CD52在腫瘤研究中的相關(guān)進(jìn)展

盧必敏 ，盧冠銘

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腺體外科，廣西百色 533000)

實(shí)體腫瘤中多樣性的表面抗原、抗原的適應(yīng)性及腫瘤組織微環(huán)境干擾等劣勢(shì)，是與血液系統(tǒng)惡性腫瘤最大的不同。在腫瘤組織中，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)靶向激活免疫檢查點(diǎn)的方式來(lái)抑制免疫細(xì)胞發(fā)揮作用、抑制活性免疫細(xì)胞分泌、抑制腫瘤細(xì)胞因子和趨化因子等，從而實(shí)現(xiàn)免疫逃逸[1]。隨著基因工程和腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入，CD52也漸漸在實(shí)體腫瘤界被挖掘，腫瘤靶向治療時(shí)代，精準(zhǔn)有效一直是臨床治療的終極目標(biāo)?，F(xiàn)對(duì)CD52在腫瘤中的研究狀況進(jìn)行綜述。

1 CD52概述

CD52，也稱(chēng)為CAMPATH-1抗原，是一種由12個(gè)氨基酸組成錨定在糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)的糖蛋白。12個(gè)氨基酸殘基組成的短肽鏈上C末端通過(guò)GPI錨定分子連接于細(xì)胞膜表面，N末端第3位天冬酰胺連接有一個(gè)復(fù)雜的糖基，在其四角巖藻糖基化的甘露糖核心上有幾個(gè)唾液酸化的多聚乳糖胺單位[2]。N-糖基化和多觸角唾液酸化N-聚糖具有廣泛的異質(zhì)性和豐富的多聚乳酸延伸，以及主要的雙唾液酸化O-糖基化類(lèi)型結(jié)構(gòu)。重組可溶性人CD52免疫球蛋白Fc融合蛋白的糖組學(xué)(多孔石墨化碳ESI-MS/MS)和糖肽(C8-LC-ESI-MS)分析表明，CD52的生物活性與四觸角α-2,3/6唾液酸化N-聚糖的高豐度相關(guān)。去除α-2,3唾液酸化使其生物活性消失，通過(guò)α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶的再唾液酸化可恢復(fù)生物活性[3]。成熟CD52抗原是CD52抗原前體被切掉N末端信號(hào)肽和GPI錨定分子替換C末端肽段后變成。CD52抗原是一個(gè)非常有效的抗體依賴(lài)性補(bǔ)體攻擊的靶位點(diǎn)[4]。CD52分子有兩個(gè)具有相同類(lèi)型的n-寡糖和相同的GPI錨定碳水化合物結(jié)構(gòu)，但GPI錨定的磷脂酰肌醇部分有不同的亞類(lèi)(CD52-Ⅰ和CD52-Ⅱ)。

CD52基因位于人類(lèi)1號(hào)染色體(1p36.1)，由兩個(gè)外顯子和一個(gè)位于信號(hào)肽切割位點(diǎn)附近的內(nèi)含子所組成，其相對(duì)分子質(zhì)量為25～29 KD。CD52在免疫細(xì)胞(如成熟淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞)以及其他組織和細(xì)胞(如男性生殖道和成熟精子細(xì)胞)的細(xì)胞表面，作為一種非調(diào)節(jié)性膜糖蛋白廣泛表達(dá)，但在造血祖細(xì)胞、紅細(xì)胞或血小板上，并未發(fā)現(xiàn)它的存在[5-6]。迄今為止，CD52分子的生理和病理意義與直接功能尚不清楚。有研究[5]發(fā)現(xiàn)CD52是T細(xì)胞活化的重要免疫調(diào)節(jié)因子，CD52可以通過(guò)其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路或可溶性CD52與抑制性受體Siglec-10的相互作用來(lái)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化，在T細(xì)胞上表達(dá)。Campath是一種抗CD52抗原的重組人源化單克隆抗體，識(shí)別CD52抗原C-末端3～4個(gè)氨基酸殘基和部分GPI錨定位點(diǎn)的表位。細(xì)胞表面靶標(biāo)Campath-1(CD52)是一種新的腫瘤干細(xì)胞預(yù)后標(biāo)志物[7]。

近年來(lái)隨著高分子通量測(cè)序等生物技術(shù)的飛速發(fā)展，CD52被證實(shí)在眾多系統(tǒng)疾病中扮演著至關(guān)重要的角色，對(duì)其分子機(jī)制的探索及生物標(biāo)志物的開(kāi)發(fā)有望為疾病治療提供新思路。

