基于代謝組學(xué)研究痰熱內(nèi)擾型慢性失眠病人血清代謝物及中藥干預(yù)作用

李文慧，朱陵群，郭蓉娟

慢性失眠以夜間失眠和日間功能損害為主要特征，失眠癥狀常表現(xiàn)為入睡困難、睡眠維持障礙、早醒、醒后難以再次入睡，甚則徹夜不眠，日間癥狀包括疲勞、情緒不穩(wěn)、周身不適、認(rèn)知功能減退等，且上述癥狀持續(xù)≥3個(gè)月[1-2]。慢性失眠屬于中醫(yī)學(xué)“不寐”范疇，痰熱與痰濁導(dǎo)致的陰陽不和形成的失眠最為常見[3]，臨床研究表明，痰熱內(nèi)擾證是不寐最常見的證型之一，黃連溫膽湯是治療不寐痰熱內(nèi)擾證的經(jīng)典方劑，具有良好的療效與安全性[4-7]。在符合失眠癥診斷的病人中，31%～75%為慢性失眠，其中66.67%以上的病人病程>1年[8]。長期失眠可導(dǎo)致焦慮、抑郁、高血壓、冠心病、糖尿病、腫瘤等疾病，全面深入剖析其發(fā)病機(jī)制并對(duì)其有效防治至關(guān)重要。

失眠的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，有過度覺醒機(jī)制、神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫機(jī)制、相關(guān)腦區(qū)及神經(jīng)遞質(zhì)機(jī)制等[9]，由于大腦結(jié)構(gòu)的特殊性及神經(jīng)生物學(xué)的復(fù)雜性，其發(fā)病機(jī)制的研究受到限制。代謝組學(xué)的日益發(fā)展，為失眠的診斷、闡明發(fā)病機(jī)制、治療監(jiān)測(cè)、藥物研發(fā)等提供了思路，其整體性和系統(tǒng)性的分析思想與中醫(yī)整體觀念不謀而合，因此，特別適用于中醫(yī)藥領(lǐng)域的研究。目前，關(guān)于慢性失眠的代謝組學(xué)研究很少，已有的研究以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為主，且人體代謝環(huán)境比較復(fù)雜，因此，臨床代謝組學(xué)研究尤為重要。由于男女存在顯著代謝差異，故本研究對(duì)男性和女性分別進(jìn)行檢測(cè)分析，最后整合分析共同變化趨勢(shì)的代謝物質(zhì)，以期減小誤差，提高研究結(jié)果的可靠性。

1 資料與方法

1.1 病例來源 選取2019年8月—2020年12月自愿參加本研究的痰熱內(nèi)擾型慢性失眠病人36例作為慢性失眠組，選取同期健康受試者36名作為健康對(duì)照組，其中，慢性失眠組脫落3例，最終納入33例。慢性失眠組給予黃連溫膽湯免煎顆粒(組方：黃連、法半夏、竹茹、橘紅、麩炒枳實(shí)、茯神、甘草、生姜、大棗，由江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，每日1劑，上下午分服，治療4周。健康對(duì)照組不予干預(yù)。本研究經(jīng)中醫(yī)臨床基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 慢性失眠納入標(biāo)準(zhǔn)：符合慢性失眠西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]和中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]；Spiegel睡眠問卷總分≥9分；年齡18～70歲。健康對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：無睡眠障礙、嚴(yán)重精神疾病及其他器質(zhì)病變；年齡18～70歲；簽署知情同意書者。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；焦慮自評(píng)量表(SAS)評(píng)分≥50分，貝克抑郁自評(píng)問卷(BDI)評(píng)分≥14分，患有精神分裂癥和其他嚴(yán)重精神障礙者；其他繼發(fā)性失眠者或軀體疾病引發(fā)失眠者(如腦卒中后、帕金森病等)；妊娠或哺乳期婦女，或在接受治療過程中準(zhǔn)備妊娠者；合并糖尿病、肝腎功能異常、免疫性疾病、代謝綜合征。

