凡納濱對蝦肌肉中組織蛋白酶L提取工藝優(yōu)化及分離純化

唐振冬，邵海艷，張迪，劉書成,2，吉宏武,2*，徐杰，太敏瑞，蘇偉明，梁善昊，何旋

1(廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院，廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點實驗室，廣東省海洋生物制品工程實驗室，廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心，水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點實驗室，廣東 湛江，524088) 2(海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心(大連工業(yè)大學(xué))，遼寧 大連，116034)

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)又稱白對蝦、白腿蝦，營養(yǎng)豐富、滋味鮮美，是我國大宗養(yǎng)殖水產(chǎn)品之一[1]。據(jù)《2020中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒》[2]，2019年我國對蝦經(jīng)濟(jì)總產(chǎn)值超過5 000億元，對蝦養(yǎng)殖總面積23.74 萬hm2，養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)212.14萬t。凡納濱對蝦加工、貯藏及運輸過程中易出現(xiàn)肌肉軟化、殼肉分離等品質(zhì)劣變。PENG等[3]研究發(fā)現(xiàn)蝦頭肝胰腺中內(nèi)源蛋白酶可以遷移至蝦肌肉組織中降解肌原纖維蛋白，導(dǎo)致蝦肌肉組織軟化。因此，對蝦加工過程中通常將蝦頭去掉，產(chǎn)品主要以凍蝦仁和去頭蝦為主[4-5]，但蝦肉仍會發(fā)生自溶現(xiàn)象，質(zhì)地軟化，對水產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不良影響。

國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，肌肉組織中內(nèi)源蛋白酶對肌原纖維的降解有較大影響，抑制蛋白酶的作用有利于產(chǎn)品的貯藏[6-7]。水產(chǎn)品中內(nèi)源性蛋白酶主要包含半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、絲氨酸蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶4種[8]，其中內(nèi)源性半胱氨酸蛋白酶主要降解肌原纖維蛋白，內(nèi)源性絲氨酸蛋白酶降解肌原纖維和結(jié)締組織蛋白[9]。組織蛋白酶是一種半胱氨酸蛋白酶，是造成肌肉蛋白降解的關(guān)鍵因素[10]。AHMED等[11]發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶除了能水解肌原纖維蛋白和相關(guān)蛋白外，還具有在死后存儲后期分解肌動蛋白和肌球蛋白的能力。水產(chǎn)動物肌肉中組織蛋白酶的種類有很多，主要有組織蛋白酶L、B、H和D[12]。GE等[13]發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶L在肌肉細(xì)絲的拆卸中起主要作用，是一種最容易使肌原纖維蛋白降解的蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶對降解蛋白表現(xiàn)明顯，因此，為防止水產(chǎn)品肌肉的死后軟化，提高水產(chǎn)品的質(zhì)量，研究組織蛋白酶L的作用機(jī)制，同時尋找其抑制機(jī)制非常有意義[14]。

近年來，有關(guān)凡納濱對蝦內(nèi)源蛋白酶的研究主要是以蝦頭為研究對象，探究內(nèi)源蛋白酶的酶學(xué)特性以及降解肌肉蛋白的機(jī)理，但是對凡納濱對蝦肌肉中內(nèi)源蛋白酶的分離純化及其酶學(xué)特性研究卻鮮見報道。本研究以凡納濱對蝦肌肉為研究對象，進(jìn)行凡納濱對蝦肌肉中組織蛋白酶L提取工藝優(yōu)化，探究其提取工藝的最佳條件，運用生化分離純化技術(shù)獲取高純度的組織蛋白酶L，驗證其對肌原纖維的降解。為進(jìn)一步探究組織蛋白酶L自溶機(jī)制提供高純度肌肉組織蛋白酶L，為尋求降低組織蛋白酶L對蝦肉質(zhì)地劣化提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮凡納濱對蝦，平均體長(9.50±0.50) cm，平均體重(7.08±0.30) g，廣東省湛江市霞山水產(chǎn)品批發(fā)市場。

