壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量及脂/骨代謝的影響

楊珊珊 陳紅瓊 陳瑤 郁潔 羅堅(jiān) 周薇 彭振 雷曉明

〔摘要〕 目的 探討壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量及脂/骨代謝的影響。方法 選用健康雌性SD大鼠30只，隨機(jī)分為空白（Blank）組、假手術(shù)（Sham）組、模型（OVX）組、壯骨止痛膠囊（ZGZTC）組和雌激素（EV）組，每組6只。OVX組、ZGZTC組以及EV組均摘除雙側(cè)卵巢，Sham組僅在卵巢周圍切除相應(yīng)體積的脂肪。ZGZTC組（567 mg/kg）、EV組（0.21 mg/kg）灌胃相應(yīng)藥物，Sham組和OVX組灌胃相應(yīng)體積生理鹽水，Blank組不做處理。每周檢測(cè)體質(zhì)量，干預(yù)12 周后用顯微CT檢測(cè)大鼠右股骨骨密度（bone mineral density， BMD），掃描電鏡分析左股骨骨小梁超微結(jié)構(gòu)，HE染色評(píng)價(jià)脛骨組織微結(jié)構(gòu)的變化，ELISA法測(cè)定血清雌激素（estrogen， E2）、脂聯(lián)素（adiponectin， ADP）、瘦素（leptin， LEP）、骨堿性磷酸酶（bone alkaline phosphatase， BALP）、骨鈣素（bone-Gla-protein， BGP）、I型前膠原N端前肽（N-terminal propeptide of type I procollagen， PINP）水平。結(jié)果 與Blank組和Sham組比較，OVX組大鼠BMD顯著降低（Ρ<0.001），骨小梁孔隙率增加，骨小梁厚度變薄，間距增大，內(nèi)部骨微結(jié)構(gòu)紊亂，BALP及ADP水平顯著升高（Ρ<0.05，Ρ<0.01，Ρ<0.001）。與Blank組比較，OVX組大鼠E2水平顯著下降（Ρ<0.05）。與OVX組比較，ZGZTC組大鼠脛骨、股骨骨小梁形態(tài)結(jié)構(gòu)改善，骨髓腔內(nèi)脂肪空泡面積及數(shù)目減少（Ρ>0.05），體質(zhì)量降低（Ρ<0.001），血清E2水平和PINP水平顯著升高（Ρ<0.05）， BALP水平顯著降低（Ρ<0.01）;其血清LEP水平升高，ADP、BGP水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ρ>0.05）。結(jié)論 壯骨止痛膠囊可能通過(guò)調(diào)節(jié)血清E2、脂肪因子ADP、LEP水平，抑制成脂分化過(guò)度，促進(jìn)成骨分化，減少骨髓脂肪堆積，抑制過(guò)度骨代謝，改善骨小梁微結(jié)構(gòu)，防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，并維持體質(zhì)量穩(wěn)定，減少骨折的發(fā)生。

〔關(guān)鍵詞〕 壯骨止痛膠囊;骨質(zhì)疏松癥;脂骨代謝;骨髓脂肪;掃描電鏡;骨微結(jié)構(gòu)