2 CD52在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

2.1 CD52與B淋巴細(xì)胞腫瘤周建文[8]通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓細(xì)胞CD52的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CD52在B淋巴細(xì)胞腫瘤的腫瘤細(xì)胞膜表面高表達(dá)，不同B淋巴細(xì)胞腫瘤的表達(dá)具有差異性，慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中CD52高表達(dá)，可作為CLL的治療靶點(diǎn)。QI等[9]研究發(fā)現(xiàn)CD52和CD20在CLL中的惡性B細(xì)胞表面共同表達(dá)，在CLL中分裂或最近分裂的細(xì)胞(“增殖分?jǐn)?shù)”)上檢測(cè)到兩種抗原的表達(dá)增加。PEVNA等[10]用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了95例確診為CLL的患者發(fā)現(xiàn)，治療后的CLL細(xì)胞殘留群體具有CD52表面檢測(cè)增加的特點(diǎn)，為CLL鞏固治療的可能性提供了基礎(chǔ)。早期就有研究發(fā)現(xiàn)在不同的淋巴細(xì)胞白血病人群中檢測(cè)到CD52的差異表達(dá)，其表達(dá)水平可作為淋巴細(xì)胞白血病治療反應(yīng)性的生物標(biāo)志物?！半p重命中”和“雙重表達(dá)”淋巴瘤代表不同但重疊的侵襲性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤亞群，CRAIG等[11]使用免疫組織化學(xué)方法對(duì)一系列雙命中(n=40)和雙表達(dá)(n=58)淋巴瘤進(jìn)行CD52靶向驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD52在不同樣本中的表達(dá)水平差異很大，但在大部分的雙命中和雙表達(dá)淋巴瘤中均觀察到陽(yáng)性染色；CD52的高水平表達(dá)見(jiàn)于與高危臨床特征相關(guān)的患者，與診斷相關(guān)的病理特征無(wú)顯著相關(guān)性。VOJDEMAN等[12]研究表明可溶性CD52(sCD52)是具有預(yù)后影響的CLL標(biāo)志物，與早前sCD52可用于CLL患者的分期和監(jiān)測(cè)研究結(jié)果一致。sCD52水平與CLL疾病活動(dòng)，可能與靶向B細(xì)胞受體(targets the B-cell receptor，BCR)通路激活有關(guān)。提出在BCR靶向治療的時(shí)代，sCD52作為疾病活動(dòng)的標(biāo)志物可能具有新的優(yōu)點(diǎn)。KARNAN等[13]研究發(fā)現(xiàn)LCL-FLT3-ITDWT/WT細(xì)胞顯示CD52 mRNA表達(dá)增加，細(xì)胞增殖減少，凋亡水平增加，結(jié)果表明FLT3-ITD對(duì)CD52表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響并非K562細(xì)胞獨(dú)有。提出CD52是FLT3-ITD白血病抗體治療的分子靶點(diǎn)，以CD52為靶點(diǎn)的抗腫瘤抗體(如阿侖單抗)是FLT3-ITD治療急性髓系白血病的潛在替代方案。以上可以看出，CD52分子在血液系統(tǒng)疾病中的重要性逐漸被人認(rèn)可，表達(dá)水平是治療反應(yīng)性的生物標(biāo)志物，其單克隆抗體在臨床治療上的顯著療效已作為白血病治療公認(rèn)的一線(xiàn)藥物。

