發(fā)酵麩皮多糖對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群及其屏障功能相關(guān)指標(biāo)的影響

王文文 王 園* 孟子琪 安曉萍 齊景偉

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)草食家畜飼料工程技術(shù)研究中心，呼和浩特 010018；3.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院動物營養(yǎng)與飼料研究所，呼和浩特 010031)

瘤胃對于反芻動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)至關(guān)重要。瘤胃微生物會將飼料中的碳水化合物和蛋白質(zhì)發(fā)酵，降解生成短鏈脂肪酸、氨基酸及維生素等物質(zhì)[1-2]。這些營養(yǎng)物質(zhì)通過瘤胃上皮被吸收，為機(jī)體供能[3]。瘤胃上皮除具有吸收代謝營養(yǎng)物質(zhì)的作用外，還具有阻止細(xì)菌有害代謝產(chǎn)物(組胺、脂多糖)通過上皮細(xì)胞入血、保護(hù)瘤胃的作用[4-5]。因此，通過營養(yǎng)手段調(diào)控瘤胃菌群結(jié)構(gòu)和瘤胃上皮屏障功能對改善瘤胃內(nèi)環(huán)境和維持瘤胃健康具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，功能性多糖在調(diào)控瘤胃菌群結(jié)構(gòu)和改善瘤胃發(fā)酵方面有積極作用。李穎[6]研究表明，猴頭菇多糖可通過調(diào)控瘤胃菌群結(jié)構(gòu)和與酸代謝相關(guān)的酶活性進(jìn)而緩解山羊瘤胃酸中毒，維持瘤胃健康。發(fā)酵麩皮多糖(fermented wheat bran polysaccharides，F(xiàn)WBPs)作為一種功能性多糖，具有抗氧化[7]、抗炎[8]及調(diào)節(jié)免疫[9]等多種作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)WBPs具有調(diào)節(jié)大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)和提高腸道屏障功能的作用[9-10]。同時，F(xiàn)WBPs還可以優(yōu)化杜寒雜交肉羊瘤胃內(nèi)環(huán)境，改善瘤胃發(fā)酵功能[11]。然而，目前關(guān)于FWBPs的研究主要集中于單胃動物上，其對反芻動物瘤胃菌群結(jié)構(gòu)及瘤胃上皮屏障影響的研究未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)擬研究FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃組織緊密連接蛋白和細(xì)胞因子基因表達(dá)及瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響，以期為FWBPs應(yīng)用于反芻動物生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 FWBPs的制備

參照史俊祥[12]的FWBPs制備方法。以小麥麩皮為原料，配以豆粕粉、玉米粉，三者比例為80.46∶9.32∶10.22；使用枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌混菌發(fā)酵，二者比例為6.7∶3.3；接種量10.4%，添加0.1%尿素，發(fā)酵溫度35.4 ℃，時間52.7 h，料水比1∶1。發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵底物45 ℃烘干48 h，粉碎。與蒸餾水1∶20混合后80 ℃水浴提取30 min，離心棄沉淀，上清液加入4倍體積的95%乙醇，靜置過夜，離心收集沉淀，干燥沉淀后即為FWBPs，經(jīng)測定，其含量可達(dá)130.21 mg/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取健康且體重[(21.85±0.64) kg]相近的6周齡杜寒雜交肉羊21只，隨機(jī)分為3個組，每組7只羊。對照組、低劑量組和高劑量組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0、200、400 mg/kg BW的FWBPs?；A(chǔ)飼糧根據(jù)《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 816—2004)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。基礎(chǔ)飼糧為全混合顆粒飼料，直徑為6 mm，長度為10 mm。預(yù)試期14 d，正試期56 d。試驗(yàn)在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地海流圖牧場進(jìn)行，常規(guī)飼養(yǎng)管理，每日定時飼喂(08:00和17:00)，每天根據(jù)前1天的剩料量重新調(diào)整飼喂量，保證料槽中每天有10%左右的剩料，自由飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，屠宰所有羊只，采集未過濾瘤胃食糜2 mL和瘤胃組織，液氮速凍，并將樣品存于-80 ℃冰箱中待測。

