超高效液相色譜-四級(jí)桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用快速測(cè)定水產(chǎn)品及干制水產(chǎn)品制品中的116種農(nóng)藥和24種生物毒素殘留

王勇，張憲臣*，華洪波，李云松，黃碧嘉，李勇

（1.中山海關(guān)技術(shù)中心，廣東中山 528403）（2.卓雅外語學(xué)校,廣東中山 528401）

隨著人民生活水平的提高，水產(chǎn)品及其制品在人們生活水平中的比重日益增大，水產(chǎn)品及其制品安全問題成為全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。在影響水產(chǎn)品及其制品質(zhì)量安全的眾多因素中，農(nóng)藥和生物毒素殘留是主要的原因之一，果蔬和糧食等作物在生產(chǎn)和加工過程中使用農(nóng)藥以后，其殘留可能經(jīng)食物鏈和環(huán)境傳遞而進(jìn)入到水產(chǎn)品及其制品中，進(jìn)而影響人體健康[1,2]。農(nóng)藥主要是指用來防治危害農(nóng)林牧業(yè)生產(chǎn)的有害生物和調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)的化學(xué)藥品[3,4]。生物毒素是一類由生物自身分泌代謝、半生物合成的對(duì)其他生物物種有毒害作用的各種化學(xué)物質(zhì)，通常以痕量形式存在于食品基質(zhì)中，對(duì)人類的膳食健康造成了巨大的潛在威脅[5,6]。

水產(chǎn)品及其制品中農(nóng)藥和生物毒素殘留受到廣泛的關(guān)注，許多國(guó)家和國(guó)際組織均制定了相關(guān)的殘留限制標(biāo)準(zhǔn)。日本從2006年5月29日實(shí)施的《食品中殘留農(nóng)藥的肯定列表制度》中對(duì)涉及水產(chǎn)品的134種化學(xué)藥物殘留量限定[7]。美國(guó)FDA對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)口要檢查221種化學(xué)藥物的殘留，嚴(yán)禁使用的藥品有10種[8]。歐盟、加拿大、韓國(guó)等國(guó)家或地區(qū)近幾年也相應(yīng)提高了水產(chǎn)品及其制品中農(nóng)藥和生物毒素殘留的限制[9]。

水產(chǎn)品及其制品中農(nóng)藥和生物毒素檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法[10-12]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[13-15]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[16-21]和液相色譜-高分辨質(zhì)譜法[22-26]。其中酶聯(lián)免疫法易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法需對(duì)樣品進(jìn)行繁瑣的衍生化處理；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法有較好的選擇性、靈敏度和特異性，但是其定性準(zhǔn)確度方面尚有欠缺。水產(chǎn)品及其制品中農(nóng)藥和生物毒素檢測(cè)的前處理方法包括固相萃取、快速溶劑萃取、微波輔助萃取、分子印跡技術(shù)和QuEChERS等[22-28]。QuEChERS由于具有快速、簡(jiǎn)單、便宜、有效、耐用和安全可靠等優(yōu)勢(shì)在檢測(cè)水產(chǎn)品及其制品中農(nóng)藥和生物毒素應(yīng)用日趨增多，但是其易產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，會(huì)對(duì)方法的檢測(cè)限、選擇性，以及測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確定量產(chǎn)生影響。

四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀（Q-Exactive）具有分辨率高及定量能力好的優(yōu)點(diǎn)，可以利用目標(biāo)物母離子的精確分子量直接定量，無需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù)，對(duì)于多目標(biāo)物分析可以極大地降低檢測(cè)方法的時(shí)間，同時(shí)又能很好地避免低分辨質(zhì)譜易受基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性的現(xiàn)象[29-32]。

本研究利用 QuEChERS方法對(duì)水產(chǎn)品及其制品前處理，選擇一種新型的高效基質(zhì)脂肪吸附劑（EMR-Lipid）對(duì)樣品雜質(zhì)進(jìn)行吸附，能夠有效的降低基質(zhì)效應(yīng)。使用超高效液相色譜-四級(jí)桿/靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜法（UPLC-Q Exactive Orbitrap MS）對(duì)水產(chǎn)品中116種農(nóng)藥和24種生物毒素殘留量進(jìn)行測(cè)定，方法靈敏、快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、省時(shí)、穩(wěn)定、實(shí)用性強(qiáng)，適用于食品實(shí)驗(yàn)室大批量檢測(cè)水產(chǎn)品樣品。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