2.2 CD52與乳腺癌作為中國(guó)乃至全世界女性最常見(jiàn)惡性腫瘤的乳腺癌，據(jù)最新數(shù)據(jù)顯示，全世界乳腺癌的新發(fā)病例高達(dá)226萬(wàn)例，為發(fā)病率最高的惡性腫瘤[14]。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，僅有約30%的患者達(dá)到臨床治愈的效果得以長(zhǎng)期生存，多數(shù)患者在根治性手術(shù)治療后仍會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，早期乳腺癌患者的5年生存率可達(dá)90%，但晚期患者5年生存率則低于40%[15]。分子靶向藥物治療成為近幾年研究熱點(diǎn)，乳腺癌未來(lái)治療的方向會(huì)以個(gè)體化綜合治療聯(lián)合分子靶向藥物治療為主[16]。SIEGEL等[17]統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)一部分乳腺癌患者即使在內(nèi)分泌治療、放療或化療后也會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)或疾病進(jìn)展，是乳腺癌相關(guān)死亡的主要原因?；诠舶┌Y數(shù)據(jù)庫(kù)，挖掘乳腺癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)簽的研究逐漸成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。有研究[18]通過(guò)對(duì)TCGA的挖掘，使用R包“Deseq2”進(jìn)行差異表達(dá)分析，獲得了一個(gè)有意義的乳腺癌ceRNA核心子網(wǎng)，其中心分子相互調(diào)節(jié)并在乳腺癌中發(fā)揮重要作用，有望成為潛在的治療靶點(diǎn)，同時(shí)此研究的策略為其他腫瘤預(yù)后相關(guān)標(biāo)志物的篩選提供了新的思路。研究指出未來(lái)可通過(guò)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)探索和驗(yàn)證這些RNA在乳腺癌各個(gè)分子分型發(fā)展的機(jī)制。因此精準(zhǔn)有效的生物標(biāo)志物對(duì)乳腺癌的靶向藥物治療極為重要。

WANG等[19]分析TCGA基因數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)CD52高表達(dá)組的基因主要在免疫相關(guān)途徑富集，低表達(dá)組的基因則主要在代謝途徑富集；CD52顯著上調(diào)并影響乳腺癌患者預(yù)后，是乳腺癌預(yù)后的一種生物標(biāo)志物，與腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment，TME)相關(guān)。TME于腫瘤侵襲、血管生成、無(wú)限增殖甚至免疫逃逸中發(fā)揮著重要作用，尋求一種TME相關(guān)的乳腺癌生物標(biāo)志物可以預(yù)測(cè)預(yù)后及免疫治療效果，尤其是對(duì)侵襲性乳腺癌[20]。然而，CD52作為細(xì)胞膜表面受體在TME中的作用尚不清楚。TME不僅包含癌細(xì)胞，還包含非癌細(xì)胞如基質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞，可能在監(jiān)管多種癌癥類(lèi)型中發(fā)揮重要作用。相關(guān)文獻(xiàn)[21-22]指出TME在腫瘤行為中是個(gè)重要的影響因素，在乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用，免疫微環(huán)境的特征隨著腫瘤的進(jìn)展而動(dòng)態(tài)變化，乳腺癌是一種以炎癥反應(yīng)為特征的腫瘤，微環(huán)境中有豐富的免疫細(xì)胞，浸潤(rùn)在TME中的免疫細(xì)胞，在腫瘤的調(diào)節(jié)下，免疫細(xì)胞的行為不協(xié)調(diào)，不同免疫細(xì)胞的激活狀態(tài)和功能在腫瘤的調(diào)節(jié)下傾向于抗腫瘤或促腫瘤的方向，故免疫細(xì)胞在其中發(fā)揮著重要作用。TME中浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞可以作為治療的靶點(diǎn)。PRUNERI等[23]指出腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞與三陰性乳腺癌化療的良好反應(yīng)和更好的預(yù)后有關(guān)。DENKERT等[24]研究表明在乳腺癌新輔助化療中，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的存在與高病理反應(yīng)率有關(guān)，乳腺癌中腫瘤相關(guān)淋巴細(xì)胞的存在是蒽環(huán)類(lèi)/紫杉烷新輔助化療反應(yīng)的一個(gè)新的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

MA等[25]研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌早期檢測(cè)到高水平的CD52表達(dá)，CD52的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致M1巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T濾泡輔助細(xì)胞和靜息記憶CD4T細(xì)胞的浸潤(rùn)增加；CD52的下調(diào)導(dǎo)致了M2巨噬細(xì)胞的高浸潤(rùn)。高表達(dá)CD52可能負(fù)調(diào)控M2巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，從而加速抗癌免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)，故CD52高表達(dá)水平可能對(duì)乳腺癌患者有保護(hù)作用。確定了CD52是一個(gè)重要的免疫相關(guān)基因，其表達(dá)可以有效地預(yù)測(cè)乳腺癌的預(yù)后和分期，CD52的高表達(dá)表明乳腺癌的早期分期和預(yù)后改善，是乳腺癌的有效生物標(biāo)志物。BEHRING等[26]研究利用公開(kāi)的數(shù)據(jù)，應(yīng)用CIBERSORT算法來(lái)估計(jì)浸潤(rùn)腫瘤的免疫細(xì)胞進(jìn)入免疫豐富和免疫貧乏的群體，使用差異性表達(dá)來(lái)測(cè)試個(gè)體特征基因和對(duì)相關(guān)通路的過(guò)度表達(dá)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：CD52、LYZ等非特征基因在免疫豐富的腫瘤中持續(xù)高表達(dá)。免疫豐富的腫瘤具有顯著的基因/途徑上調(diào)，而在免疫貧乏的腫瘤中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。