7-氨基-4-甲基香豆素(7-amido-4-methylcoumarin，AMC)、N-芐氧羰基-L-苯丙氨酰-L-精氨酸香豆素(benzyloxycarbonyl-arginylarginine-4-methyl-7-coumarylamide,Z-Phe-Arg-AMC)，美國Sigma公司；Sephacaryl S-100、O-sepharose F.F陰離子層析柱，日本GE Healthcare公司；蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，上海碧云天生物技術(shù)有限公司；硫酸銨、三羥甲基氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)methyl aminomethane，Tris]、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride, PMSF)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)、EDTA，上海源葉生物科技有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)試劑純。

1.2 儀器與設(shè)備

Varioskan Flas全自動酶標(biāo)儀、Thermo Lynx6000高速落地離心機(jī)，美國賽默飛世爾科技公司；BSA224S-CW萬分之一天平，德國賽多利斯集團(tuán)；BSZ-100液晶版自動部分收集器，上海青浦滬西儀器廠；GelDoc EZ G凝膠成像儀，美國伯樂公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 凡納濱對蝦肌肉組織蛋白酶L粗酶液的提取

參考田元勇等[15]的方法并進(jìn)行改進(jìn)。在冰浴條件下，將去頭尾、蝦殼和腸線的蝦肉用絞肉機(jī)絞碎。取5.0 g的蝦肉糜，加入一定體積比的緩沖液[包含一定濃度Tris-HCl緩沖液，半胱氨酸(L-cysteine，L-Cys)溶液和PMSF溶液，pH=7.0]，在冰浴條件下高速均質(zhì)(12 000 r/min，1 min)，調(diào)節(jié)pH后在4 ℃條件下冷凍離心(8 500 r/min，20 min)，得到的上清液為組織蛋白酶L粗酶液。

1.3.2 單因素試驗

分別以pH值、提取料液比、浸提時間、L-Cys濃度、PMSF濃度、緩沖液種類及緩沖液濃度為影響因素，以組織蛋白酶L酶活力為指標(biāo)進(jìn)行單因素試驗[16]。

1.3.3 Plackett-Burman試驗

通過對單因素試驗進(jìn)行分析，選擇各影響因子的高(+1)、低(-1)2個水平，并以組織蛋白酶L活力為考察指標(biāo)，采用Plackett-Burman試驗篩選出顯著影響組織蛋白酶L活力的因子。

1.3.4 雙因素等重復(fù)試驗

根據(jù)單因素試驗和Plackett-Burman試驗結(jié)果，采用雙因素等重復(fù)試驗，分析2個因素的交互作用。

1.3.5 AMC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

用蒸餾水稀釋AMC儲備液得到一系列濃度的AMC溶液，使用全自動酶標(biāo)儀在激發(fā)波長344 nm、發(fā)射波長436 nm下，以AMC濃度為橫坐標(biāo)，436 nm下熒光強度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.6 凡納濱對蝦肌肉組織蛋白酶L活力測定方法

參考祝倩倩[17]的方法，進(jìn)行適當(dāng)修改。取100 μL粗酶液，依次加入250 μL 50 mmol/L乙酸鈉-乙酸緩沖液(pH 4.0)，50 μL 10 μmol/L的底物Z-Phe-Arg-AMC，混勻后在60 ℃反應(yīng)20 min，加入400 μL終止液(含0.1 mol/L乙酸鈉、0.1 mol/L乙酸、0.1 mol/L氯乙酸鈉，pH 4.55)終止反應(yīng)，利用全自動酶標(biāo)儀測定其熒光強度，所用的激發(fā)波長為344 nm，發(fā)射波長為436 nm?？瞻讓φ战M先添加反應(yīng)終止液，使酶失活，再加底物進(jìn)行反應(yīng)[18]。

酶活力單位(U)定義為在最適反應(yīng)溫度(60 ℃)和pH 4.0條件下，1 min內(nèi)水解底物并釋放1 ng AMC產(chǎn)物的酶量(1 ng AMC/min)[19]?？偯富盍懊富盍Φ寐视嬎闳绻?1)、公式(2)所示：