黑魚、羅非魚和羅氏蝦由中山海關(guān)石歧辦查驗(yàn)一科提供，干制鱸魚、干制鮑魚等樣品購(gòu)自中山華潤(rùn)萬家超市。

標(biāo)準(zhǔn)品：甲萘威（純度≥98.9%）、呋喃丹（純度≥98.3%）、3-羥基克百威（純度≥98.0%）、異丙威（純度≥98.5%）、亞胺硫磷（純度≥98.5%）、敵百蟲（純度≥99.0%）、啶蟲脒（純度≥98.1%）、氯磺隆（純度≥98.5%）、炔草酯（純度≥98.0%）、炔草酸（純度≥99.0%）、霜脲氰（純度≥99.0%）、野燕枯（純度≥99.0%）、烯唑醇（純度≥99.0%）、克瘟散（純度≥99.0%）、仲丁威（純度≥97.7%）、唑螨酯（純度≥99.4%）、抑霉唑（純度≥99.0%）、精甲霜靈（純度≥98.7%）、多效唑（純度≥99.0%）、伏殺磷（純度≥99.0%）、辛硫磷（純度≥98.0%）、抗蚜威（純度≥98.7%）、敵稗（純度≥99.0%）、噠螨靈（純度≥99.0%）、戊唑醇（純度≥98.5%）、噻菌靈（純度≥98.89%）、噻蟲啉（純度≥98.5%）、脫葉膦（純度≥95.0%）、三環(huán)唑（純度≥97.0%）、咪鮮胺（純度≥99.0%）、多菌靈（純度≥99.0%）、噻螨酮（純度≥98.0%）、地蟲磷（純度≥94.5%）、嘧霉胺（純度≥99.0%）、苯酰菌胺（純度≥98.5%）、嘧菌環(huán)胺（純度100.0%）、氯苯嘧啶醇（純度≥99.0%）、苯線磷亞砜（純度≥98.5%）、苯胺磷砜（純度≥99.0%）、氟蟲腈砜（純度≥98.2%）、甲草胺（純度≥99.5%）、毒死蜱（純度≥99.0%）、樂果（純度≥98.5%）、倍硫磷（純度≥98.0%）、氟硅唑（純度≥99.5%）、氟胺氰菊酯（純度≥94.0%）、茚蟲威（純度≥98.5%）、稻瘟靈（純度≥99.0%）、對(duì)硫磷（乙基對(duì)硫磷）（純度≥99.5%）、甲基嘧啶磷（純度≥99.0%）、喹硫磷（純度≥96.0%）、吡螨胺（純度≥99.5%）、四氟醚唑（純度≥99.6%）、唑啶磷（純度≥97.8%）、丁酮砜威（純度≥91.3%）、噻蟲胺（純度≥98.9%）、咪唑菌酮（純度≥96.9%）、呋霜靈（純度≥98.5%）、吡喃靈（純度≥93.9%）、苯酮唑（純度≥96.8%）、枯草?。兌取?7.6%）、敵草?。兌取?9.3%）、乙環(huán)唑（純度≥97.2%）、撲滅津（純度≥94.8%）、丙環(huán)唑（純度≥99.0%）、西草凈（純度≥98.9%）、噻苯?。兌取?9.0%）、抗霉素（純度≥99.0%）、殺蟲脒（純度≥97.1%）、苯氰菊酯（純度≥99.1%）、硫敵草（純度≥98.1%）、倍硫磷（純度≥98.0%）、氧倍硫磷（純度≥95.7%）、倍硫磷砜（純度≥98.0%）、倍硫磷亞砜（純度≥99.5%）、氯氟胺氰戊菊酯（純度≥98.4%）、異稻瘟凈（純度≥97.5%）、氧甲拌磷（純度≥95.7%）、氧甲拌磷砜（純度≥93.6%）、殺蟲畏（純度≥98.7%）、滅鼠靈（純度≥99.4%）、喹禾靈（純度≥94.5%）、氟氯氰菊酯（純度≥99.70%）、氯氰菊酯（純度≥99.52%）、氰戊菊酯（純度≥87.0%）、禾草靈（純度≥99.8%）、除線磷（純度≥96.7%）、稗草畏（純度≥92.1%）、滅多威（純度≥99.0%）、保棉磷（純度≥99.0%）、苯線磷（純度≥99.0%）、涕滅威（純度≥99.0%）、涕滅威砜（純度≥99.2%）、涕滅威亞砜（純度≥99.0%）、氟蟲腈（濃度100 