〔中圖分類號(hào)〕R285.5 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.01.005

〔Abstract〕 Objective To investigate the effects of Zhuanggu Zhitong Capsule on body weight and lipid/bone metabolism of ovariectomized rats. Methods 30 healthy female SD rats were randomly divided into Blank group， Sham group， OVX group， ZGZTC group and EV group， with 6 rats in each group. Bilateral ovaries were removed in OVX group， ZGZTC group and EV group， and only the corresponding volume of fat around the ovaries was removed in Sham group. ZGZTC （567 mg/kg） and EV （0.21 mg/kg） groups were intragastricted with corresponding drugs， Sham group and OVX group were intragastricted with corresponding volume of normal saline， Blank group was not treated. The body weight was measured every week. After 12 weeks of intervention， the bone mineral density （BMD） of the rat's right femur was measured by micro-CT， the ultrastructure of the trabecular bone of the left femur was analyzed by scanning electron microscope （SEM）， the changes of tibial tissue microstructure were evaluated by HE staining， ELISA method was used to determine serum estrogen （E2）， adiponectin （ADP）， leptin （LEP）， bone alkaline phosphatase （BALP）， bone-Gla-protein （BGP）， N-terminal propeptide of type I procollagen （PINP） levels. Results Compared with Blank group and Sham group， BMD of rats from OVX group was significantly decreased （Ρ<0.001）， and the porosity of bone trabecular was increased， the thickness was thinner and spacing of bone trabecular increased， the internal bone microstructure was disturbed， and the levels of BALP and ADP were significantly increased （Ρ<0.05，Ρ<0.01，Ρ<0.001）. Compared with Blank group， E2 level of rats from OVX group was significantly decreased （Ρ<0.05）. Compared with OVX group， the morphology and structure of tibia and femur trabecular bone of rats from ZGZTC group were improved， and the area and number of fat cavitation in bone marrow cavity were decreased （Ρ>0.05）， body weight was decreased （Ρ<0.001）， serum E2 and PINP levels were significantly increased （Ρ<0.05）， and BALP level was significantly decreased （Ρ<0.01）， serum LEP level was increased and ADP and BGP levels were decreased， but the differences were not statistically significant （Ρ>0.05）. Conclusion Zhuanggu Zhitong Capsule may inhibit excessive adipogenicdifferentiation， promote osteogenic differentiation， reduce bone marrow fat accumulation， inhibit excessive bone metabolism， improve bone trabecular microstructure， prevent and cure postmenopausal osteoporosis， maintain stable body mass and reduce the occurrence of fractures by regulating serum E2， adipogenic factor ADP and LEP levels.

〔Keywords〕 Zhuanggu Zhitong Capsule; osteoporosis; lipid bone metabolism; bone marrow fat; scanning electron microscope; bone microstructure

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis， OP）是最常見(jiàn)的骨骼疾病，是一種以骨量低、骨組織微結(jié)構(gòu)破壞導(dǎo)致骨脆性增加、易發(fā)生骨折為特征的全身性骨病，可發(fā)生于任何年齡，但多見(jiàn)于絕經(jīng)后女性和老年男性[1]。骨髓微環(huán)境的變化與OP的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，骨髓微環(huán)境主要由骨髓基質(zhì)、微血管、成骨細(xì)胞（osteoblast，OB）、破骨細(xì)胞（osteoclast， OC）、脂肪細(xì)胞、造血細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子等組成，是骨吸收和骨重建的重要場(chǎng)所[2]。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow

mesenchymal stem cells， BMSCs）向OB和脂肪細(xì)胞分化紊亂可能是導(dǎo)致OP的重要原因，形成了“骨髓脂肪細(xì)胞過(guò)?！睂?dǎo)致OP的學(xué)說(shuō)[3]，因而OP也被稱為“骨骼的肥胖癥”[4]。在生理狀態(tài)下，OB、成脂細(xì)胞平等競(jìng)爭(zhēng)地從BMSCs分化形成;而在衰老、絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（postmenopausal osteoporosis， PMOP）等狀態(tài)下，BMSCs向成脂細(xì)胞分化增強(qiáng)，OB分化減弱，從而導(dǎo)致骨髓脂肪堆積、骨量減少等病理性改變[5-6]。PMOP狀態(tài)下骨量與骨髓脂肪呈負(fù)相關(guān)，且骨髓脂肪作為參與調(diào)節(jié)能量與內(nèi)分泌功能的組織可直接或間接抑制成骨分化與骨形成，促進(jìn)破骨分化與骨吸收，從而影響骨代謝[7]。因此，通過(guò)改善其成骨-成脂分化的失衡，調(diào)節(jié)脂/骨代謝紊亂是防治PMOP的有效途徑之一。

壯骨止痛膠囊是湖南省名中醫(yī)莫新民教授的經(jīng)驗(yàn)方，已獲得國(guó)家新藥證書(shū)（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20050125），全方由淫羊藿、補(bǔ)骨脂、枸杞子、女貞子、狗脊、骨碎補(bǔ)、懷牛膝7味中藥組成，對(duì)PMOP具有良好防治作用。但壯骨止痛膠囊發(fā)揮抗OP的作用是否與調(diào)節(jié)脂/骨代謝有關(guān)，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬觀察壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量及脂/骨代謝的影響，并探討此影響在抗OP中發(fā)揮的作用。