(1)

式中：X為總酶活力，U；V1為反應(yīng)體系總體積，mL；V2為粗酶液總體積，mL；V3為反應(yīng)體系粗酶液加入量，mL；T為反應(yīng)時間，min。

(2)

式中：X為總酶活力，U；M為蝦肉質(zhì)量，g。

1.3.7 組織蛋白酶L的分離純化

粗酶液分別進(jìn)行飽和度為40%、50%、60%、70%、80%、90%硫酸銨溶液的分級沉淀[20]，充分透析后上樣于Q-Sepharose F.F陰離子交換層析，經(jīng)20 mmol/L pH 7.0的Tris-HCl緩沖液平衡后，用0.1～0.5 mol/L 5個梯度的NaCl緩沖液(pH 7.0)線性洗脫2個柱體積，每管收集4 mL，在紫外波長280 nm下檢測收集溶液的吸收波長，作出蛋白峰值曲線。收集可檢測到酶活力的蛋白溶液，經(jīng)分子質(zhì)量10 kDa的超濾離心管濃縮，濃縮酶液經(jīng)Sephadacryl S-100凝膠過濾層析，用20 mmol/L pH 7.0的Tris-HCl緩沖液洗脫，收集可檢測到酶活力的蛋白峰尖和峰腰溶液，每管收集1.5 mL，做蛋白峰值與酶活曲線。利用SDS-PAGE技術(shù)對工藝優(yōu)化提取前后，層析前后的組織蛋白酶L進(jìn)行鑒定[21]。

1.3.8 組織蛋白酶L對肌原纖維蛋白的降解分析

高校學(xué)生幸福感影響因素研究——基于Pearson相關(guān)性分析和累積Logistic回歸模型 孫小軍 介科偉 (5) (14)

1.3.8.1 肌原纖維蛋白的提取

取5.0 g蝦糜加入45.0 mL預(yù)冷的0.02 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.0)，在冰浴條件下均質(zhì)1 min后，進(jìn)行4 ℃，12 000 r/min離心10 min，棄上清液，重復(fù)操作1次后，往沉淀中加入0.02 mol/L 磷酸緩沖液(0.5 mol/L NaCl，pH 7.5)，冰浴條件下均質(zhì)1 min后，在4 ℃，12 000 r/min離心15 min，取上清液即為蝦肉肌原纖維，立即分裝冷藏備用[22]。

1.3.8.2 組織蛋白酶L對肌原纖維蛋白的降解作用

在提取的肌原纖維蛋白中加入純化后組織蛋白酶L，與50 mmol/L乙酸鈉-乙酸緩沖液(pH 4.0)充分混合，在50 ℃條件下分別反應(yīng)0、30、60、120 min后[19]，用SDS-PAGE進(jìn)行分析，觀察肌原纖蛋白的降解情況[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 AMC標(biāo)準(zhǔn)曲線

以AMC濃度為橫坐標(biāo)，436 nm下熒光強度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到AMC標(biāo)準(zhǔn)曲線y=129.51x+0.060 2 (R2=0.999 8)。

