基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)探析洋參御唐方治療糖尿病腎臟病的作用機(jī)制

彭 澤，趙大鵬，劉力嘉，顧欣悅

(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，黑龍江 哈爾濱 150040；2. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150020)

糖尿病腎臟病為糖尿病不可忽視的微血管并發(fā)癥及炎癥并發(fā)癥，最終可引起腎小球硬化，患者可出現(xiàn)水腫、高血壓、持續(xù)性泡沫尿(蛋白尿)、腎小球?yàn)V過率(GFR)降低等[1]。糖尿病腎臟病多呈慢性進(jìn)行性發(fā)展，直至發(fā)展為終末期腎病。目前，我國糖尿病發(fā)病率高達(dá)9.7%，其中DKD的發(fā)病率占20%～60%[2]。中藥復(fù)方洋參御唐方以西洋參、黃芪、菟絲子、女貞子、山藥、白芍、玉竹、天花粉、山茱萸、葛根、烏梅、桃仁、紅花共13味藥物組成，有健脾補(bǔ)腎、益氣養(yǎng)陰之效，是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院趙大鵬主任醫(yī)師以標(biāo)本同治、補(bǔ)瀉兼施為治療目的，在民間驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，結(jié)合歷代醫(yī)家治療消渴病的經(jīng)驗(yàn)擬定而成[3]。在改善患者臨床癥狀、降低尿蛋白、保護(hù)腎臟并延緩病程進(jìn)展以及提高患者生活質(zhì)量等方面作用顯著[4]，具有療效穩(wěn)定、安全可靠等特點(diǎn)。目前洋參御唐方治療糖尿病腎臟病的作用機(jī)制尚未完全闡明，以往研究主要集中于經(jīng)驗(yàn)總結(jié)、血清學(xué)指標(biāo)或單一機(jī)制，尚未深入探討洋參御唐方治療 糖尿病腎臟病的分子機(jī)制?；谥兴帍?fù)方多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的特征，尋找糖尿病腎臟病特異性高的分子標(biāo)志物及新的分子靶點(diǎn)，對于糖尿病腎臟病的特異性治療具有重要意義。生物信息學(xué)分析技術(shù)可通過一系列網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、核心靶點(diǎn)篩選以及信號通路富集分析，快速挖掘方藥的主要作用靶點(diǎn)[5]。本研究以此技術(shù)分析了洋參御唐方的體內(nèi)生物學(xué)特征，以此對洋參御唐方活性物質(zhì)進(jìn)行篩選并對其作用機(jī)制進(jìn)行探究，為其臨床治療糖尿病腎臟病提供參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1洋參御唐方生物信息集的獲取 應(yīng)用BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫進(jìn)行在線生物信息分析，收集洋參御唐方的主要活性成分及潛在靶點(diǎn)，并以君臣佐使形式輸入中藥復(fù)方進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析[6]。其中西洋參、黃芪為君藥，山藥、玉竹、天花粉、菟絲子、女貞子為臣藥，山茱萸、白芍、葛根、烏梅、桃仁、紅花為佐使藥，一共3個(gè)集群，設(shè)定P≤0.05，score cutoff≥20為檢索條件，并將得出的與洋參御唐方活性成分輸入TCMSP平臺。以口服生物利用度(OB)≥30%[7]、類藥性(DL)≥0.18[8-9]為指標(biāo)進(jìn)行篩選，得到洋參御唐方的主要活性成分及其靶點(diǎn)并整理為生物信息集[10]。同時(shí)查閱中華人民共和國藥典(2020版)，并對CNKI、萬方數(shù)據(jù)等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，避免遺漏個(gè)別認(rèn)可度較高的活性成分，將其合并至生物信息集中并構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.2構(gòu)建相互作用網(wǎng)絡(luò) 借助UniProt[11]、Gene Cards[12]等數(shù)據(jù)庫明確生物信息集對應(yīng)的基因數(shù)據(jù)，并用Cytoscape3.8.2[13]構(gòu)建“洋參御唐方-活性成分-靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)。通過Network Analyzer功能對網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行分析，以節(jié)點(diǎn)的大小來表現(xiàn)度(degree)值。