1.3 儀器與試劑 Q EXACTIVE液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)購自美國Thermo公司，ACQUITY BEH C18色譜柱購自美國Thermo公司，Millipore-Q超純水系統(tǒng)購自美國Millipore公司，DIONEX Ultimate 3000超高效液相色譜儀購自美國DIONEX公司，離心機(jī)購自德國Eppendorf公司，移液槍購自德國Eppendorf公司，渦旋混合儀購自美國Thermo公司，超低溫冰箱購自美國Thermo公司，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC/MS)級(jí)乙腈購自德國Merck公司，HPLC級(jí)甲醇購自德國Merck公司，甲酸購自德國CNW公司。

1.4 血清樣本采集與保存 于治療前后采集清晨空腹靜脈血5 mL置于真空采血管中，靜置30～60 min 后，4 ℃、3 000 r/min離心10 min。離心后取上清1 mL裝于EP管中，登記樣本信息后置于-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆茫赃M(jìn)行代謝組學(xué)檢測(cè)。

1.5 液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)聯(lián)用分析條件

1.5.1 色譜參數(shù) 儀器名稱：DIONEX Ultimate 3000超高效液相色譜儀；色譜柱：ACQUITY BEH C18 1.7 μm，2.1 mm×50 mm；液相條件：水(含2 mmol/L甲酸銨和0.1%甲酸)，乙腈。梯度洗脫，分析時(shí)間0～18 min，進(jìn)樣量5 μL，流速0.25 mL/min。

1.5.2 質(zhì)譜參數(shù) 儀器名稱：Thermo Q EXACTIVE離子源。ESI(±)監(jiān)測(cè)模式采用一級(jí)全掃描和二級(jí)數(shù)據(jù)依賴性掃描。離子源參數(shù)：電噴霧離子源ESI以正離子(ESI+)和負(fù)離子(ESI-)運(yùn)行，ESI(-)噴霧電壓為2 800 V；ESI(+)噴霧電壓為3 500 V。蒸發(fā)溫度：350 ℃；鞘氣：35 Arb；輔助氣：10 Arb；毛細(xì)管溫度：320 ℃；S-lens RF：50。一級(jí)全掃描：分辨率為70 000，AGC target為1e6，Maximun TT為100 ms，掃描范圍為70～1 050 m/z。二級(jí)數(shù)據(jù)依賴性掃描：分辨率為35 000，AGC target為1e5，Maximun TT為50 ms；NCE：20 V、40 V、60 V。

1.6 樣本制備與檢測(cè) 取血清樣本50 μL加入450 μL沉淀劑(甲醇∶乙腈=1∶1)沉淀蛋白，渦旋混勻60 s后，4 ℃，10 000 r/min，離心10 min，取100 μL置于Thermo Q EXACTIVE液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)中進(jìn)行LC-MS/MS分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院自建的Tracefounder軟件對(duì)LC/MS數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理后，采用Metabo Analyst 4.0軟件進(jìn)行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)構(gòu)建預(yù)測(cè)模型和尋找代謝標(biāo)志物，選擇變量重要性投影(VIP)>1的代謝物作為主要的差異性內(nèi)源代謝物，選擇P>0.1的作為影響的主要代謝通路。

2 結(jié) 果

2.1 原始色譜圖的可視化檢查 對(duì)質(zhì)量控制(QC)樣品的總離子流色譜圖(TIC)進(jìn)行重疊，采用一級(jí)全掃描模式，分析細(xì)胞上清液，羅列出樣本TIC圖，如圖1～圖6所示，觀察發(fā)現(xiàn)儀器的保留時(shí)間重現(xiàn)性非常好，儀器穩(wěn)定。