2.2 單因素試驗

單因素試驗結(jié)果見圖1。在pH 3.0～8.0提取的組織蛋白酶L均有活性，在pH 7.0時出現(xiàn)最大值，在pH 4.0條件下出現(xiàn)了最小值。用Tris-HCl緩沖液的提取結(jié)果均優(yōu)于NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液，在濃度達(dá)到40 mmol/L時達(dá)到最大值，隨著緩沖液濃度繼續(xù)上升，活性開始下降。Tris不易與鈣、鎂等離子和重金屬離子發(fā)生沉淀，可減少對提取過程的干擾，有利于酶的提取[23]。隨著料液比的增大，酶活性有所升高，在料液比1∶8后總酶活力變化不大。隨著浸提時間延長，酶活力稍有下降，且呈現(xiàn)下降的程度保持不變，可能是4 ℃條件下浸提時有部分酶失活。隨著L-Cys濃度增加，酶活力逐漸上升；當(dāng)濃度達(dá)到6 mmol/L時出現(xiàn)最大值，當(dāng)濃度繼續(xù)增大時，酶活力略有下降，但與不添加L-Cys相比依然表現(xiàn)出激活作用。組織蛋白酶L是巰基蛋白酶，酶的活性中心含有巰基基團(tuán)[24]。L-Cys是一種巰基保護(hù)劑，能保護(hù)活性中心的巰基從而提高組織蛋白酶L的活力。PMSF是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，適當(dāng)濃度的PMSF能夠激活半胱氨酸蛋白酶[25]，在提取緩沖液中加入PMSF可以排除絲氨酸蛋白酶和其他蛋白酶的干擾，避免酶在提取過程中被其他蛋白酶作用而失活。隨著PMSF濃度的增大，酶活力逐漸提升，在濃度達(dá)到0.4 mmol/L時出現(xiàn)最大值，濃度繼續(xù)增大時，活性呈現(xiàn)下降趨勢，但與不添加PMSF相比依然表現(xiàn)促進(jìn)作用。

a-提取pH；b-緩沖液種類及緩沖液濃度；c-提取料液比；d-浸提時間；e-L-Cys濃度；f-PMSF濃度圖1 不同提取pH、緩沖液種類及緩沖液濃度、提取料液比、浸提時間、L-Cys濃度、PMSF濃度對組織蛋白酶L活性的影響Fig.1 Effects of different extraction pH, buffer type and buffer concentration, solid-liquid ratio, extraction time, L-Cys concentration, and PMSF concentration on the activity of cathepsin L

2.3 Plackett-Burman試驗

利用Design-Expert 11.0軟件來設(shè)計Plackett-Burman試驗，選擇試驗次數(shù)N為12。探究提取料液比、提取pH值、Tris-HCl緩沖液濃度、L-Cys濃度、PMSF濃度等5個因素對組織蛋白酶L活性的影響,如表1、表2所示。因浸提時間在0 h時的總酶活力最高，且總酶活力隨著時間延長逐漸下降，考慮到提取效率，此因素不參與該試驗[26]。實驗數(shù)據(jù)用Design-Expert 11.0軟件處理，其中提取pH與提取料液比為顯著性因素(表3)。

表1 Plackett-Burman設(shè)計的因素和水平Table 1 Plackett-Burman test design factors and levels

表2 Plackett-Burman試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Plackett-Burman test design and results

表3 各因素效應(yīng)值及其顯著性分析Table 3 Effect size and significance analysis of each factor

2.4 雙因素等重復(fù)試驗

為研究提取pH與提取料液比的交互作用對組織蛋白酶L總酶活力的影響，進(jìn)行雙因素等重復(fù)試驗，用SPSS 22.0軟件對結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表4、表5所示。提取pH、提取料液比、提取pH與提取料液比交互作用的P值均為0.00，驗證了Plackett-Burman試驗中提取pH與提取料液比對組織蛋白酶L總酶活力有顯著性影響的結(jié)論，且反映了兩者存在顯著的交互作用。

表4 雙因素等重復(fù)試驗試驗設(shè)計方案及結(jié)果Table 4 Two factors repeated equally test design scheme and results

表5 提取pH及提取料液比對組織蛋白酶L總酶活力作用的雙因素方差分析Table 5 Two-factor analysis of variance of total enzyme activity of cathepsin L by the extraction pH value and the material/liquid radio