1.3獲取糖尿病腎臟病的生物信息數(shù)據(jù) 在Gene Cards數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫[14]、Drugbank數(shù)據(jù)庫[15]、TTD數(shù)據(jù)庫[16]中分別以“diabetic nephropathy” “diabetic kidney disease”“nephropathy diabetic”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,尋找糖尿病腎臟病的相關(guān)基因數(shù)據(jù)，參考UniProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶點(diǎn)命名標(biāo)準(zhǔn)化。

1.4蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 通過OmicShare平臺對獲取的洋參御唐方生物信息集以及糖尿病腎臟病的相關(guān)基因數(shù)據(jù)進(jìn)行映射分析，得到“洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”并導(dǎo)入STRING 11.5[17]網(wǎng)站，選定“Homo sapiens”為蛋白種類，將相互作用閾值下限設(shè)置為0.4并刪除無連接的節(jié)點(diǎn)。將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape3.8.2軟件進(jìn)行可視化分析并繪制PPI網(wǎng)絡(luò)。對其進(jìn)行MCODE分析[18]，得出作用顯著的節(jié)點(diǎn)。度值的大小用節(jié)點(diǎn)的大小及顏色的深淺變化來展現(xiàn)，由此篩選出核心靶點(diǎn)。

1.5GO富集分析與KEGG通路分析 將洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)及導(dǎo)入Metascape[19]網(wǎng)站進(jìn)行Gene Ontology(GO)富集分析和KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)信號通路分析。限制物種為“Homo Sapiens”(人源) 進(jìn)行操作，以P≤0.01為指標(biāo)對分析結(jié)果進(jìn)行篩選，得到相關(guān)性前10的分子功能和信號通路，并使用R語言對結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

1.6分子對接分析 采用分子對接技術(shù)驗(yàn)證從1.1中獲取的關(guān)鍵成分和1.4篩選得到的靶點(diǎn)蛋白，探究洋參御唐方對糖尿病腎臟病進(jìn)行調(diào)控的可能性。通過Pubchem數(shù)據(jù)庫查詢大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)并優(yōu)化保存為.mol2格式；從PDB數(shù)據(jù)庫中下載配體3D結(jié)構(gòu)并使用PyMol軟件刪除結(jié)構(gòu)中的水分子及小分子，再導(dǎo)入AutoDockTools進(jìn)行加氫等預(yù)處理；將二者轉(zhuǎn)換成pdbqt格式文件并運(yùn)行AutoDockTools分別進(jìn)行對接，選取最低結(jié)合能作為分子對接的得分。該得分可用于評估靶點(diǎn)與配體之間的對接活性，當(dāng)對接得分<-7.0 時(shí)，二者對接能力顯著。

2 結(jié) 果

2.1洋參御唐方的生物信息數(shù)據(jù) 通過BATMAN-TCM檢索篩選得到354個(gè)活性成分及1 991個(gè)靶點(diǎn)，以君、臣、佐使形式分為3個(gè)合集，823個(gè)共同靶點(diǎn)及3個(gè)合集的“活性成分-靶點(diǎn)-通路”相互作用網(wǎng)絡(luò)見圖1。洋參御唐方的主要生物學(xué)途徑包括神經(jīng)活性配體-受體互作、鈣信號途徑、嘌呤代謝、CGMP-PKG信號途徑等；分子功能 (MF) 以離子結(jié)合、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、信號傳導(dǎo)、氧化還原酶活化為主；細(xì)胞組分 (CC) 主要發(fā)生在胞漿及細(xì)胞質(zhì)等細(xì)胞場所；生物過程 (BP) 以細(xì)胞的氮代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)、生物合成、信號傳導(dǎo)、小分子物質(zhì)代謝、細(xì)胞分化等為重點(diǎn)進(jìn)程。將BATMAN-TCM檢索得到的活性成分錄入TCMSP數(shù)據(jù)庫，篩選去重后得到OB≥30%,DL≥0.18的145個(gè)活性成分及與其對應(yīng)的275個(gè)靶點(diǎn)。洋參御唐方中部分活性成分基本信息見表1。

