辣木葉降脂顆粒對高脂血癥小鼠降脂作用探析

陳 鑫，王 云，張永萍，2*，陳 琴

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025；2.貴州省中藥民族藥炮制與制劑工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽 550025)

高脂血癥(hyperlipidemia，HLP)主要是指血漿中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)過高和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)過低的一種體內(nèi)脂代謝異常的臨床常見疾病[1-2]，是引起動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪肝、高血壓、腦卒中等心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素之一。臨床常以降脂藥，如他汀類、貝特類、煙酸類等藥物來預(yù)防和治療高脂血癥的發(fā)生，該類藥物降脂作用明顯，但長期使用可導(dǎo)致嚴(yán)重的橫紋肌溶解[3]、胃腸道惡心、腹脹和腹瀉等不良反應(yīng)。因此開發(fā)副作用小、藥效穩(wěn)定的降脂藥成為近幾年的研究熱點(diǎn)之一，中藥預(yù)防和治療脂代謝紊亂有獨(dú)特的優(yōu)勢，發(fā)揮了重要作用[4]。

中藥辣木葉[5]、刺梨[6]、黃精[7]、沙棘[8]、馬齒莧[9]是獨(dú)具貴州特色的藥食同源藥材，均以黃酮和多糖類為主要成分，該類成分具有降血脂血糖、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等作用[10-14]。在前期研究中，以這五味藥材為原料制成了保健食品辣木葉降脂顆粒，為探討該藥的降脂作用，本試驗(yàn)選用正常小鼠為研究對象，復(fù)制蛋黃乳致急性高脂血癥模型和高脂飼料致食餌性高脂血癥模型來觀察辣木葉降脂顆粒的調(diào)脂作用，以期為該藥食同源保健食品的相關(guān)保健功能開發(fā)提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

MULTISKAN酶標(biāo)儀(北京昊諾斯科技有限公司)；HY-2 渦旋混勻儀(上海邁皋科學(xué)儀器有限公司)；RRH-A1000高速功能粉碎機(jī)(上海緣沃工貿(mào)有限公司)。

1.2 試藥

辣木葉降脂顆粒，貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥物制劑實(shí)驗(yàn)室自制(制劑批號(hào)為20190521)；TG試劑盒(產(chǎn)品批號(hào)為20190615)；TC試劑盒(產(chǎn)品批號(hào)為20190615)、LDL-C試劑盒(產(chǎn)品批號(hào)為201906-15)、HDL-C試劑盒(產(chǎn)品批號(hào)為20190615)均購于深圳子科生物科技有限公司；6-丙基-乙-硫代尿嘧啶(產(chǎn)品批號(hào)為530643)、膽固醇(產(chǎn)品批號(hào)為511040)、膽酸鈉(產(chǎn)品批號(hào)為530219)均購于上海源葉生物科技有限公司；辛伐他汀片(產(chǎn)品批號(hào)為20190203)，成都華宇制藥有限公司；基礎(chǔ)飼料，長沙市天勤生物技術(shù)有限公司；78.8%豬油和白砂糖、新鮮雞蛋自備。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量(20±2)g，雄性，SPF級(jí)，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：1107261911000018，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2014-0011，由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模劑制備

①75%蛋黃乳：取新鮮雞蛋的蛋黃用生理鹽水配制成濃度75%的蛋黃乳；②高脂飼料：78.8%基礎(chǔ)飼料、3.4%膽固醇、0.2%丙硫、0.5%膽酸鈉、9.8%豬油、7.3%蔗糖粉混合，制成顆粒狀，80～85 ℃烘箱中放置8 h，即得。分別稱取高脂飼料19.2 g、9.6 g、4.8 g溶于20 mL生理鹽水中，制得辣木葉降脂顆粒高、中、低劑量(為人體推薦量的60、30、15倍)溶液；③陽性藥：取1片辛伐他丁溶于10 mL的生理鹽水溶液中，制得1 mg/mL的辛伐他丁溶液。

2.2 動(dòng)物分組及給藥

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分組，觀察：①對正常小鼠血脂的影響：將小鼠分正常組、辣木葉降脂顆粒高、中、低劑量組4組，按20 mL·kg-1/d灌胃1次(正常組灌胃等體積蒸餾水)，連續(xù)灌胃3 周；②辣木葉降脂顆粒對75%蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠血脂的影響：將小鼠分為空白組，模型組，辣木葉降脂顆粒高、中、低劑量組以及辛伐他丁組，每組10只。每組按20 mL·kg-1·d-1灌胃給藥1次(正常和模型組均灌胃等體積蒸餾水)，在第20天給藥5 h后，各組按 20 mL·kg-1腹腔注射75%蛋黃乳(正常組除外)；③辣木葉降脂顆粒對高脂飼料致食餌性高脂血癥小鼠血脂的影響：將小鼠分為空白組，模型組，辣木葉降脂顆粒高、中、低劑量組以及辛伐他丁組，每組10只。除正常組之外，每組均1次/d喂食高脂飼料，造模2周后，按20 mL·kg-1·d-1灌胃1次(正常組和模型組灌胃等體積蒸餾水)，連續(xù)灌胃3周。

2.3 檢測指標(biāo)