1.4 瘤胃組織緊密連接蛋白和細(xì)胞因子基因表達(dá)的測定

采用Trizol法提取瘤胃組織總RNA。經(jīng)微孔板分光光度計(jì)測得260和280 nm吸光度比值為1.8～2.0，瓊脂糖凝膠電泳法評價RNA質(zhì)量。參照FastQant RT Kit(with gDNase)說明書分別將各樣品的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，并以此為模板，使用表2所列的引物，按照SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)說明書進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR檢測。以β-肌動蛋白(β-actin)為內(nèi)參，干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白細(xì)胞介素-12(interleukin-12，IL-12)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、閉合小環(huán)蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)、閉鎖蛋白(occludin)、閉合蛋白-1(claudin-1)及閉合蛋白-4(claudin-4)的mRNA相對表達(dá)量采用2-△△Ct法進(jìn)行計(jì)算。引物由生工生物(上海)股份有限公司合成，基因引物序列信息見表2。

表2 基因引物序列信息Table 2 Information of primer sequences of genes

1.5 Illumina-Nova測序分析

1.5.1 瘤胃食糜總DNA的提取、擴(kuò)增及測序

1.5.2 生物信息學(xué)分析

測序所得的原始序列，首先使用Flash V1.2.7軟件進(jìn)行拼接，參照Qiime V1.7.0軟件進(jìn)行質(zhì)量控制，得到有效序列。利用Uparse v7.0.1001軟件對所有樣品的有效序列以97%的一致性進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic unit，OTU)聚類，用Mothur軟件與SILVA的SSUrRNA數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋分析(設(shè)定閾值為0.8～1.0)，在門水平、屬水平下統(tǒng)計(jì)每個樣品的菌群組成。各樣品的數(shù)據(jù)經(jīng)過均一化處理后，采用Qiime軟件進(jìn)行Alpha多樣性和Beta多樣性分析。通過線性判別分析(LDA)和線性判別分析效應(yīng)大小(LEfSe)分析找出導(dǎo)致組間菌群變化的生物標(biāo)志物。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

基因表達(dá)和菌群Alpha多樣性指標(biāo)數(shù)據(jù)使用SAS 9.2軟件進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行Duncan氏法多重比較檢驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。菌群相對豐度數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0進(jìn)行非參數(shù)t檢驗(yàn)分析，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃組織中緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

由表3可知，與對照組相比，低劑量組和高劑量組肉羊瘤胃組織中occludin、claudin-1和claudin-4的mRNA相對表達(dá)量顯著增加(P<0.05)，且低劑量組和高劑量組之間無顯著差異(P>0.05)；此外，高劑量組肉羊瘤胃組織中ZO-1的mRNA相對表達(dá)量顯著增加(P<0.05)。

表3 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃組織中緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響Table 3 Effects of FWBPs on expression of tight junction protein gene in rumen tissue of Dorper×thin-tailed Han crossbred meat lambs

2.2 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃組織中細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響

由表4可知，各組之間肉羊瘤胃組織中IL-12和TNF-α的mRNA相對表達(dá)量無顯著差異(P>0.05)。高劑量組肉羊瘤胃組織中IFN-γ和IL-6的mRNA相對表達(dá)量顯著高于對照組和低劑量組(P<0.05)。

表4 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃組織中細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響Table 4 Effects of FWBPs on expression of cytokine gene in rumen tissue of Dorper×thin-tailed Han crossbred meat lambs

2.3 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響

2.3.1 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群Alpha多樣性指數(shù)的影響

由表5可知，對照組、低劑量組和高劑量組瘤胃菌群的測序覆蓋率為99.87%～99.88%。各組之間肉羊瘤胃菌群觀測物種數(shù)、Chao1指數(shù)及ACE指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。高劑量組肉羊瘤胃菌群Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)顯著高于對照組和低劑量組(P<0.05)。