左上角為洋參御唐方的君、臣、佐使的各項(xiàng)靶點(diǎn)基因數(shù)，其余為洋參御唐方的君、臣、佐使的“活性成分-靶點(diǎn)-通路”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖1 洋參御唐方的靶點(diǎn)基因集

表1 洋參御唐方中部分活性成分的基本信息

續(xù)表

2.2“洋參御唐方-活性成分-靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò) 洋參御唐方“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)見圖2。共包括363個(gè)節(jié)點(diǎn)和1 496條邊，其中13種顏色對應(yīng)各自的藥物節(jié)點(diǎn)，□代表75個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn)，◇代表275個(gè)靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)，每條邊則表示藥物中所含活性成分及活性成分與靶點(diǎn)相互作用關(guān)系。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)理論，節(jié)點(diǎn)的度值取決于與其相連結(jié)的節(jié)點(diǎn)數(shù)量。該網(wǎng)絡(luò)中，節(jié)點(diǎn)的大小與度值呈正比關(guān)系，以中心度值、親中心度值、等級值為標(biāo)準(zhǔn)，篩選得出在該網(wǎng)絡(luò)中起樞紐作用的節(jié)點(diǎn)，作為洋參御唐方的關(guān)鍵活性成分及靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)圖提示排名最靠前的5個(gè)活性成分分別是quercetin(槲皮素)、beta-sitosterol(β-谷甾醇)、1,7-Dihydroxy-3,9-dimethoxy pterocarpene(1,7-二羥基-3,9-二甲氧基紫檀烯)、luteolin(木犀草素)、Stigmasterol(豆甾醇)；根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)算法理論的角度，以上活性成分可能代表組方的主要療效物質(zhì)。從靶點(diǎn)的角度來看，單個(gè)基因數(shù)據(jù)受到越多的活性成分影響，則洋參御唐方對這個(gè)靶點(diǎn)的調(diào)控性可能越高；網(wǎng)絡(luò)圖提示洋參御唐方中排名前10位的靶點(diǎn)分別為PPARG、TOP2A、PGR、NCOA2、NOS3、SCN5A、ADRA1B、PTGS2、PDE3A、HSP90AB1。

圖2 “洋參御唐方-活性成分-靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)

2.3PPI網(wǎng)絡(luò)及MCODE分析 將洋參御唐方生物信息集的275個(gè)作用靶點(diǎn)與糖尿病腎臟病的3 723個(gè)基因數(shù)據(jù)靶點(diǎn)進(jìn)行映射分析，得到184個(gè)交集靶點(diǎn)并整理為“洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”。使用STRING 11.5 網(wǎng)站對“洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”進(jìn)行分析，得到PPI網(wǎng)絡(luò)并將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2進(jìn)行可視化處理，見圖3。網(wǎng)絡(luò)圖中越靠近圓形中心等級值越高，結(jié)果提示這個(gè)網(wǎng)絡(luò)中等級值排名前5位的樞紐靶點(diǎn)蛋白依次為：IL6(白細(xì)胞介素-6)、VEGFA(血管內(nèi)皮生長因子)、TP53(細(xì)胞腫瘤抗原P53)、TNF(腫瘤壞死因子)、JUN(轉(zhuǎn)錄因子AP-1復(fù)合物)。將PPI網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2進(jìn)行MCODE模塊分析，得到3個(gè)K-core值>4的模塊，這些模塊中的蛋白質(zhì)關(guān)系密切，執(zhí)行共同的生物學(xué)進(jìn)程。模塊1包含大量AKT激酶、白細(xì)胞介素、血管內(nèi)皮生長因子、細(xì)胞腫瘤抗原等相關(guān)靶點(diǎn)，可調(diào)控細(xì)胞代謝、增殖和血管生成、腫瘤抑制等生物進(jìn)程，參與多種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)；模塊2主要作用于神經(jīng)調(diào)控及細(xì)胞功能的協(xié)調(diào)，如細(xì)胞周期、對DNA損傷的反應(yīng)、代謝、細(xì)胞凋亡和自噬等；模塊3參與各種內(nèi)源性及外源性物質(zhì)的氧化、代謝，包括脂肪酸、類固醇激素和維生素等。見圖4。