μg/mL）、氟甲腈（純度≥99.5%）、氟蟲腈硫化物（純度≥99.1%）、乙硫磷（純度≥99.0%）、甲氰菊酯（純度≥99.0%）、甲基對(duì)硫磷（純度≥99.0%）、氧化樂果（純度≥99.1%）、敵敵畏（純度≥99.2%）、馬拉硫磷（純度≥99.3%）、甲拌磷（純度≥98.9%）、殺撲磷（純度≥99.6%）、久效磷（純度≥99.0%）、稻豐散（純度≥99.0%）、三唑磷（純度≥99.2%）和甲基乙拌磷（純度≥99.1%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于德國(guó) Dr.Ehrenstorfer-Schafers公司；二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇（純度≥95.0%）、新茄病鐮刀菌烯醇（純度≥95.0%）、雪腐鐮刀菌烯醇（純度≥95.0%）、鐮刀菌烯酮（純度≥99.9%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于北京曼哈格生物科技有限公司；三唑酮（純度≥98.7%）、三唑醇（純度≥98.8%）、滅多威（純度≥99.9%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于德國(guó)LGC公司；阿維菌素（純度≥96.5%）、腈菌唑（純度 100%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于德國(guó)WTEGA公司；甲基毒死蜱（純度≥99.9%）、丙溴磷（純度≥98.2%）、黃曲霉毒素B1（純度≥99.6%）、黃曲霉毒素 B2（純度≥99.0%）、黃曲霉毒素 G1（純度≥99.0%）、黃曲霉毒素 G2（純度≥99.0%）、黃曲霉毒素 M1（純度≥99.9%）、黃曲霉毒素 M2（純度≥99.5%）、伏馬毒素B1（純度≥99.6%）、伏馬毒素B2（純度≥99.7%）、伏馬毒素 B3（純度≥99.0%）、赭曲霉素A（純度≥99.2%）、赭曲霉素B（純度≥99.5%）、赭曲霉素C（純度≥99.3%）、展青霉素（純度≥99.1%）、玉米烯酮（純度≥99.3%）、雜色曲霉毒素（純度≥99.6%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；HT-2毒素（純度≥99.0%）、T-2毒素（純度≥99.0%）、3-乙酰脫氧瓜萎鐮菌醇（純度≥99.0%）、15-乙酰脫氧瓜萎鐮菌醇（純度≥99.0%），以上標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于青島普瑞邦生物工程有限公司；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（純度≥95.0%）購(gòu)于美國(guó)O2si公司。