2.5 最佳提取條件的確定

2.6 Q-Sepharose F.F陰離子柱交換層析

粗酶液經(jīng)Q-Sepharose F.F陰離子柱交換層析，結(jié)果見圖2，總共洗脫出5個主要的蛋白吸收峰，其中峰1為穿透峰，穿透峰峰值最高但未測出酶活力，表明緩沖液能夠較好地洗脫出雜蛋白；組織蛋白酶L從峰2開始被洗脫出來，其中組織蛋白酶L主要在峰3時被洗脫出來，峰4、峰5基本上不含有組織蛋白酶L，其中峰3對應(yīng)的鹽濃度為0.2 mol/L，可知0.2 mol/L NaCl為最佳洗脫濃度，所以主要收集0.2 mol/L NaCl緩沖液洗脫出來的溶液進(jìn)行下一步的濃縮和純化。顏龍杰等[19]采用SP-Sepharose陽離子層析柱線性洗脫組織蛋白酶L，崔昱清等[22]采用DEAE Sephacel 陰離子交換層析柱梯度洗脫組織蛋白酶L。本實驗采用Q-Sepharose F.F陰離子交換層析柱運用NaCl梯度洗脫取得較好的分離效果，純化倍數(shù)達(dá)到13.09，同時操作過程簡單，上樣量大。

圖2 Q-Sepharose F.F 陰離子交換柱層析純化組織蛋白酶LFig.2 Purification of cathepsin L by Q-Sepharose F.F anion exchange column chromatography

2.7 Sephacryl S-100凝膠過濾層

將經(jīng)過陰離子交換層析柱0.2 mol/L鹽濃度緩沖液洗脫得到的樣品進(jìn)行Sephacryl S-100凝膠層析后結(jié)果如圖3所示，經(jīng)過Sephacryl S-100凝膠層析柱，組織蛋白酶L能夠很好地與雜質(zhì)蛋白分離開，圖中出現(xiàn)2個主要的蛋白吸收峰，其中絕大部分蛋白質(zhì)集中在第1個蛋白峰但對應(yīng)的組織蛋白酶L活性不明顯；而第2個蛋白峰剛好相反，蛋白含量極低但對應(yīng)組織蛋白酶L活性極高。沈建東[27]采用Sephacryl S-200 HR凝膠層析柱從皺紋盤鮑組織中分離組織蛋白酶L。本實驗運用Sephacryl S-100凝膠層析柱分離后組織蛋白酶L純化倍數(shù)為298.28，過程操作簡單，分離效果好。組織蛋白酶L在分離純化過程中受到溫度、離子濃度、鹽濃度、酶相互作用等的影響逐漸失去活性，因此在獲得較高純度組織蛋白酶L時，組織蛋白酶L部分損失導(dǎo)致得率降低[28]。其中組織蛋白酶L純化過程中的比活力、得率、純化度如表6所示，經(jīng)過離子交換層析和凝膠過濾層析后得到的活性成分與粗酶液相比較，比活力從0.34提高到101.15 U/mg，純化倍數(shù)為298.28，產(chǎn)率為16.50%。

圖3 Sephadex S-100 凝膠層析柱純化組織蛋白酶LFig.3 Purification of cathepsin L by Sephadex S-100 gel column

表6 組織蛋白酶L主要提取分離結(jié)果對比Table 6 Comparison of main extraction and separation results of cathepsin L

2.8 SDS-PAGE結(jié)果

經(jīng)過各種純化方式收集的蛋白酶進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果如圖4所示，每個分離純化方法都起到一定的純化效果，其中粗酶液主要含有5條蛋白帶，經(jīng)過離子交換層析除去了大部分雜蛋白，再經(jīng)過凝膠過濾層析得到高純度的蛋白酶液，電泳結(jié)果顯示單條蛋白條帶其分子質(zhì)量大小約為46 kDa，因此本試驗篩選的工藝參數(shù)能夠有效地分離組織蛋白酶L。

M-標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)量蛋白; L0-工藝優(yōu)化前提取酶液;L1-工藝優(yōu)化后提取酶液;Q-F.F-Q-Sepharose F.F陰離子柱交換層析收集液;S-100-Sephacryl S-100凝膠層析收集液圖4 組織蛋白酶L的SDS-PAGE電泳Fig.4 SDS-PAGE analysis of cathepsin L