圖3 “洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)的MCODE功能分析

2.4“洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”的GO富集分析結(jié)果 使用Metascape網(wǎng)站對進(jìn)行GO富集分析，得到P<0.01、最小計(jì)數(shù)為3且富集因子>1.5的項(xiàng)，并根據(jù)其成員相似性將其分組到集群中。GO富集分析結(jié)果顯示“洋參御唐方-糖尿病腎病-基因數(shù)據(jù)集”的生物過程(BP)顯著富集在于無機(jī)物反應(yīng)、藥物應(yīng)答、脂多糖受體信號途徑、傷害應(yīng)答、細(xì)胞-有機(jī)環(huán)狀化合物互作、血管發(fā)育、氧化過程、應(yīng)答類固醇激素、細(xì)胞-氮化合物互作、凋亡信號途徑等；細(xì)胞組分(CC)多集中于膜筏、囊泡腔、細(xì)胞頂端部分、細(xì)胞外基質(zhì)等細(xì)胞場所；分子功能(MF)以RNA聚合酶Ⅱ特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白域特異性結(jié)合、核受體活性、氧化還原酶活性、激酶結(jié)合、血紅素結(jié)合、細(xì)胞因子受體結(jié)合等為主。通過查閱文獻(xiàn)排除明確不相關(guān)富集結(jié)果，同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，以P值進(jìn)行排序，篩選得到具有顯著優(yōu)勢的前10位富集結(jié)果進(jìn)行可視化處理。見圖5。

圖5 “洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”的GO富集分析

2.5“洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”的KEGG通路分析結(jié)果 將“洋參御唐方-糖尿病腎病-基因數(shù)據(jù)集”錄入Metascape網(wǎng)站進(jìn)行KEGG通路分析，以P<0.01、最小計(jì)數(shù)為3且富集因子>1.5為篩選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，分析獲得349條相關(guān)核心通路。選取結(jié)果中顯性程度前10的KEGG通路進(jìn)行可視化處理，見圖6。分析表明目標(biāo)數(shù)據(jù)集的主要生物學(xué)進(jìn)程包括糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路、HIF-1信號通路、癌癥信號通路、愛潑斯坦-巴爾病毒感染、TNF信號通路、HTLV-I感染、鉑類耐藥、MAPK信號通路、阿米巴病信號通路、VEGF信號通路等。

圖6 “洋參御唐方-糖尿病腎臟病-基因數(shù)據(jù)集”的KEGG通路

2.6分子對接結(jié)果 將洋參御唐方治療糖尿病腎臟病節(jié)點(diǎn)度值排名居前的槲皮素、β-谷甾醇、1,7-二羥基-3,9-二甲氧基紫檀烯、木犀草素、豆甾醇等活性成分與樞紐靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接，結(jié)果見表2。

表2 洋參御唐方活性成分與核心靶點(diǎn)分子對接自由結(jié)合能得分 kcal/mol

從結(jié)果中選取具有顯著結(jié)合活性的IL6與β-谷甾醇以及TP53與豆甾醇，并將可視化展示對接模型，見圖7。

圖7 “洋參御唐方活性成分—糖尿病腎臟病樞紐靶點(diǎn)”分子對接圖

3 討 論

糖尿病腎臟病屬古籍醫(yī)案中所述“三消”之“下消”的范疇，亦有醫(yī)家稱之為“消腎”。北宋醫(yī)家趙佶和清代醫(yī)家沈金鰲在《圣濟(jì)總錄》《雜病源流犀燭》中分別以“小便白濁如凝脂，形體羸瘦”“有消渴后身腫者，有消渴面目膝腫小便少者”來描述消腎患者病情進(jìn)展至終末期多出現(xiàn)水腫、貧血、少尿等顯著臨床表現(xiàn)，同時(shí)揭示了消腎發(fā)病多由患者素體腎虛，病情遷延日久，傷津耗氣，五臟虛損，又兼雜痰、熱、郁、瘀等病理因素所致，病因病機(jī)屬本虛標(biāo)實(shí)。