試劑：甲醇、乙腈、甲酸（色譜純），美國(guó)Fisher公司；高效基質(zhì)脂肪吸附柱（EMR-Lipid2），美國(guó)Agilent公司；甲酸銨（色譜純），上海安譜公司。實(shí)驗(yàn)用超純水為Milli-Q水處理系統(tǒng)制得。

四極桿／靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜Q-Exactive（美國(guó)ThermoFisher公司），配有HESI Ⅱ離子源，液相色譜系統(tǒng)為 Dione UltiMate 3000高壓液相色譜；BECHMAN Coulter Avanti J-26XP超高速冷凍離心機(jī)；平行定量濃縮儀、再循環(huán)冷卻系統(tǒng) B-740、真空泵V-700/701（瑞士 BUCHI公司）；渦旋震蕩器（德國(guó)IKA）；電子天平（DTY-B1200，福州華志科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)品約5.0 mg，于各自的5 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于4 ℃冰箱中保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取適量的儲(chǔ)備液用乙腈配成各相應(yīng)濃度為1 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

表1 140種化合物質(zhì)量分析和色譜分析參數(shù)Table 1 Parameters of MS and HPLC for 140 compounds

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

1.3 液相色譜條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Waters Atiantis○RT3 C18 150 mm×2.1 mm，3.3 μm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：A為5 mmol甲酸水溶液（含0.1%甲酸銨），B為5 mmol甲酸甲醇（含0.1%甲酸銨）溶液。梯度洗脫程序0～2.0 min，保持25% B；2.0～7.0 min，流動(dòng)相B的比例由25%線性變化至65%；7.0～8.0 min，流動(dòng)相B的比例由65%線性變化至90%；8.0～12.0 min，保持90% B；12.1～15 min，保持25% B。

1.3.2 質(zhì)譜條件

加熱電噴霧離子（HESI）源溫度為350 ℃；離子傳輸溫度為320 ℃；鞘氣為40 unit；輔助氣為40 unit；毛細(xì)管電壓為3.2 kV；離子傳輸管溫度為325 ℃。Full scan/ddms2掃描模式：采集范圍為80～1000 u，正負(fù)切換采集；一級(jí)質(zhì)譜分辨率為70000 FWHM，二級(jí)質(zhì)譜分辨率為17500 FWHM；碰撞池能量（NCE）為20、40、60 eV，見表1。

1.4 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取勻漿試樣5.0 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，其中水產(chǎn)品制品試樣加入10 mL乙腈/水（70:30，V/V）溶液，水產(chǎn)品試樣加入10 mL乙腈/水（90:10，V/V）溶液，渦旋震蕩 2 min，超聲波提取10 min，4000 r/min離心10 min，上清液加入到300 mg EMR-Lipid柱中，自然流速，收集濾液以 15000 r/min，溫度為5 ℃離心10 min，上層清移至15 mL離心管中于40 ℃平衡定量濃縮儀中濃縮至干。加1.0 mL甲醇/水（25:75，V/V）溶液渦旋溶解殘留物，提取液過0.22 μm濾膜，供超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件優(yōu)化

研究選擇對(duì)多組分分離較好的三款色譜柱Waters Atiantis○RT3 C18（150 mm×2.1 mm，3.3 μm）、Thermo Accucore RP-MS C18（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）和ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）對(duì)140種藥物進(jìn)行分離，結(jié)果顯示Thermo Accucore RP-MS C18（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）色譜柱對(duì)3-乙酰脫氧瓜萎鐮菌醇和 15-乙酰脫氧瓜萎鐮菌醇無法進(jìn)行有效的分離；野燕枯、氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫化物在ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）質(zhì)譜響應(yīng)值較低；140種目標(biāo)化合物在Waters Atiantis○RT3 C18（150 mm×2.1 mm，3.3 μm）形成的色譜峰峰形尖銳，對(duì)稱性好，原因是色譜柱柱長(zhǎng)對(duì)目標(biāo)化合物的分離有較大影響，色譜柱越長(zhǎng)分離效果越好、越穩(wěn)定。

研究140種目標(biāo)物中，4種目標(biāo)化合物（氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈砜和氟蟲腈硫化物）在正離子模式下信號(hào)強(qiáng)度較弱，而在負(fù)離子模式下有較強(qiáng)的響應(yīng)信號(hào)，因此為負(fù)離子模式檢測(cè)。其他目標(biāo)化合物均為正離子模式檢測(cè)，為了提高正離子模式目標(biāo)物的響應(yīng)值，本研究在流動(dòng)相（包括A和B）中均添加了甲酸，以便提高目標(biāo)化合物的靈敏度。比較了0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈、0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇、5 mmol甲酸水溶液（含 0.1%甲酸銨）-5 mmol甲酸乙腈溶液（含0.1%甲酸銨）、5 mmol甲酸水溶液（含0.1%甲酸銨）-5 mmol甲酸甲醇溶液（含0.1%甲酸銨）對(duì)140種目標(biāo)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)和色譜分離的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用5 mmol甲酸水溶液（含0.1%甲酸銨）-5 mmol甲酸甲醇溶液（含0.1%甲酸銨）為流動(dòng)相，140種目標(biāo)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)較好，色譜峰峰形尖銳，對(duì)稱性好，也能夠達(dá)到檢測(cè)要求，所以本研究選擇5 mmol甲酸水溶液（含0.1%甲酸銨）-5 mmol甲酸甲醇溶液（含0.1%甲酸銨）為流動(dòng)相（見圖1）。