表5 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群Alpha多樣性指數(shù)的影響Table 5 Effects of FWBPs on rumen microbiota Alpha diversity indexes of Dorper×thin-tailed Han crossbred meat lambs

2.3.2 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群Beta多樣性的影響

由圖1可知，主成分1(PC1)的貢獻(xiàn)率為39.94%，主成分2(PC2)的貢獻(xiàn)率為25.75%。高劑量組與對照組和低劑量組瘤胃菌群結(jié)構(gòu)有一定的差異，而對照組和低劑量組瘤胃菌群結(jié)構(gòu)相似。

S3：低劑量組 low dose group；S4：高劑量組 high dose group；S5：對照組 control group。下圖同 the same as below。圖1 主成分分析圖Fig.1 PCA diagram

2.3.3 FWBPs對杜寒雜交肉羊瘤胃菌群相對豐度的影響

由表6可知，與對照組相比，低劑量組肉羊瘤胃菌群中螺旋菌門(Spirochaetota)的相對豐度顯著增加(P<0.05)；高劑量組肉羊瘤胃菌群中變形菌門(Proteobacteria)的相對豐度顯著降低(P<0.05)，擬桿菌門(Bacteroidota)的相對豐度顯著增加(P<0.05)。高劑量組肉羊瘤胃菌群中Proteobacteria的相對豐度極顯著低于低劑量組(P<0.01)，Spirochaetota的相對豐度顯著低于低劑量組(P<0.05)；而Bacteroidota的相對豐度極顯著高于低劑量組(P<0.01)。

表6 瘤胃菌群在門水平的顯著性分析Table 6 Significance analysis of rumen microbiota at phylum level %

由表7可知，與對照組相比，低劑量組肉羊瘤胃菌群中琥珀酸弧菌屬(Succinivibrio)的相對豐度顯著增加(P<0.05)；高劑量組肉羊瘤胃菌群中琥珀酸弧菌科_UCG-001(Succinivibrionaceae_UCG-001)的相對豐度極顯著降低(P<0.01)，解琥珀酸菌屬(Succiniclasticum)的相對豐度顯著降低(P<0.05)，新月形單胞菌屬(Selenomonas)的相對豐度顯著增加(P<0.05)。高劑量組肉羊瘤胃菌群中韋榮球菌科_UCG-001(Veillonellaceae_UCG-001)和Selenomonas的相對豐度極顯著高于低劑量組(P<0.01)，而Succinivibrionaceae_UCG-001的相對豐度極顯著低于低劑量組(P<0.01)。

表7 瘤胃菌群在屬水平的顯著性分析Table 7 Significance analysis of rumen microbiota at genus level %

LEfSe分析可以實(shí)現(xiàn)多個分組之間的比較，從而找到組間在相對豐度上有顯著差異且影響力較大的標(biāo)記物種。由圖2可知，當(dāng)LDA閾值設(shè)定為4.0時，柔膜菌目(Erysipelotrichales)、氨基酸球菌科(Acidaminococcaceae)、氨基酸球菌目(Acidaminococcales)、Succiniclasticum在對照組中富集；琥珀酸弧菌科(Succinivibrionaceae)、氣單胞菌目(Aeromonadales)、γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)、Proteobacteria、Succinivibrionaceae_UCG-001在低劑量組中富集；Bacteroidota、擬桿菌綱(Bacteroidia)、擬桿菌目(Bacteroidales)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)、新月形單胞菌科(Selenomonadaceae)、棲瘤胃普雷沃氏菌(Prevotella_ruminicola)、Selenomonas、反芻獸月形單胞菌(Selenomonas_ruminantium)、Veillonellaceae_UCG-001在高劑量組中富集。