洋參御唐方以西洋參和黃芪為君藥，西洋參性苦寒、味微甘，味濃氣薄，在《本草綱目》[20]中被譽(yù)為“虛而有火者相宜”之藥，具有補(bǔ)肺降火、生津液、除煩倦的作用；黃芪在《本經(jīng)逢原》[21]中被載為“補(bǔ)五臟諸虛，治脈弦自汗”，能行無汗則發(fā)，有汗則止之力。二藥相合，共奏扶助正氣之功、養(yǎng)陰生津之效。而山藥味甘性平，能補(bǔ)益脾胃，益腎潤肺；玉竹、天花粉性甘微寒，能養(yǎng)陰益胃潤肺；女貞子、菟絲子味甘苦，性涼，有補(bǔ)益肝腎、清虛火、退骨蒸之效，此五藥相配伍，共為臣藥，能補(bǔ)腎滋陰清熱。山茱萸在補(bǔ)益肝腎之時(shí)亦具兼助陽之效，為補(bǔ)陰陽之品；白芍?jǐn)筷幦岣危桓鸶饧∩?、止渴除煩；烏梅有斂肺止咳、生津之功；桃仁、紅花活血化瘀；六藥相合，可清熱、斂陰、生津，共為佐使。諸藥相合，共奏健脾補(bǔ)腎、益氣養(yǎng)陰之效。

本研究通過 BATMAN-TCM 檢索獲得洋參御唐方化學(xué)成分354種、靶點(diǎn)1 991個(gè)，可能與對無機(jī)物、藥物、脂多糖的反應(yīng)、損傷反應(yīng)、細(xì)胞對有機(jī)環(huán)狀化合物的應(yīng)答、血管發(fā)育、對類固醇激素的反應(yīng)、細(xì)胞對氮化合物的反應(yīng)、凋亡信號通路等有關(guān)，可發(fā)揮協(xié)同作用以調(diào)控糖尿病腎臟病。

藥物相互作用網(wǎng)絡(luò)顯示洋參御唐方治療糖尿病腎臟病排名前5的化合物為槲皮素、β-谷甾醇、1,7-二羥基-3,9-二甲氧基紫檀烯、木犀草素、豆甾醇。槲皮素是一種天然的黃酮類化合物，可通過促進(jìn)細(xì)胞對糖的吸收來降低血糖、提高抗氧化酶活性減輕氧化應(yīng)激、抑制炎性因子過度表達(dá)減輕炎癥并減少腎臟系膜增生延緩纖維化，從而發(fā)揮對腎臟的保護(hù)作用[22]；張杰等[23]發(fā)現(xiàn)槲皮素可通過下調(diào)AngⅡ誘導(dǎo)下的系膜細(xì)胞的MCP-1的分泌，從而抑制腎臟系膜增生。β-谷甾醇對葡萄糖的吸收、脂肪的合成與分解具調(diào)控作用，從而抑制糖尿病的發(fā)生[24]。Rahimifard等[25]發(fā)現(xiàn)，以β-谷甾醇為主要成分的Atenuifolia根提取物可使胰島β細(xì)胞功能增強(qiáng)，增加胰島素的分泌及活性。紫檀素類化合物是異黃酮類家族中的一個(gè)亞類，是許多中藥材的有效成分。1,7-二羥基-3,9-二甲氧基紫檀烯作為紫檀素類化合物，可通過抑制MAG來發(fā)揮抗菌、抗癌、抗炎、免疫抑制的藥理活性[26]。木犀草素屬于黃酮類化合物，王超超等[27]發(fā)現(xiàn)木犀草素可以抑制高糖誘導(dǎo)下腎小球系膜細(xì)胞過度增生，促進(jìn)其凋亡，改善腎臟損傷，其機(jī)制可能與激活 AMPK/SIRT-1/PGC-1α蛋白表達(dá)，從而發(fā)揮抗腎小球炎癥反應(yīng)、抗增生作用。Ward等[28]研究發(fā)現(xiàn)，豆甾醇可通過增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)的移位和表達(dá)的機(jī)制作用于2型糖尿病，這也表明了豆甾醇治療糖尿病腎臟病的潛在益處。

