諾麗酵素對(duì)海南文昌雞生長(zhǎng)和免疫性能的影響

邱紅輝

（海南省東方市畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心，海南東方 572600）

利用中草藥治療動(dòng)物疾病是我國(guó)勞動(dòng)人民智慧的結(jié)晶，在長(zhǎng)期的預(yù)防和治療應(yīng)用中，人們對(duì)中草藥的“四性五味”和能治療的疾病種類都積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。中草藥的組成成分復(fù)雜，其中能抗菌抗病毒的成分也很多樣化。試驗(yàn)結(jié)果表明，某些中草藥提取物對(duì)雞的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，對(duì)雞的免疫功能具有增強(qiáng)作用，能提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力，提高抵抗細(xì)菌和病毒入侵的能力，使動(dòng)物的肉質(zhì)口感更好。中草藥制劑可以調(diào)節(jié)動(dòng)物的免疫器官、免疫細(xì)胞和特異性免疫功能增強(qiáng)，還可以減少動(dòng)物產(chǎn)品的藥物殘留和病原微生物殘留[1]。

諾麗，英文名Noni，又名海巴戟、諾尼，是一種多年生闊葉灌木或小喬木，主要生長(zhǎng)在南太平洋的島嶼上[2]，屬茜草科植物，如菲律賓、澳大利亞、柬埔寨[3]。在我國(guó)主要分布在海南島、西沙群島和臺(tái)灣島[4]。諾麗通常生長(zhǎng)在海灘上的灌木叢中，還有石頭多的海邊、路邊、溪流和濕地中。麗的組成成分復(fù)雜多樣，人們?cè)谥Z麗中已發(fā)現(xiàn)了160多種有效成分。國(guó)外有人發(fā)現(xiàn)諾麗果中含有茜素、氨基酸、黃酮、亞油酸、胡蘿卜素、維生素A、1-甲基醚、谷甾醇、生物堿、蒽醌、維生素C、萜類化合物、鉀、莨菪亭（7羥基6甲氧基香豆素）等化學(xué)成分[5]。美國(guó)拉特格斯大學(xué)何池唐領(lǐng)導(dǎo)的研究小組發(fā)現(xiàn)諾麗果中含有脂肪酸酯、蘆丁、環(huán)烯醚萜苷和黃酮苷等成分。詹姆斯杜克從中發(fā)現(xiàn)了5種維生素和礦物質(zhì)，以及23種化學(xué)成分[6]。從以上科學(xué)研究成果可以得出，生物堿、酚類物質(zhì)和有機(jī)酸是諾麗中含有的主要有效成分，酚類物質(zhì)的主要組分是蒽醌[7]。己酸和辛酸是有機(jī)酸中最主要的組分[8]。水分含量占到諾麗果重量的90.0%，干物質(zhì)主要為蛋白質(zhì)、膳食纖維、可溶性固體；蛋白質(zhì)含量占諾麗果汁干物質(zhì)總重量的11.3%；異亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸構(gòu)成了氨基酸的主要成分；鈣、磷、鉀和硫是礦物質(zhì)的主要成分，干基重量的8.4%為礦物質(zhì)，也有試驗(yàn)報(bào)道諾麗果中含有硒元素[9，11]。諾麗果中每100g干物質(zhì)含有24～128mg維生素，主要成分是抗壞血酸[10]，除此之外,還含有維生素A[2]。諾麗果汁中主要的微營(yíng)養(yǎng)成分是酚類物質(zhì)，包括茜根定一甲醚（Rubiad in1methylEther）、羧基偶氮磺胺（Rubiazol）、蛋白質(zhì)思鈉（Nordamna canthal）、桃葉珊瑚苷（Aucubin）、茜素（Alizarin）、桑酮（Morindone）、賽洛寧（Xeron ine）、紅芽大戟根含虎刺醛（Damnacantha）,以及其他的蒽醌糖苷類物質(zhì)（Anthraqu inone coside）[10]。

世界范圍內(nèi)關(guān)于諾麗的藥理學(xué)作用研究主要有以下幾點(diǎn)[11]：（1）抑菌作用，諾麗果能顯著抑制大部分細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。諾麗果中含糖類較多,在常溫密閉條件下，這些糖類不會(huì)發(fā)酵分解為酸而腐爛，所以諾麗果很適合長(zhǎng)途運(yùn)輸，不需要特殊的保鮮條件。（2）抗氧化作用，諾麗果實(shí)抗氧化活性很強(qiáng)，可阻止銅作用的低密度脂蛋白氧化過程。采用DPPH 自由基捕獲分析諾麗果汁的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)每100ml果汁與140mg抗壞血酸及210mg沒食子酸清除自由基的作用一致。（3）抗菌消炎作用，諾麗果汁能夠抑制部分與胸部、肺和結(jié)腸癌細(xì)胞有關(guān)的環(huán)氧酶（COX1，COX2）的活性，同時(shí)表現(xiàn)出消炎的作用[12]。