圖2 QC樣本負(fù)總離子流色譜圖

圖3 正離子全掃描總離子流圖

圖4 負(fù)離子全掃描總離子流圖

圖5 賴氨酸色譜圖

圖6 賴氨酸相應(yīng)的精確質(zhì)量數(shù)和分子式

2.2 慢性失眠組與健康對(duì)照組對(duì)比分析

2.2.1 多元統(tǒng)計(jì)分析 為觀察各組的分組聚類效果，將標(biāo)準(zhǔn)化后的數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析(見圖7、圖8)，慢性失眠組與健康對(duì)照組之間不完全重疊；再進(jìn)行監(jiān)督的PLS-DA模式識(shí)別(見圖9、圖10)，慢性失眠組與健康對(duì)照組完全分離，樣本間呈現(xiàn)出良好的分類效果。

圖7 男性PCA得分圖

圖9 男性PLS-DA立體圖

圖10 女性PLS-DA立體圖

2.2.2 差異性代謝物 慢性失眠男性病人與男性健康受試者比較，共發(fā)現(xiàn)53個(gè)差異性代謝產(chǎn)物，其中28個(gè)代謝物質(zhì)上升，25個(gè)代謝物質(zhì)下降；女性慢性失眠病人與女性健康受試者比較，共發(fā)現(xiàn)48個(gè)差異性代謝產(chǎn)物，其中18個(gè)代謝物質(zhì)上升，30個(gè)代謝物質(zhì)下降。去除性別因素進(jìn)行綜合分析，與健康受試者比較，男性和女性慢性失眠病人血清中均上升的代謝物質(zhì)有L-乙酰肉堿、L-亮氨酸、L-纈氨酸、溶血磷脂酰膽堿(LysoPC)[20∶3(5Z，8Z，11Z)]、LysoPC(17∶0)、組胺、磷脂酰膽堿(PC)[18∶1(9Z)/20∶4(5Z，8Z，11Z，14Z)]；下降的物質(zhì)有肌酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸、鞘磷脂(SM)[d18∶0/18∶1(11Z)]、油酸、PC[18∶3(6Z，9Z，12Z)/16∶0]、二十二碳六烯酸(DHA)。

2.2.3 代謝通路 慢性失眠組男性病人代謝物質(zhì)變化涉及的代謝通路有8條，分別是：D-谷氨酰胺與D-谷氨酸代謝，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，苯丙氨酸代謝，組氨酸代謝，精氨酸和脯氨酸代謝，色氨酸代謝，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，甘油磷脂代謝；女性病人代謝物質(zhì)變化涉及的代謝通路有4條，分別是：組氨酸代謝，鞘氨醇代謝，色氨酸代謝，甘油磷脂代謝。詳見表1、表2。

表1 男性代謝通路分析結(jié)果

表2 女性代謝通路分析結(jié)果

2.3 黃連溫膽湯治療前后對(duì)比分析

2.3.1 多元統(tǒng)計(jì)分析 將標(biāo)準(zhǔn)化后的數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析，如圖11、圖12所示，各組樣本間尚未完全分離；再做監(jiān)督的PLS-DA模式識(shí)別，得到PLS-DA得分圖見圖13、圖14，治療后與健康組分離，治療前后樣本間尚未完全分離。