1 材料

1.1 ?動(dòng)物

SPF級(jí)雌性SD大鼠30只，7周齡，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)：SYXK（湘）2019-0009。溫度（22±2） ℃，濕度（50±10）%，12 h晝夜循環(huán)照明，分籠飼養(yǎng)。每日定時(shí)清洗籠舍，大鼠能自由攝食及飲水。飼料為標(biāo)準(zhǔn)普通飼料（湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），定期更換墊料。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)的要求，符合3R原則。

1.2 ?藥品與主要試劑

壯骨止痛膠囊（四川美大康藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：Z20050118，0.45 g/粒）;戊酸雌二醇（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號(hào)：J20171038，1 mg/片）;戊巴比妥鈉（美國(guó)默克公司，批號(hào)：20200422）;青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號(hào)：F9102109）;電鏡固定液（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G1102）;雌激素（estrogen， E2，批號(hào)：C0317020308）、瘦素（leptin， LEP，批號(hào)：Z12036492）、骨堿性磷酸酶（bone alkaline phosphatase， BALP，批號(hào)：Z08036494）、脂聯(lián)素（adiponectin， ADP，批號(hào)：Z07036493）、骨鈣素（bone-Gla-protein， BGP，批號(hào)：Z07036125）、I型前膠原N端前肽（N-terminal propeptide of type I procollagen， PINP，批號(hào)：Z11036497）ELISA試劑盒均購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司。

1.3 ?主要儀器

Heraeus Fresco 21型微量冷凍離心機(jī)（德國(guó)Thermo Fisher科技公司）;991型超低溫冰箱（賽默飛世爾科技有限公司）;MB-530型多功能酶標(biāo)儀（深圳匯松科技發(fā)展有限公司）;HM325型石蠟切片機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司）;BA410E型顯微鏡（麥克奧迪電氣股份有限公司）;K850型臨界點(diǎn)干燥儀（英國(guó)Quorum公司）;MC1000型離子濺射儀（日立公司）;SU8100型掃描電子顯微鏡（日立公司）;Quantum GX型小動(dòng)物顯微CT（珀金埃爾默股份有限公司）。

2 方法

2.1 ?動(dòng)物分組及給藥

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開(kāi)始試驗(yàn)，遵循隨機(jī)原則，將30只SD大鼠分為空白（Blank）組、假手術(shù)（Sham）組、模型（OVX）組、雌激素（EV）組、壯骨止痛膠囊（ZGZTC）組，每組6只。OVX組、EV組、ZGZTC組均摘除雙側(cè)卵巢，Sham組僅在卵巢周圍切除相應(yīng)體積的脂肪。

各組均從術(shù)后1周開(kāi)始給藥，每天灌胃1次，連續(xù)12周。給藥量按照70 kg成人與0.2 kg大鼠體表面積等效換算（成人劑量×70 kg×0.018/0.2 kg）。Sham組和OVX組每天灌胃相應(yīng)體積生理鹽水，ZGZTC組（567 mg/kg）、EV組（0.21 mg/kg）灌胃相應(yīng)藥物，Blank組不做處理。

2.2 ?PMOP大鼠模型的建立

采用國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的雌性大鼠PMOP模型[8-9]。用2%戊巴比妥鈉（0.2 mL/100 g體質(zhì)量）麻醉，無(wú)菌條件下摘除大鼠雙側(cè)卵巢，Sham組僅在卵巢周圍切除相應(yīng)體積的脂肪，術(shù)后連續(xù)3 d大腿肌肉注射青霉素鈉，每只大鼠4萬(wàn)U/d，術(shù)后5 d連續(xù)觀察大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片，發(fā)現(xiàn)模型大鼠細(xì)胞涂片以白細(xì)胞為主，提示造模成功[10]。5 d后拆線，每周測(cè)量體質(zhì)量，12周后麻醉，取股骨、脛骨、血清。