諾麗已被美國(guó)藥典收錄,其中詳細(xì)介紹了諾麗的增強(qiáng)免疫力、抗霉菌、抗病毒、殺菌、抗癌、抗過敏等功效[13]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，諾麗果汁中的多糖同時(shí)具有抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用，可以用諾麗果或者諾麗果與其他植物合用治療多種疾病[14]。

海南文昌雞主要生長(zhǎng)在海南文昌、東方、定安等地，是海南傳統(tǒng)優(yōu)秀的地方雞品種，其體型小巧靈活，腳爪短小，毛色金黃，肉香湯鮮，營(yíng)養(yǎng)美味，具有色、香、味、型、營(yíng)養(yǎng)俱佳，具有食物來源廣、活潑好動(dòng)、飼養(yǎng)性價(jià)比高等特點(diǎn)。筆者通過在海南文昌雞日糧中添加諾麗酵素，研究其對(duì)海南文昌雞的生長(zhǎng)性能和免疫性能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

本試驗(yàn)于2020年11月15日至2021年1月15日在海南省東方市大田鎮(zhèn)大田村科技扶貧示范養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行。選取平均日齡70d、平均體重0.8kg、毛色和體型基本一致的文昌雞母雞100只，之前未注射過疫苗，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（A組）和3個(gè)試驗(yàn)組（低劑量組B組、中劑量組C組和高劑量組D組），每組25只。4組試驗(yàn)用雞所用的飼料配方完全相同，同日各組雞所用的飼料重量完全相同，沒有剩料，飼養(yǎng)管理方式也完全相同。A組雞飼喂的飼料未添加諾麗酵素，B、C、D組雞飼料中分別混合了50mg/kg體重、100mg/kg體重和150mg/kg體重的諾麗果發(fā)酵液。

1.1.2 試驗(yàn)藥物

諾麗酵素，黑色液體，含量≥90%，由海南晶樂生物技術(shù)公司提供。新城疫Ⅳ系活疫苗（Lasota株），規(guī)格：500羽份/瓶，由廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

新城疫疫苗接種，頸部皮下注射，每只雞注射0.5 ml。每日夜間清理剩料并稱重，每日上午喂料，記錄給料的重量，計(jì)算出每天各組雞的平均日采食量。在雞70、100和130日齡時(shí)，對(duì)雞稱重，記錄重量，計(jì)算各組雞的平均日增重、平均日采食量和料重比。在130d時(shí)采集每只雞的抗凝血5ml，用高速離心機(jī)（12000 r/min）離心，測(cè)定各組雞血清中的NDV抗體效價(jià)和細(xì)胞因子；再將雞處死，立即完全剝離雞的胸腺、脾臟和法氏囊，用干凈的濾紙吸凈這些免疫器官表面的污物，用電子天平準(zhǔn)確稱重，把每個(gè)器官的重量記錄下來，與雞的編號(hào)一一對(duì)應(yīng)。按照以下公式分別計(jì)算胸腺、法氏囊和脾臟的免疫器官指數(shù)。計(jì)算公式：免疫器官指數(shù)=免疫器官濕重/雞的體重×100%。測(cè)定NDV抗體效價(jià)的方法：采用微量血凝抑制試驗(yàn)（HI）來檢測(cè)血清中的抗NDV血凝抑制抗體的效價(jià)。細(xì)胞因子的測(cè)定方法：用ELISA雙抗夾心法，檢測(cè)各組文昌雞血清中的IL-2、IL-4、IFN-γ的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 諾麗酵素對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能的影響

由表1可知，70d時(shí)4組雞的平均只重很接近，到130d時(shí)，A組的平均日增重均低于其他3組；A組的料重比均高于其他3組；D組平均日增重最大，但是C組的料重比最低，單位體重增重所耗費(fèi)的飼料最少，養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益最高。結(jié)果表明：諾麗酵素能有效地促進(jìn)文昌雞的生長(zhǎng)發(fā)育，節(jié)省飼料，縮短了生長(zhǎng)期，獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益。

表1 諾麗酵素對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 諾麗酵素對(duì)文昌雞免疫器官指數(shù)的影響

由表2可知，C組的法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均高于其他3組，A組的法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均低于其他3組。結(jié)果表明：諾麗酵素能有效地刺激文昌雞免疫器官指數(shù)提升，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育成熟。

表2 諾麗酵素對(duì)文昌雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 諾麗酵素對(duì)文昌雞血清中的細(xì)胞因子水平的影響