Erysipelotrichales：柔膜菌目；Acidaminococcaceae：氨基酸球菌科；Acidaminococcales：氨基酸球菌目；Succiniclasticum：解琥珀酸菌屬；Bacteroidia：擬桿菌綱；Bacteroidales：擬桿菌目；Prevotellaceae：普雷沃氏菌科；Selenomonadaceae：新月形單胞菌科；Prevotella_ruminicola：棲瘤胃普雷沃氏菌；Selenomonas：新月形單胞菌屬；Selenomonas_ruminantium：反芻獸月形單胞菌；Veillonellaceae_UCG-001：韋榮球菌科_UCG-001；Succinivibrionaceae：琥珀酸弧菌科；Aeromonadales：氣單胞菌目；Gammaproteobacteria：γ-變形菌綱；Proteobacteria：變形菌門；Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科_UCG-001。圖2 瘤胃菌群LDA判別柱形圖Fig.2 LDA discrimination column of rumen microbiota

3 討 論

瘤胃上皮作為反芻動物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的重要場所和抵御病原微生物的屏障，其生理結(jié)構(gòu)的完整對保持瘤胃健康具有重要意義。在集約化的養(yǎng)殖模式下，適應(yīng)高精料飼糧對肉羊瘤胃微生物和瘤胃上皮是一個巨大的挑戰(zhàn)。瘤胃微生物在對高精料飼糧進(jìn)行發(fā)酵時，會產(chǎn)生大量有機(jī)酸，降低瘤胃pH，殺死革蘭氏陰性菌并釋放脂多糖，改變緊密連接蛋白的表達(dá)和分布，從而破壞瘤胃屏障并引發(fā)瘤胃上皮組織的炎癥反應(yīng)[13-14]。李碧波[15]研究發(fā)現(xiàn)，高精料飼糧會降低絨山羊瘤胃pH，增加脂多糖含量，降低瘤胃黏膜ZO-1、occludin、claudin-1及claudin-4的mRNA相對表達(dá)量，并提高白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、TNF-α和白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)的mRNA相對表達(dá)量。緊密連接蛋白(ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-4)是評價瘤胃上皮屏障功能的重要指標(biāo)，其mRNA相對表達(dá)量的下降代表瘤胃屏障功能受損。IFN-γ、IL-6、IL-1β、IL-10和TNF-α是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的重要細(xì)胞因子，其中IFN-γ、IL-6、IL-1β和TNF-α為促炎細(xì)胞因子，IL-10為抗炎細(xì)胞因子[16]。正常情況下，這些細(xì)胞因子會誘導(dǎo)并激活免疫細(xì)胞前往感染部位，發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用。但是，當(dāng)機(jī)體內(nèi)促炎細(xì)胞因子大量產(chǎn)生時就會引發(fā)炎癥反應(yīng)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧添加200 mg/kg BW的FWBPs可增加肉羊瘤胃組織中occludin、claudin-1及claudin-4的mRNA相對表達(dá)量，而添加400 mg/kg BW的FWBPs可增加肉羊瘤胃組織中ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-4的mRNA相對表達(dá)量。由此可推斷，F(xiàn)WBPs可通過增加ZO-1、occludin、claudin-1和claudin-4的mRNA相對表達(dá)量來提高肉羊瘤胃屏障功能。有趣的是，F(xiàn)WBPs也提高了肉羊瘤胃組織中IFN-γ和IL-6的mRNA相對表達(dá)量。瘤胃中革蘭氏陰性菌大量繁殖釋放脂多糖是導(dǎo)致瘤胃炎癥的主要原因[14]。Proteobacteria中含有很多產(chǎn)脂多糖的革蘭氏陰性菌，如大腸桿菌(Escherichiacoli)、假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas)和希瓦氏菌屬(Shewanella)等[17]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加400 mg/kg BW的FWBPs會降低瘤胃食糜中Proteobacteria的相對豐度。由此推測，肉羊瘤胃組織中IFN-γ和IL-6的mRNA相對表達(dá)量增加可能與瘤胃炎癥無關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