2.3 ?顯微CT檢測(cè)大鼠股骨骨密度（bone mineral

density， BMD）

應(yīng)用小動(dòng)物顯微CT評(píng)價(jià)大鼠右側(cè)股骨遠(yuǎn)端的微觀結(jié)構(gòu)。感興趣區(qū)域（region of interest， ROI）包括從生長(zhǎng)板最高點(diǎn)以下1 mm位置開(kāi)始往下數(shù)40層的骨小梁平掃圖片。對(duì)ROI區(qū)三維圖像進(jìn)行定性和定量分析BMD。掃描模式為：掃描電壓90 kV，掃描電流為80 μA，掃描時(shí)間為14 min，旋轉(zhuǎn)角度360°，分辨率為18 μm。掃描完成后采用Analyze 12.0分析。

2.4 ?掃描電鏡觀察股骨骨小梁超微結(jié)構(gòu)

剖取左側(cè)完整的股骨，去除上面附著的肌肉組織，保留骨膜，使用0.1%磷酸緩沖液進(jìn)行清洗后在2.5%戊二醛溶液中進(jìn)行固定，叔丁醇梯度脫水，-10 ℃冰凍，干燥。導(dǎo)電膠固定標(biāo)本，噴金，使用掃描電子顯微鏡觀察鈦合金材料表面與孔隙內(nèi)骨組織及纖維組織生長(zhǎng)情況。

2.5 ?HE染色法檢測(cè)大鼠脛骨組織微結(jié)構(gòu)變化

剖取左側(cè)完整的脛骨，去除上面附著的肌肉組織，保留骨膜，在中性福爾馬林溶液中固定一周，隨后置于EDTA脫鈣液中浸泡兩月，保證液體完全覆蓋樣本，每周更換新的脫鈣液，液體為標(biāo)本體積的5倍。然后常規(guī)脫水，浸蠟，包埋，切片，展片，烤片，染色。通過(guò)顯微鏡拍照觀察骨小梁結(jié)構(gòu)，應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0圖像分析處理軟件測(cè)定脂肪空泡數(shù)目及面積。

2.6 ?ELISA法檢測(cè)大鼠血清激素的表達(dá)

腹腔注射2%戊巴比妥鈉（0.2 mL/100 g）麻醉，腹部切口分離腹主動(dòng)脈，用負(fù)壓采血管采血5 mL，靜置2 h，3000 r/min，離心半徑8.6 cm，離心15 min后分離血清，使用大鼠特異性試劑盒檢測(cè)血清E2、ADP、LEP、BALP、BGP、PINP水平。

2.7 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用“x±s”表示，所有資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料采用單因素方差分析，方差齊者用LSD和SNK法，方差不齊者用Tamhane’s T2或Dunnett’s T3法;不符合正態(tài)分布者，采用多個(gè)獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn)（K Independent Samples）。所有數(shù)據(jù)使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 ?壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠BMD的影響

與Blank組和Sham組比較，OVX組大鼠BMD顯著降低（P<0.001）;與OVX組比較，ZGZTC組BMD升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)圖1。

3.2 ?壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量的影響

Blank組、Sham組、ZGZTC組、EV組各組間體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與其余各組比較，OVX組體質(zhì)量顯著升高（P<0.001）。去卵巢手術(shù)后第2、3個(gè)月，各組體質(zhì)量增長(zhǎng)量均較第1個(gè)月有所降低。與Sham組比較，OVX組去卵巢手術(shù)后第二個(gè)月體質(zhì)量增長(zhǎng)顯著（P<0.05）;與OVX組比較，ZGZTC組及EV組去卵巢手術(shù)后第1、2、3個(gè)月體質(zhì)量增長(zhǎng)均減少，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)圖2。

3.3 ?壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨小梁超微結(jié)構(gòu)的影響

Blank組和Sham組骨小梁相互交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，骨小梁表面被覆的骨膠原纖維排列緊密，其走行方向與骨小梁長(zhǎng)軸方向基本一致，骨膠原纖維表面的纖絲排列緊密，呈束狀無(wú)分離現(xiàn)象，OVX組骨小梁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，骨小梁明顯變細(xì)變薄，表面凹凸不平極為粗糙，排列雜亂無(wú)章，斷裂、缺失現(xiàn)象嚴(yán)重，骨小梁表面骨膠原纖維結(jié)構(gòu)散亂、粗細(xì)不等，出現(xiàn)卷曲及斷裂現(xiàn)象，骨膠原纖維間空隙增大，骨膠原纖維的纖絲排列紊亂、粗細(xì)不均勻，出現(xiàn)退行性改變。與OVX組比較，ZGZTC組、EV組骨小梁結(jié)構(gòu)明顯增粗增厚，骨膠原纖維排列致密，但尚未恢復(fù)至正常。見(jiàn)圖3。