圖11 男性PCA得分圖

圖12 女性PCA得分圖

圖13 男性PLS-DA立體圖

圖14 女性PLS-DA立體圖

2.3.2 差異性代謝物 與治療前比較，慢性失眠組男性病人經(jīng)黃連溫膽湯治療后共發(fā)現(xiàn)30個(gè)差異性代謝產(chǎn)物，其中13個(gè)代謝物質(zhì)上升，17個(gè)代謝物質(zhì)下降；而女性病人經(jīng)治療后共發(fā)現(xiàn)39個(gè)差異性代謝產(chǎn)物，其中18個(gè)代謝物質(zhì)上升，21個(gè)代謝物質(zhì)下降。去除性別因素分析，經(jīng)黃連溫膽湯治療后，男性和女性病人血清中均上升的物質(zhì)有：LysoPC[18∶2(9Z，12Z)]、LysoPC[20∶4(8Z，11Z，14Z，17Z)]、LysoPC[18∶1(11Z)]、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、肌酸、L-色氨酸；下降的物質(zhì)有：PC[16∶1(9Z)/20∶3(8Z，11Z，14Z)]、PC[16∶1(9Z)/22∶2(13Z，16Z)]、L-肉堿、SM[d18∶0/18∶1(11Z)]、PC[18∶1(9Z)/20∶4(5Z，8Z，11Z，14Z)]、SM[d18∶0/16∶1(9Z)]、PC[o-16∶1(9Z)/20∶4(8Z，11Z，14Z，17Z)]、2-羥基丁酸、L-乙酰肉堿、SM(d18∶1/16：0)。

2.3.3 代謝通路 慢性失眠男性病人治療前后代謝物質(zhì)變化涉及的代謝通路有5條，分別是：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，苯丙氨酸代謝，組氨酸代謝，色氨酸代謝，甘油磷脂代謝。女性病人治療前后代謝物質(zhì)變化涉及的代謝通路有3條，分別是苯丙氨酸代謝、鞘脂類代謝和甘油磷脂代謝。詳見表3、表4。

表3 男性代謝通路分析結(jié)果

表4 女性代謝通路分析結(jié)果

3 討 論

3.1 磷脂代謝分析 神經(jīng)細(xì)胞由磷脂所構(gòu)成的細(xì)胞薄膜包覆，在促進(jìn)神經(jīng)傳導(dǎo)和大腦活動(dòng)、增強(qiáng)記憶力、促進(jìn)脂肪代謝等方面有重要作用。機(jī)體中主要含有甘油磷脂和鞘磷脂(sphingomyelin，SM)兩大類磷脂，其中，甘油磷脂最主要的成分是磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine，PC)。PC與人體內(nèi)的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)有關(guān)，通過磷脂酶A2的催化作用降解為LysoPC，部分PC是炎癥的重要生物標(biāo)志物[12]。LysoPC作為趨化介質(zhì)，可通過特異性G蛋白偶聯(lián)受體對(duì)免疫細(xì)胞活化的修飾來參與炎癥過程，有報(bào)道稱LPC可作為肺炎的診斷和預(yù)后重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)[13]。SM、PC、LPC均含膽堿，膽堿和乙酰輔酶A在膽堿乙酰移位酶的催化作用下合成乙酰膽堿。乙酰膽堿不僅是與神經(jīng)興奮的傳導(dǎo)、學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)，而且與睡眠的調(diào)節(jié)密切相關(guān)[14]。乙酰膽堿是快速眼動(dòng)睡眠調(diào)節(jié)模型中的關(guān)鍵成分[15]，而在睡眠早期，由于乙酰膽堿的減少，增加的慢波活性有助于運(yùn)動(dòng)記憶的鞏固[16]。

從現(xiàn)代生物學(xué)視角來看，中醫(yī)學(xué)中“痰”的物質(zhì)基礎(chǔ)以脂質(zhì)代謝為主，“熱”與炎癥相關(guān)。在本研究中，慢性失眠病人血清差異性代謝物中，磷脂類代謝物數(shù)目最多，同時(shí)LysoPC、PC參與炎癥過程，與病人表現(xiàn)出的痰熱證癥狀相吻合。經(jīng)黃連溫膽湯干預(yù)后，慢性失眠病人血清內(nèi)PC、LysoPC、SM等脂類物質(zhì)發(fā)生改變，因此，黃連溫膽湯通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝發(fā)揮干預(yù)作用。

