵因素,建議優(yōu)化工作流程,盡量縮短制備時間,同時進(jìn)一步嚴(yán)格控制儲存、運(yùn)輸及分離的溫度,以及速凍、融化的溫度,以確保冷沉淀凝血因子質(zhì)量符合臨床需要。最后,本研究中使用的CS-2000i全自動凝血分析儀準(zhǔn)確性、精密性良好,對冷沉淀制品中纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的檢測結(jié)果可靠[7];在質(zhì)量抽檢時,也應(yīng)嚴(yán)控冷沉淀凝血因子的融化、取樣時間;檢測纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的試劑在使用前應(yīng)在室溫平衡30 min,緩沖液、氯化鈣溶液和清洗液開瓶后使用時間不得超過8周,使用新批號的試劑時需重新定標(biāo)等。進(jìn)一步規(guī)范試驗操作,避免因此造成的檢測誤差。

    在兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量比較中,與舊規(guī)程組相比,新規(guī)程組的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量的標(biāo)準(zhǔn)差均較高,這與新規(guī)程提高了冷沉淀凝血因子的血漿容量有關(guān);與舊規(guī)程組相比,新規(guī)程組的Ⅷ因子含量較高,一方面由于Ⅷ因子不穩(wěn)定且與獻(xiàn)血員個體因素密切相關(guān),另一方面,也與新規(guī)程施行后,我單位的冷沉淀凝血因子制備流程更優(yōu)化,人員操作更規(guī)范有關(guān)。

    為了保證冷沉淀凝血因子的質(zhì)量,工作人員在制備過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,不斷提高技術(shù)水平;同時,質(zhì)控人員在檢測時應(yīng)更加細(xì)致操作,以避免誤差。通過對480袋冷沉淀凝血因子進(jìn)行質(zhì)量抽檢,我中心按《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019版)》制備的冷沉淀凝血因子符合GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》的相關(guān)規(guī)定,冷沉淀凝血因子質(zhì)量安全有效。

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