3.4 ?壯骨止痛膠囊對(duì)大鼠脛骨組織微結(jié)構(gòu)的影響

Blank組和Sham組脛骨組織結(jié)構(gòu)完整，骨小梁密集，粗細(xì)均勻，排列整齊，連接成網(wǎng)狀，骨髓腔較小，骨髓細(xì)胞數(shù)量豐富，脂肪細(xì)胞少;而OVX組骨髓腔明顯變大，骨小梁變細(xì)、稀疏，間隙增大，排列紊亂，結(jié)構(gòu)缺失嚴(yán)重，髓腔內(nèi)見(jiàn)大量空泡狀脂肪細(xì)胞，脂肪細(xì)胞周圍OB、骨細(xì)胞等顯著減少;與OVX組比較，ZGZTC組和EV組骨組織形態(tài)均有不同程度的改善，骨小梁增多、疏松，空泡狀脂肪細(xì)胞減少，OB和骨細(xì)胞增多，但結(jié)構(gòu)仍不完整。與Blank組比較，OVX組大鼠脛骨脂肪空泡數(shù)目和面積顯著增加（P<0.05），藥物干預(yù)后，脂肪空泡數(shù)目和面積均減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)圖4-5。

3.5 ?壯骨止痛膠囊對(duì)大鼠血清激素水平的影響

給藥治療12周后，與Sham組及Blank組比較，OVX組大鼠血清BALP（P<0.01或P<0.05）、ADP（P<0.05或P<0.001）水平顯著升高;與Blank組比較，OVX組大鼠血清E2水平顯著降低（P<0.05）;與OVX組比較，各藥物治療組血清E2水平均顯著上升（P<0.05），ZGZTC組血清PINP水平顯著上升（P<0.05），BALP水平顯著下降（P<0.01）;各組間大鼠血清BGP、

LEP表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)圖6。

4 討論

體質(zhì)量對(duì)骨折風(fēng)險(xiǎn)的影響是復(fù)雜的。與穩(wěn)定體質(zhì)量相比，體質(zhì)量增加或減輕均可能增加骨折發(fā)生率，但不同骨折部位的相關(guān)性不同[11]。

脂肪、骨轉(zhuǎn)換和BMD密切相關(guān)，是OP的一種診斷方法和潛在的治療靶點(diǎn)[12]。骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，骨折風(fēng)險(xiǎn)也隨之增高[13-14]。此外，骨骼老化與成骨標(biāo)志物下降和成脂標(biāo)志物增加有關(guān)[15]。有研究表明，骨髓脂肪細(xì)胞的副產(chǎn)物會(huì)影響骨髓環(huán)境中的其他細(xì)胞和骨骼微結(jié)構(gòu)[16]，骨髓脂肪細(xì)胞可通過(guò)在骨髓中分泌游離脂肪酸顯著增加脂肪毒性[17-18]，這些游離脂肪酸對(duì)OB和骨細(xì)胞有毒性，從而導(dǎo)致自噬和細(xì)胞凋亡[19-20]。當(dāng)骨髓脂肪中不飽和脂肪酸的比例較低時(shí)，BMD降低而骨折患病率增高[21]。研究證實(shí)，Louvain大鼠中骨髓脂肪區(qū)的OB數(shù)和骨細(xì)胞數(shù)顯著減少[22]，表明在骨髓內(nèi)脂肪區(qū)附近可以影響局部細(xì)胞密度，從而影響骨的轉(zhuǎn)換和結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)了骨髓脂肪細(xì)胞在OP的病理生理學(xué)中的作用。