3.2 氨基酸代謝分析 色氨酸是一種可通過血腦屏障的必需氨基酸，分為L-色氨酸和D-色氨酸，D-色氨酸不能被生物體利用。體內(nèi)色氨酸代謝異常，會(huì)引起神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙，導(dǎo)致失眠的發(fā)生[17]。作為最重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一的5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)，是由色氨酸在色氨酸羥化酶及五羥色氨酸脫羧酶的作用下生成的。5-HT在大腦皮層和神經(jīng)突觸內(nèi)含量最多，能維持慢波睡眠，同時(shí)5-HT能神經(jīng)元可促使具有催眠效應(yīng)的肽類物質(zhì)的累積[18-19]。研究顯示，給SD大鼠注射氯苯丙氨酸混懸液復(fù)制失眠模型，1周后大鼠外周血清5-HT含量明顯下降，然而單獨(dú)使用5-羥色氨酸后，可產(chǎn)生催眠作用[20-21]。本研究結(jié)果呈現(xiàn)慢性失眠病人色氨酸水平下降，可能導(dǎo)致5-HT合成減少，從而產(chǎn)生睡眠障礙。

苯丙氨酸屬芳香族氨基酸，具有生物活性的光學(xué)異構(gòu)體為L-苯丙氨酸，苯丙氨酸在苯丙氨酸羥化酶的催化下形成酪氨酸，并與酪氨酸一起合成與失眠密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(dopamine，DA)和去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)。中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)具有調(diào)控興奮和鎮(zhèn)靜的雙重作用，失眠障礙病人存在腦內(nèi)多巴胺D2神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)異常，睡眠相關(guān)多巴胺神經(jīng)通路包括伏隔核、尾狀核、殼核，多巴胺D2受體結(jié)合力降低，且多巴胺D2受體結(jié)合力下降與失眠障礙病程相關(guān)[22]。當(dāng)雙側(cè)藍(lán)斑尾部受損時(shí)，NE分泌明顯減少，快速眼動(dòng)睡眠完全不能進(jìn)行，導(dǎo)致睡眠障礙[23]。本研究中慢性失眠病人苯丙氨酸較健康受試者降低，可能使多巴胺、NE的合成減少，從而影響睡眠。

纈氨酸、亮氨酸均是生糖氨基酸，可以通過代謝轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟菫闄C(jī)體提供能量，同時(shí)二者作為支鏈氨基酸，可以增加肌肉量、緩解疲勞。與健康對(duì)照組比較，慢性失眠病人血清代謝物中纈氨酸、亮氨酸升高，可能是機(jī)體的代償反應(yīng)所導(dǎo)致，還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，慢性失眠病人存在顯著的氨基酸代謝紊亂，經(jīng)黃連溫膽湯治療后，苯丙氨酸、色氨酸水平上升，說明黃連溫膽湯可通過調(diào)節(jié)氨基酸代謝發(fā)揮干預(yù)作用。

3.3 能量代謝分析 肌酸廣泛分布于大腦、心肌等組織中，當(dāng)體內(nèi)三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)充足時(shí)，可在肌酸磷酸激酶的作用下促使ATP中的高能磷酸鍵基團(tuán)轉(zhuǎn)移到肌酸分子中形成磷酸肌酸。磷酸肌酸是腦、神經(jīng)等組織儲(chǔ)能的主要形式，肌酸可以通過穩(wěn)定線粒體過渡孔，并且通過增加谷氨酸重?cái)z取起神經(jīng)保護(hù)作用[24]，可見磷酸肌酸和肌酸在腦能量代謝中發(fā)揮十分重要的作用。研究表明，失眠病人腦內(nèi)肌酸濃度降低[25]。本研究中，慢性失眠病人血清代謝物肌酸水平降低，表明機(jī)體能量代謝發(fā)生異常，或可解釋慢性失眠病人出現(xiàn)大腦昏沉不清、精神狀態(tài)差等日間癥狀。