本研究從蝦肉中純化出的組織蛋白酶L的分子質(zhì)量與已經(jīng)報道的組織蛋白酶L的分子質(zhì)量(約為31 kDa)差距較大，卜興江等[29]發(fā)現(xiàn)中國明對蝦組織蛋白酶L基因的酶原片段表達(dá)產(chǎn)物分子質(zhì)量在40 kDa左右，顏龍杰等[19]從凡納濱對蝦肝胰腺中純化獲得1種組織蛋白酶L,分子質(zhì)量約為31 kDa，存在的差異可能是提取組織蛋白酶L的部位和原料不同造成的，有待進(jìn)一步深入研究。

A0-0min；A30-30min；A60-60min；A120-120min圖5 組織蛋白酶L對蝦肉肌原纖維蛋白的降解情況Fig.5 Cathepsin L degradation of shrimp myofibrillar protein

2.9 組織蛋白酶L對肌原纖維的降解作用驗證

蝦在貯藏過程中，易出現(xiàn)蝦體軟化和質(zhì)構(gòu)劣變現(xiàn)象，主要原因是蝦肉中肌原纖維蛋白的裂解。有研究發(fā)現(xiàn)肌肉中內(nèi)源蛋白酶對肌原纖維有明顯降解作用，其中內(nèi)源性半胱氨酸蛋白酶主要降解肌原纖維蛋白[9]，其中組織蛋白酶L是一種半胱氨酸蛋白水解酶。XU等[10]研究發(fā)現(xiàn)半胱氨酸蛋白酶對冷凍魚片肌肉降解的軟化作用較為明顯，YANG等[28]發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶L對肌原纖維蛋白降解作用比其他蛋白酶強，對肌肉蛋白品質(zhì)和質(zhì)地特性的影響也比其他蛋白酶大。ZHANG等[12]發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶L在石斑魚肌原纖維蛋白的降解中起最重要的作用。PENG等[3]發(fā)現(xiàn)凡納濱對蝦肝胰腺中的蛋白酶對肌肉降解有一定作用，并且組織蛋白酶L廣泛存在于凡納濱對蝦肌肉中[30]，為進(jìn)一步驗證組織蛋白酶L對凡納濱對蝦中肌原纖維蛋白的降解作用，進(jìn)行了組織蛋白酶水解肌原纖維蛋白的模擬體系，驗證純化后組織蛋白酶L對凡納濱對蝦肌原纖維蛋白的降解作用。在pH 4.0條件下內(nèi)源蛋白酶對肌原纖維的降解作用明顯，50～60 ℃是內(nèi)源蛋白酶的反應(yīng)最適溫度。在50 ℃條件下，在肌原纖維蛋白中加入純化后的組織蛋白酶L，隨著時間的延長，組織蛋白酶L對肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain，MHC)和肌動蛋白迅速降解，MHC與肌動蛋白降解越來越明顯，說明純化組織蛋白酶L對肌原纖維蛋白有明顯降解作用(圖5)。本試驗證實了組織蛋白酶L是降解肌原纖維蛋白的主要酶類之一，但具體內(nèi)源蛋白酶的降解作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

通過單因素試驗、Plackett-Burman試驗和雙因素等重復(fù)試驗，確定對蝦肌肉中組織蛋白酶L最佳提取條件為：緩沖液體系(Tris-HCl緩沖液濃度40 mmol/L，L-Cys濃度6 mmol/L，PMSF濃度0.4 mmol/L)，料液比1∶8(g∶mL)，pH 6.0，在此條件下提取的組織蛋白酶L酶活力得率達(dá)150.1 U/g。粗酶液進(jìn)一步分離純化得到單條帶的組織蛋白酶L，酶比活力從0.34 提高到了101.15 U/mg，純化倍數(shù)達(dá)到298.28倍，得率為16.50%，分子質(zhì)量為46.4 kDa，提純后的組織蛋白酶L會使肌球蛋白重鏈和肌動蛋白迅速降解，這表明提純后的組織蛋白酶L對肌原纖維蛋白有明顯的降解作用。本研究為蝦類貯藏過程中品質(zhì)控制提供科學(xué)依據(jù)，而組織蛋白酶L對肌肉的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。