ADP是至今發(fā)現(xiàn)的所有脂肪細(xì)胞因子中唯一可以進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)的激素，其與骨代謝息息相關(guān)，由骨髓脂肪所產(chǎn)生的ADP能通過(guò)自分泌或旁分泌的路徑促進(jìn)骨形成，而處于血液循環(huán)中的ADP則通過(guò)內(nèi)分泌的方式抑制骨形成[23]。LEP是肥胖基因的編碼產(chǎn)物，是一種具有內(nèi)分泌作用的蛋白，主要由外周白色脂肪組織產(chǎn)生，也可由骨髓中的脂肪組織產(chǎn)生，其對(duì)骨代謝的作用具有組織特異性和雙重性，其對(duì)骨質(zhì)的影響既有中樞性抑制成骨，也有外周促進(jìn)成骨的雙重作用[24]。LEP被脂肪組織合成并釋放進(jìn)入外周循環(huán)，可直接作用在外周的骨組織，促進(jìn)BMSCs向OB分化，并抑制向脂肪細(xì)胞分化[25]。有研究表明，脂代謝影響骨代謝還有可能與高脂導(dǎo)致的抗氧化能力受損相關(guān)[26]。氧化脂質(zhì)能夠促進(jìn)BMSCs向脂肪細(xì)胞分化，同時(shí)還能刺激OC生成和誘發(fā)炎癥反應(yīng)導(dǎo)致骨吸收，共同加劇骨的破壞[27]。E2水平降低可引起氧化應(yīng)激從而導(dǎo)致BMSCs的成脂-成骨分化失衡，其通過(guò)誘導(dǎo)核心蛋白β-catenin與FoxO3a和PPARγ的結(jié)合，從而抑制骨髓的成骨性分化，使脂肪形成，最終導(dǎo)致OP[28]。

骨形成標(biāo)志物包括BALP、BGP、PINP等。骨骼礦化受阻時(shí)，OB合成大量堿性磷酸酶，使血清BALP明顯升高[29]。應(yīng)用藥物治療可以使BALP下降，且這種下降通常出現(xiàn)在BMD增加之前，所以BALP是OP治療療效評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一，而B(niǎo)GP是骨基質(zhì)礦化的必需物質(zhì)，在調(diào)節(jié)骨鈣代謝中起重要作用，反映骨代謝的總體水平，血清中BGP水平可直接反映OP患者OB活性和骨形成情況，PINP在血清中的含量則反映OB合成骨膠原的能力，其血液中的含量主要反映Ⅰ型膠原的合成速率和骨轉(zhuǎn)換的情況，是新骨形成的特異性的敏感指標(biāo)[30]。

從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，去卵巢后大鼠血清E2水平顯著下降，ADP水平顯著升高，LEP水平下降，脂/骨代謝紊亂，成骨-成脂分化失衡，BMSCs向成脂細(xì)胞分化增強(qiáng)，OB分化則減弱，從而導(dǎo)致骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量顯著增加，骨髓脂肪區(qū)OB數(shù)和骨細(xì)胞數(shù)相應(yīng)減少，導(dǎo)致骨量減少，最終造成PMOP。而壯骨止痛膠囊干預(yù)后，大鼠血清E2、PINP、LEP水平顯著上升，ADP、BALP水平下降，骨髓脂肪細(xì)胞減少，OB數(shù)和骨細(xì)胞數(shù)增多，骨量增多，骨小梁結(jié)構(gòu)改善，表明BMSCs向OB分化增強(qiáng)，成脂細(xì)胞分化減弱，成骨-成脂分化失衡的脂骨代謝紊亂情況改善，從而避免了PMOP的發(fā)生。因此，通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)研究可以推測(cè)出壯骨止痛膠囊通過(guò)上調(diào)血清E2、LEP水平和降低ADP水平等促進(jìn)成骨分化，抑制成脂分化，調(diào)節(jié)脂/骨代謝紊亂，減少骨髓脂肪堆積，抑制過(guò)度骨代謝，使骨量增多，從而改善骨小梁微結(jié)構(gòu)，并維持體質(zhì)量穩(wěn)定，以防治PMOP，減少骨折的發(fā)生。這是可能的作用機(jī)制之一，然而這只是目前從實(shí)驗(yàn)中得出的推斷結(jié)論，由于樣本量較小，導(dǎo)致有些指標(biāo)只呈現(xiàn)出一些變化趨勢(shì)，結(jié)果差異不顯著，對(duì)于壯骨止痛膠囊調(diào)節(jié)脂/骨代謝防治PMOP的具體機(jī)制以及臨床研究，還有待進(jìn)一步深入探索。

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