肉堿作為有機(jī)酸和脂肪酸的中間代謝產(chǎn)物，廣泛存在于骨骼肌、心肌等組織中。肉堿有兩個(gè)立體異構(gòu)，包括有生物活躍的L-肉堿及其非生物活躍的對(duì)映異構(gòu)體D-肉堿。L-肉堿是一種促使脂肪轉(zhuǎn)化為能量的類氨基酸，能夠促進(jìn)脂肪酸進(jìn)入線粒體氧化分解。L-乙酰肉堿是L-肉堿的乙酰化形式，L-乙酰肉堿可以提供一個(gè)乙?；糠?，被氧化產(chǎn)生能量，用作乙酰膽堿的前體，或被并入谷氨酸、谷氨酰胺和γ-氨基丁酸，或被并入脂質(zhì)，用于髓鞘形成和細(xì)胞生長[26-27]?？梢?，L-肉堿和L-乙酰肉堿在促進(jìn)脂肪代謝和能量產(chǎn)生的過程中發(fā)揮著重要作用。本研究結(jié)果顯示，無論是男性病人還是女性病人，L-乙酰肉堿水平均上升、肌酸水平下降，提示慢性失眠病人體內(nèi)存在能量代謝障礙，脂肪酸代謝供能增加。經(jīng)黃連溫膽湯干預(yù)后，慢性失眠病人血清內(nèi)L-乙酰肉堿及L-肉堿下降，肌酸水平上升，因此，黃連溫膽湯通過調(diào)節(jié)能量代謝發(fā)揮干預(yù)作用。

3.4 脂肪酸代謝分析 油酸是一種單不飽和脂肪酸，與氨經(jīng)脂肪酸酞胺水解酶催化合成油酰胺，其具有催眠活性，其在腦中含量與睡眠周期密切相關(guān)，缺乏睡眠時(shí)濃度增加，恢復(fù)睡眠時(shí)濃度減小[28-29]。DHA屬于ω-3不飽和脂肪酸，在神經(jīng)細(xì)胞中的濃度最高，因其對(duì)腦的發(fā)育具有重要作用，故稱之為“腦黃金”。DHA具有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長、改善認(rèn)知功能、抑制氧化應(yīng)激、提高免疫力等多種作用[30-32]，同時(shí)還能增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力[33]。海馬是調(diào)控學(xué)習(xí)、記憶、情感等活動(dòng)的重要腦區(qū)。陳超剛等[34]通過體外培養(yǎng)細(xì)胞試驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，DHA促進(jìn)海馬神經(jīng)細(xì)胞生長發(fā)育。本研究中，慢性失眠病人油酸和DHA下降，脂肪酸代謝異常，其中DHA下降，或可解釋臨床中慢性失眠病人出現(xiàn)記憶力下降、注意力不集中等認(rèn)知障礙癥狀。

4 小 結(jié)

慢性失眠的發(fā)病機(jī)制很復(fù)雜，目前的研究多以局部或者靶點(diǎn)研究為主，僅從某一方面或單系統(tǒng)的研究往往不能解釋整體現(xiàn)象。本研究基于代謝組學(xué)進(jìn)行整體、系統(tǒng)的研究，為尋找痰熱內(nèi)擾型慢性失眠的生物標(biāo)志物以及黃連溫膽湯的治療機(jī)制提供了一定的參考價(jià)值。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，痰熱內(nèi)擾型慢性失眠病人體內(nèi)存在磷脂代謝、氨基酸代謝、能量代謝、脂肪酸代謝異常，經(jīng)黃連溫膽湯治療后，血清代謝物L(fēng)-苯丙氨酸、L-色氨酸、肌酸、L-乙酰肉堿及PC[18∶1(9Z)/20∶4(5Z，8Z，11Z，14Z)]回調(diào)，說明黃連溫膽湯對(duì)痰熱內(nèi)擾慢性失眠干預(yù)作用與調(diào)節(jié)氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝、能量代謝有關(guān)。