飼料添加劑主要通過調(diào)控瘤胃內(nèi)環(huán)境，穩(wěn)定瘤胃pH，減少乳酸產(chǎn)量，增強(qiáng)纖維消化能力，進(jìn)而改善瘤胃健康狀況[18]。調(diào)控瘤胃內(nèi)環(huán)境的關(guān)鍵是調(diào)節(jié)瘤胃微生物區(qū)系，而瘤胃中細(xì)菌的數(shù)量和種類最多。因此，本文主要討論瘤胃細(xì)菌。已有研究表明，攝食功能性多糖可改變瘤胃菌群多樣性和相對豐度。金鹿等[19]研究發(fā)現(xiàn)，沙蒿多糖組合制劑可改變?yōu)┭蛄鑫妇航Y(jié)構(gòu)，提高Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)，增加了瘤胃菌群的多樣性和豐富度，有利于促進(jìn)瘤胃健康。與上述試驗(yàn)結(jié)果相似，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加400 mg/kg BW的FWBPs顯著提高了肉羊瘤胃菌群Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)；在門水平上，飼糧添加200 mg/kg BW的FWBPs可增加瘤胃菌群中Spirochaetota的相對豐度；添加400 mg/kg BW的FWBPs可增加瘤胃菌群中Bacteroidota的相對豐度，并降低Proteobacteria的相對豐度。此外，高劑量組瘤胃菌群中Proteobacteria和Spirochaetota的相對豐度顯著低于低劑量組，而Bacteroidota的相對豐度顯著高于低劑量組。與本試驗(yàn)結(jié)果相似，在蕎麥秸稈飼糧中添加甘露寡糖可提高灘羊瘤胃菌群中Bacteroidota和厚壁菌門(Firmicutes)的相對豐度，降低Proteobacteria的相對豐度[20]。Han等[21]研究顯示，高精料飼糧會導(dǎo)致瘤胃中放線菌門(Actinobacteriota)和Proteobacteria的相對豐度增加，而Bacteroidota的相對豐度下降。Proteobacteria中的含有很多產(chǎn)脂多糖的革蘭氏陰性菌，其相對豐度的增加會導(dǎo)致脂多糖增加，破壞瘤胃屏障，誘發(fā)瘤胃炎癥[14]。Bacteroidota基因組中含有較多編碼糖苷水解酶和多糖裂解酶的基因，這2類酶能降解纖維類物質(zhì)[22]。基于上述研究推測，飼糧添加400 mg/kg BW的FWBPs可能通過增加Bacteroidota的相對豐度和降低Proteobacteria的相對豐度來提高纖維物質(zhì)的消化和減少脂多糖釋放，進(jìn)而改善瘤胃健康狀況。在屬水平上，與對照組相比，低劑量組瘤胃菌群中Succinivibrio的相對豐度增加；而高劑量組瘤胃菌群中Selenomonas的相對豐度增加，Succinivibrionaceae_UCG-001和Succiniclasticum的相對豐度減少。高劑量組瘤胃菌群中Veillonellaceae_UCG-001和Selenomonas的相對豐度高于低劑量組，而Succinivibrionaceae_UCG-001的相對豐度低于低劑量組。與本研究結(jié)果不同，甘露寡糖可增加灘羊瘤胃菌群中普氏菌屬_1(Prevotella_1)、理研菌科_RC9_腸道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)和Succiniclasticum的相對豐度，這可能是由于添加多糖種類或羊品種不同導(dǎo)致的[20]。