基于以上研究結(jié)果，我們大可認(rèn)為免疫相關(guān)基因CD52可為治療乳腺癌提供另一個(gè)思考方向，臨床上可通過(guò)檢測(cè)其表達(dá)量來(lái)評(píng)估分期、預(yù)后及監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)，有望成為新的治療靶點(diǎn)，但此觀點(diǎn)尚缺乏臨床前期研究，需要更多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)來(lái)驗(yàn)證。

2.3 CD52與肺癌WANG等[27]通過(guò)Meta分析對(duì)差異表達(dá)基因(DEG)和預(yù)測(cè)相關(guān)基因(PRG)進(jìn)行分析，在KM Plotter中對(duì)這些基因進(jìn)行了單變量Cox回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD52顯示有利于存活。將這些基因和臨床特征(包括分期、性別和吸煙史)納入多變量Cox回歸分析時(shí)，得出CD52可能作為肺鱗狀細(xì)胞癌的獨(dú)立有利預(yù)后因素，CD52顯示延遲復(fù)發(fā)。在5例肺鱗狀細(xì)胞癌患者的配對(duì)癌癥和鄰近組織這些基因的mRNA表達(dá)水平進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織中CD52的mRNA水平顯著低于癌旁組織。KM繪圖儀中的基因生存關(guān)聯(lián)分析以中值作為截止值，也表明CD52傾向于促進(jìn)生存。LI等[28]從癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定了肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異表達(dá)基因(DEGs)、miRNA(DEMs)和lncRNAs(DELs)，發(fā)現(xiàn)14個(gè)包括CD52在內(nèi)的靶基因與肺腺癌患者的生存率顯著相關(guān)。由此可認(rèn)為CD52在各類(lèi)型肺癌中具有相同作用，進(jìn)一步研究CD52在各類(lèi)型肺癌中的意義和作用機(jī)制，有望為肺癌尋找診斷和治療策略提供有遠(yuǎn)見(jiàn)的指導(dǎo)，可為預(yù)后的多基因診斷工具提供新的視角。

2.4 CD52與子宮內(nèi)膜癌子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率每年都在增加，晚期和特定亞型的患者治療效果不佳。MA等[29]通過(guò)實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)41例子宮內(nèi)膜癌組織和20例正常子宮內(nèi)膜組織中CD52等mRNA表達(dá)，結(jié)果顯示，癌組織中CD52的表達(dá)水平高于正常組織。此外，免疫組化檢測(cè)42例子宮內(nèi)膜癌組織和20例正常子宮內(nèi)膜組織中CD52等蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果表明，CD52蛋白在早期子宮內(nèi)膜癌中的高表達(dá)率高于正常組織中的高表達(dá)率，發(fā)現(xiàn)CD52蛋白在晚期子宮內(nèi)膜癌組織中與正常組織相比，其高表達(dá)率沒(méi)有顯著差異。無(wú)病生存分析表明，CD52的高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的高生存率相關(guān)。本研究采用基于免疫評(píng)分的估計(jì)算法和子宮內(nèi)膜癌TCGA隊(duì)列信息分析，篩選子宮內(nèi)膜癌的免疫相關(guān)基因并建立其預(yù)后特征。通過(guò)標(biāo)本驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)CD52等蛋白在早期子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)。基于此研究結(jié)果，探索子宮內(nèi)膜癌的免疫浸潤(rùn)相關(guān)因素十分重要，明確CD52作為子宮內(nèi)膜癌診斷和預(yù)后有價(jià)值的遺傳標(biāo)記，未來(lái)可能成為一個(gè)新的免疫治療靶點(diǎn)，予患者預(yù)后提供幫助。