每組大鼠在末次給藥后，禁食不禁水12 h，然后眼科彎鑷摘眼球取血，離心，取上清液，分離血清，通過ELISA法檢測血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C的表達(dá)，具體步驟按試劑盒標(biāo)明方法進(jìn)行。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

辣木葉降脂顆粒對正常小鼠、蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠、高脂飼料致食餌性高脂血癥小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C含量的影響分別見表1、表2、表3。結(jié)果顯示，將蛋黃乳或高脂飼料造模后，模型組小鼠與空白對照組相比，蛋黃乳造模后模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低(P<0.01)；高脂飼料造模后模型組小鼠TG、TC、LDL-C水平有一定程度升高(P<0.05)，而HDL-C水平顯著降低(P<0.01)；表明蛋黃乳致急性高脂血癥模型以及食餌性高脂血脂小鼠模型復(fù)制成功。

表1 辣木葉降脂顆粒對正常小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C的影響

表2 辣木葉降脂顆粒對蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C的影響

表3 辣木葉降脂顆粒對食餌性高脂血癥小鼠血清 TG、TC、LDL-C、HDL-C 的影響

辣木葉降脂顆粒高劑量對正常小鼠血清中的TG、TC、LDL-C均無明顯影響(P>0.05)，而對HLD-C水平的升高有一定影響(P<0.05)；對蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠能一定程度降低其血清 TG 水平(P<0.05)，對 TC、LDL-C、HDL-C 水平無明顯影響(P>0.05)；對食餌性高脂血癥小鼠，能一定程度降低其血清中的TG、TC、LDL-C水平(P<0.05)，但對HDL-C水平的升高無明顯影響。辣木葉降脂顆粒中劑量對正常小鼠血清中的TG、TC、LDL-C、HLD-C 水平均無明顯影響(P>0.05)；對蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠，能一定程度降低其血清 TG 水平(P<0.05)，對 TC、LDL-C、HDL-C 水平無明顯影響(P>0.05)；對食餌性高脂血癥小鼠，能顯著降低其血清TG、LDL-C水平(P<0.01)，對 TC、HDL-C 水平無明顯影響(P>0.05)。辣木葉降脂顆粒低劑量對正常小鼠血清和蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠、食餌性高脂血癥小鼠中的TG、TC、LDL-C、HLD-C 水平均無明顯影響(P>0.05)。辛伐他汀組對蛋黃乳致急性高脂血癥小鼠血清中HDL-C水平的影響明顯高于模型組(P<0.01)，但對TG、TC、LDLC水平無明顯影響(P>0.05)。辛伐他汀可一定程度降低食餌性高脂血癥小鼠血清TG、TC、LDL-C 水平(P<0.05)，但對升高血清HDL-C水平無明顯作用(P>0.05)。

4 結(jié)語

通過腹腔注射75%蛋黃乳和喂食高脂飼料建立兩種高脂血癥小鼠模型，通過檢測血液生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組相比，血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平均存在一定差異(P<0.05)，說明兩種高脂血癥模型均復(fù)制成功。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率能隨著血清中TG、TC、LDL-C值升高和 HDL-C值降低而增加，降低血脂，可延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生[15]。采用建立高脂血癥模型的方法研究辣木葉降脂顆粒調(diào)節(jié)血脂的功效，并和降脂藥辛伐他汀進(jìn)行比較，結(jié)果表明辣木葉降脂顆粒能升高正常小鼠血清HDL-C值，抑制急性高脂血癥小鼠血清TG水平，同時(shí)可降低食餌性高脂血癥小鼠血清TG、TC和 LDL-C值，辣木葉降脂顆粒的這種降脂作用能降低外圍組織細(xì)胞中膽固醇的堆積，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。辛伐他汀屬于羥甲戊二酰輔酶A還原酶抑制劑，主要通過降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成水平來降低血脂[16]，從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，辣木葉降脂顆粒的降脂作用與辛伐他汀作用相似，本研究為辣木葉降脂作用機(jī)理研究提供了方向。

將正常動(dòng)物用于降脂藥物的初步篩選，如果結(jié)果為陽性則表示可靠，若為陰性也不能完全否認(rèn)藥物的作用。辣木葉降脂顆粒能使正常小鼠血清HDL-C水平一定程度升高(P<0.05)，表明辣木葉降脂顆?？赡芫哂蓄A(yù)防高脂血癥的功效，為其保健品的研發(fā)提供了依據(jù)。本研究在，辣木葉降脂顆粒高、中、低劑量組的75%蛋黃乳致急性高脂血癥模型小鼠血清TG水平有一定程度降低(P<0.05)。在辣木葉降脂顆粒對高脂飼料致食餌性高脂血癥模型小鼠血脂的影響方面，高劑量可降低高脂血癥小鼠血清TG、TG、LDL-C水平(P<0.05)，中劑量可降低血清TG、LDL-C水平(P<0.05)，低劑量對TG、TG、LDL-C水平也有降低作用，但降低效果不明顯；本研究中，高、中、低劑量組血清的HDL-C表達(dá)均有升高，但作用不顯著。

綜上所述，辣木葉降脂顆粒能夠改善高脂血癥小鼠血脂水平，從而預(yù)防高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展，本研究為辣木葉降脂顆粒的保健作用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。