由表3可知，C組IFN-γ、IL-2、IL-4的濃度均高于A、B、D組；A組IFN-γ、IL-2、IL-4的濃度均低于B、C、D組。結(jié)果表明：諾麗酵素能有效刺激文昌雞體內(nèi)產(chǎn)生較高的細(xì)胞因子濃度，反映出雞的免疫功能增強(qiáng)。

表3 諾麗酵素對(duì)文昌雞血清中的細(xì)胞因子水平的影響

2.4 諾麗酵素對(duì)文昌雞NDV抗體效價(jià)的影響

由表4可知，C組的NDV抗體效價(jià)均高于A、B、D組；A組的NDV抗體效價(jià)均低于B、C、D組。結(jié)果表明，諾麗酵素與NDV La Sota株弱毒苗合用能提高文昌雞抗NDV抗體效價(jià)，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，增強(qiáng)疫苗的免疫原性，與該疫苗有協(xié)同作用。

表4 諾麗酵素對(duì)文昌雞NDV抗體效價(jià)的影響

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)日糧中添加100mg/kg體重的諾麗酵素時(shí)，文昌雞表現(xiàn)出的生長(zhǎng)速度最快，綜合料肉比最低，表明該比例的諾麗酵素添加，能有效降低飼料消耗，提高養(yǎng)雞的經(jīng)濟(jì)效益。.

胸腺、法氏囊和脾臟是文昌雞的非常重要的免疫器官，免疫應(yīng)答主要依靠他們完成，免疫器官指數(shù)的數(shù)值多少與文昌雞的免疫性能高低成正比。Rivas等[15]證實(shí)了胸腺、法氏囊及脾臟的重量大小與雞的免疫功能強(qiáng)弱成正比，免疫器官的重量與動(dòng)物機(jī)體免疫應(yīng)答的功能強(qiáng)弱和抵抗外來病原微生物侵襲的本領(lǐng)密切相關(guān)，當(dāng)免疫器官指數(shù)值增大，表明動(dòng)物體內(nèi)的體液免疫和細(xì)胞免疫功能提升，反之，免疫功能則降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3種不同劑量的諾麗酵素添加到日糧中均可有效使文昌雞的胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)變大，使文昌雞的免疫功能增強(qiáng)，抵抗病原微生物入侵的能力增加。

機(jī)體免疫應(yīng)答時(shí)，抗原刺激外周T淋巴細(xì)胞，使其發(fā)育成各種不同功能的細(xì)胞，這些細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子，干擾細(xì)胞的介導(dǎo)免疫，調(diào)節(jié)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答[16]。Th1細(xì)胞可以產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ，細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ能輔助T淋巴細(xì)胞活化、增殖、分化和成熟為免疫效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)抗原特異性識(shí)別和結(jié)合，產(chǎn)生免疫效應(yīng)。Th2細(xì)胞可以產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-4，細(xì)胞因子IL-4可以促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和成熟為抗體分泌的細(xì)胞。這些細(xì)胞因子的濃度高低與動(dòng)物機(jī)體免疫功能強(qiáng)弱成正比。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3種不同劑量的諾麗酵素均可明顯提高文昌雞血清中IFN-γ、IL-2、IL-4的濃度，說明諾麗酵素對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫均有的促進(jìn)作用。

抗體水平高低與體液免疫功能成正比，其作用是為機(jī)體抵御、清除和滅活入侵的病原微生物?？贵w和特定的病原微生物結(jié)合，使巨噬細(xì)胞能識(shí)別、吞噬、清除它們[17]。日糧中添加諾麗酵素后，能顯著提高文昌雞體內(nèi)的NDV抗體的滴度，接種后能快速誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，3個(gè)劑量組的抗體滴度均明顯高于空白對(duì)照組，表明諾麗酵素與疫苗合用能加強(qiáng)機(jī)體的體液免疫功能。

藥物呈現(xiàn)的效果與給藥劑量息息相關(guān)，藥物的量效關(guān)系通常是一道坡度線，大多數(shù)藥物在較少的劑量范圍內(nèi)，藥效與藥量多少呈正比，藥物劑量過小就沒有任何藥物效果，增加藥物劑量，藥物效果顯現(xiàn)并不斷增強(qiáng)；當(dāng)藥物劑量超過極量后，藥效不再增強(qiáng)，繼續(xù)增加劑量，毒性反應(yīng)增強(qiáng)，藥效不斷降低[18]。當(dāng)藥效出現(xiàn)最強(qiáng)時(shí)刻的藥物劑量，就是最優(yōu)的給藥劑量。本試驗(yàn)結(jié)果表明：文昌雞免疫器官指數(shù)、細(xì)胞因子和抗體滴度與諾麗酵素給藥的劑量成正相關(guān)，中劑量（100mg/kg）的給藥方式對(duì)文昌雞的生長(zhǎng)和免疫性能效果影響最明顯。