2.5 CD52與胸腺惡性腫瘤胸腺上皮腫瘤是罕見(jiàn)的癌癥，一項(xiàng)文獻(xiàn)[30]回顧性分析了1995年至2006年間接受手術(shù)且病理證實(shí)的胸腺上皮腫瘤的患者，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)的組織標(biāo)本106份，以評(píng)估可能被實(shí)驗(yàn)藥物潛在靶向的胸腺上皮腫瘤樣本中的潛在預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物(CD52等)的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和膜狀CD52在7%樣本中檢測(cè)到，更具侵襲性的胸腺瘤可能是CD52陽(yáng)性(B2和B3胸腺瘤)，而胸腺癌缺乏可檢測(cè)的CD52表達(dá)。根據(jù)胸腺上皮腫瘤亞組，胸腺瘤和胸腺癌中CD52表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重癥肌無(wú)力作為胸腺上皮腫瘤相關(guān)的最常見(jiàn)的副腫瘤疾病，發(fā)生在高達(dá)過(guò)半的胸腺瘤患者中，曾有研究提出阿侖單抗是重癥肌無(wú)力的一個(gè)新的潛在治療靶點(diǎn)?；谘芯拷Y(jié)果示CD52表達(dá)僅限于侵襲性胸腺上皮腫瘤(B2和B3胸腺瘤)，其表達(dá)更為頻繁，那么進(jìn)一步研究該亞群中的抗CD52抗體顯然很有必要。

隨著研究的深入，關(guān)于CD52在其他疾病中報(bào)道也逐漸頗多。PUJIANTO等[31]發(fā)現(xiàn)CD52在附睪中表現(xiàn)出區(qū)域特異性表達(dá)，最高水平在尾部，CD52的表達(dá)受雄激素和lumicrine因子影響，受發(fā)育調(diào)控，且CD52顯示了附睪精子成熟相關(guān)基因的特征。VOJDEMAN等[32]用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)出HIV陽(yáng)性個(gè)體都表達(dá)CD52的CD4+T細(xì)胞，CD52高的患者CD4計(jì)數(shù)較高；聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(combination antiretroviral therapy，cART)治療12個(gè)月后CD52增加，表明抗CD52抗體可能更有效地消耗HIV陽(yáng)性個(gè)體的CD4+T細(xì)胞。最新研究[33]還發(fā)現(xiàn)CD52缺失是減少肺部炎癥、消除嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、改善肺功能，從而治療過(guò)敏性氣道高反應(yīng)性(AHR)的一種可行的治療選擇，抗CD52耗竭的單克隆抗體可以作為改善TH2和ILC2依賴(lài)性AHR的可行治療藥物。MAO等[34]通過(guò)體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在成熟脂肪細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞中CD52表達(dá)顯著上調(diào)，表明脂肪細(xì)胞中CD52的高表達(dá)可能是肥胖和2型糖尿病的不良生物標(biāo)志物。在功能上，CD52參與脂肪細(xì)胞分化和TGF-/Smad3信號(hào)通路，并影響CD4+CD52lowT細(xì)胞，表明CD52可能通過(guò)TGF-β/Smad3軸作為肥胖伴2型糖尿病的一個(gè)重要潛在靶點(diǎn)發(fā)揮作用?？梢?jiàn)CD52除在惡性腫瘤及免疫系統(tǒng)疾病中可充當(dāng)有效的治療靶點(diǎn)外，在眾多領(lǐng)域疾病也有著重要作用，深入探索其作用機(jī)制，將為臨床疾病治療提供新思路。

3 總結(jié)與展望

CD52的表達(dá)除早期研究證明與B淋巴細(xì)胞腫瘤、免疫系統(tǒng)性疾病、雄性生殖系統(tǒng)疾病等有密切關(guān)系外，隨著研究進(jìn)一步加深，不少新研究也報(bào)道了CD52與實(shí)體腫瘤的關(guān)系，如乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、胸腺上皮腫瘤。明確CD52是一個(gè)重要免疫相關(guān)基因，可有效預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后和分期，發(fā)現(xiàn)量身定制的治療新靶標(biāo)會(huì)是腫瘤學(xué)的一項(xiàng)重大進(jìn)步。鑒于抗CD52單克隆抗體在治療B淋巴細(xì)胞腫瘤等領(lǐng)域已有顯著療效，通過(guò)檢測(cè)其表達(dá)量來(lái)評(píng)估疾病分期、預(yù)后及監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)，臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CD52為一有效生物標(biāo)志物及抗CD52特異性抗體治療有望將基因治療思路運(yùn)用到實(shí)體腫瘤中，勢(shì)必能為今后CD52在疾病的分子治療方面提供一定的理論基礎(chǔ)。