LEfSe分析的結(jié)果也顯示，Succiniclasticum在對照組中富集；Succinivibrionaceae、Proteobacteria和Succinivibrionaceae_UCG-001在低劑量組中富集；Bacteroidota、Prevotella_ruminicola、Selenomonas、Selenomonas_ruminantium、Veillonellaceae_UCG-001在高劑量組中富集。Succiniclasticum主要以淀粉為發(fā)酵底物，也能發(fā)酵纖維或纖維二糖，主要代謝產(chǎn)物是琥珀酸和乙酸[23]。本試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼糧中玉米(含70%淀粉)比例較高，會促使Succiniclasticum大量繁殖，使其成為對照組中的標(biāo)志物種。Succinivibrionaceae_UCG-001可以發(fā)酵多種糖類，主要的代謝終產(chǎn)物是乙酸、琥珀酸和乳酸[24]。當(dāng)給反芻動物飼喂大量可發(fā)酵的碳水化合物時，瘤胃中通過糖酵解生成乳酸的速率遠(yuǎn)大于其被利用的速率，導(dǎo)致乳酸積累，瘤胃pH急速下降，造成酸中毒。因此，低劑量組肉羊瘤胃菌群中Succinivibrionaceae_UCG-001的相對豐度增加可能會造成乳酸積累，且Proteobacteria的相對豐度增加也可能會造成脂多糖的大量生成，損傷瘤胃。研究發(fā)現(xiàn)，活性干酵母可以通過降低荷斯坦奶牛瘤胃中Succinivibrionaceae_UCG-001的相對豐度，進(jìn)而減少高精料條件下瘤胃乳酸的產(chǎn)生量，維持瘤胃pH的穩(wěn)定[25]。Bacteroidota中的Prevotella_ruminicola是一種降解菌，在蛋白質(zhì)、淀粉、木聚糖和果膠的降解過程中發(fā)揮著重要作用[26-27]，其相對豐度的增加有利于提高肉羊?qū)I養(yǎng)物質(zhì)的消化。Selenomonas中的Selenomonas_ruminantium是瘤胃中非常重要的一種乳酸利用菌，其比例的提高有利于減低瘤胃乳酸累積，穩(wěn)定瘤胃pH[28]。Veillonellaceae_UCG-001也是一種乳酸利用菌，可以發(fā)酵乳酸、丙酮酸、延胡索酸、L-蘋果酸，但不能發(fā)酵糖類物質(zhì)[26]。有學(xué)者認(rèn)為瘤胃微生物區(qū)系紊亂和乳酸代謝菌菌群比例失衡是導(dǎo)致瘤胃中乳酸積累，誘發(fā)瘤胃酸中毒的直接原因[29]。本試驗(yàn)中，高劑量組肉羊瘤胃菌群中Veillonellaceae_UCG-001和Selenomonas的相對豐度增加，這有利于減少乳酸積累，穩(wěn)定瘤胃pH。本課題組前期研究結(jié)果也顯示，飼糧添加400 mg/kg BW的FWBPs可穩(wěn)定肉羊瘤胃pH，瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸含量較對照組減少了19%[11]。基于上述結(jié)果推測，飼糧添加400 mg/kg BW的FWBPs可能通過調(diào)控杜寒雜交肉羊瘤胃中乳酸產(chǎn)生菌(Succinivibrionaceae_UCG-001)和乳酸利用菌(Veillonellaceae_UCG-001和Selenomonas)的相對豐度，減少乳酸累積，穩(wěn)定瘤胃pH，改善瘤胃健康狀況。

4 結(jié) 論

① 飼糧添加200和400 mg/kg BW的FWBPs均能提高杜寒雜交肉羊瘤胃組織中緊密連接蛋白(occludin、claudin-1、claudin-4)的mRNA相對表達(dá)量，添加400 mg/kg BW的FWBPs可提高細(xì)胞因子(IFN-γ和IL-6)的mRNA相對表達(dá)量。

② 飼糧添加FWBPs可影響瘤胃菌群中Succinivibrio、Selenomonas、Veillonellaceae_UCG-001、Succinivibrionaceae_UCG-001和Succiniclasticum的相對豐度。

③ 綜上所述，F(xiàn)WBPs能夠提高杜寒雜交肉羊瘤胃組織中緊密連接蛋白和細(xì)胞因子的mRNA相對表達(dá)量，調(diào)控瘤胃菌群結(jié)構(gòu)，有利于維持瘤胃健康。