本研究通過PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析，得出洋參御唐方中蛋白互作性較強(qiáng)的靶點(diǎn)。其中IL6可顯著削弱胰島β細(xì)胞的功能，引起胰島素分泌功能障礙、胰島素抵抗及代謝綜合征，最終促進(jìn)糖尿病腎臟病的發(fā)生，因此IL6作為糖尿病腎臟病發(fā)生、發(fā)展過程的關(guān)鍵靶點(diǎn)，可通過其水平高低來提示病情的嚴(yán)重程度[29]；TNF在白細(xì)胞形成過程中起輔助作用，通過促進(jìn)釋放蛋白水解物及超氧化物而使腎組織受損，腎小球基底膜通透性提高，進(jìn)而導(dǎo)致患者尿蛋白水平上升[30]。槲皮素作為洋參御唐方的主要活性成分，可減少IL-6、TNF-α、IL-1β及C反應(yīng)蛋白等炎癥介質(zhì)在腎臟的含量，從而發(fā)揮抑制腎臟血管內(nèi)皮炎性反應(yīng)的功能，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)腎臟的作用[31]。VEGFA是糖尿病腎臟病發(fā)展或進(jìn)展的敏感預(yù)測因子，其表達(dá)增加能夠有效預(yù)測糖尿病腎臟病患者發(fā)生微量白蛋白尿[32]；TP53作為腫瘤抑制蛋白，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、衰老、細(xì)胞周期阻滯等多種途徑達(dá)到抑制細(xì)胞生長的生物進(jìn)程，致力于調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝并維持細(xì)胞環(huán)境內(nèi)的氧化還原穩(wěn)態(tài)，其水平與糖尿病腎臟病的發(fā)展進(jìn)程有關(guān)[33]；JUN主要作用于糖尿病腎臟病患者的細(xì)胞分化、凋亡、應(yīng)激過程[34]，其在cAMP信號通路刺激下可導(dǎo)致類固醇生成基因表達(dá)增加，而類固醇激素可能抑制胰島素分泌。

KEGG通路分析提示AGE-RAGE信號通路具有顯著性，是糖尿病腎臟病發(fā)病、進(jìn)展的重要環(huán)節(jié)；研究證實(shí)AGEs/RAGE水平與腎基底膜細(xì)胞、系膜細(xì)胞的增生和肥大呈正相關(guān)，可加快腎臟纖維化的進(jìn)程，反之亦能有效延緩其病理進(jìn)展[35]。有研究發(fā)現(xiàn)，高血糖可能通過抑制體內(nèi)AMPK蛋白激酶的活性來降低5-羥甲基胞嘧啶(5hmC)，這同時(shí)意味著患癌癥的可能性增加[36]；該發(fā)現(xiàn)揭示了一條存在于糖尿病與癌癥之間，具有獨(dú)特代謝視角的新通路，也為洋參御唐方通過癌癥信號通路作用于糖尿病腎臟病提供了理論支持。KEGG通路分析還發(fā)現(xiàn)，洋參御唐方可通過HIF-1信號通路作用于糖尿病腎臟病，因高糖環(huán)境下，HIF-1信號途徑可激活多種與腎間質(zhì)纖維化的細(xì)胞因子，并促進(jìn)其表達(dá)，導(dǎo)致糖尿病腎損傷的發(fā)生及發(fā)展[37]。

綜上所述，洋參御唐方具有多靶點(diǎn)、多通路、多途徑的特點(diǎn)，可能通過調(diào)控IL6、VEGFA、TP53、TNF、JUN等多個(gè)靶點(diǎn)，以及作用于AGE-RAGE信號通路、癌癥信號通路、HIF-1信號通路等多條通路對糖尿病腎臟病起到治療作用。鑒于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的局限性，洋參御唐方作用于糖尿病腎臟病的基因表達(dá)與通路的正負(fù)反饋調(diào)控過程有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。