2.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

本方法以流動(dòng)注射方式對(duì) 140種目標(biāo)物在正負(fù)切換離子模式下進(jìn)行一級(jí)全掃描，采用Q Exactive高分辨質(zhì)譜的一級(jí)母離子全掃描加數(shù)據(jù)依賴的二級(jí)子離子掃描模式（Full MS/dd-MS2），設(shè)定涵蓋目標(biāo)物的質(zhì)量數(shù)范圍（m/z150～1000）進(jìn)行一級(jí)全掃描，并以每個(gè)化合物的理論質(zhì)量數(shù)（表1）建立二級(jí)掃描的目標(biāo)列表。在實(shí)際掃描過程中，當(dāng)一級(jí)全掃描發(fā)現(xiàn)目標(biāo)列表里的母離子時(shí)，且信號(hào)強(qiáng)度超過預(yù)設(shè)值后，就會(huì)觸發(fā)數(shù)據(jù)依賴子離子掃描模式，進(jìn)而獲得對(duì)應(yīng)母離子精確質(zhì)量數(shù)的二級(jí)離子全掃描質(zhì)譜信息，以實(shí)現(xiàn)定性確證。根據(jù)歐盟 2002/657/EC對(duì)禁用藥物殘留檢測(cè)確證方法的要求，確證檢測(cè)需要 4個(gè)鑒別點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過上述質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化和篩選，每種待測(cè)物最終確定 1個(gè)監(jiān)測(cè)離子對(duì)，以滿足檢測(cè)確證的要求（見表1）。

2.3 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.3.1 萃取溶劑的優(yōu)化

研究選擇陰性干制鱸魚樣品為實(shí)驗(yàn)材料，添加濃度為5.0 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個(gè)樣品3平行，外標(biāo)法定量對(duì)萃取溶劑（乙腈/水（70:30，V/V）溶液（含 1%甲酸）、甲醇/水（70:30，V/V）溶液和乙腈/水（70:30，V/V）溶液）進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示乙腈/水（70:30，V/V）溶液（含1%甲酸）和乙腈/水（70:30，V/V）溶液均能回收到140種藥物殘留，甲醇/水（70:30，V/V）溶液只能部分回收到目標(biāo)化合物，尤其是炔草酯、炔草酸、霜脲氰、野燕枯、氟硅唑等藥物幾乎回收不到，乙腈/水（70:30，V/V）溶液（含 1%甲酸）雖然能夠回收到140種化合物，但是HT-2毒素、伏馬毒素（B1、B2和 B3）、新茄病鐮刀菌烯醇和部分農(nóng)藥殘留回收低于30%，使用乙腈/水（90:10，V/V）溶液作為萃取溶劑，140種化合物回收均高于70%，因此本研究選擇作為乙腈/水（70:30，V/V）溶液萃取溶劑，比較三種萃取溶劑，回收率變化較大的40種目標(biāo)化合物見圖 2。鮮活水產(chǎn)品由于樣品基質(zhì)中有較多水分，經(jīng)比較萃取溶劑乙腈/水（90:10，V/V）溶液、乙腈/水（80:20，V/V）溶液和乙腈/水（70:30，V/V）溶液，結(jié)果顯示乙腈/水（90:10，V/V）溶液作為萃取溶劑既能保證140種目標(biāo)化合物回收率大于70%，又能減少濾液中水分對(duì)目標(biāo)化合物的干擾，減少了濃縮時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。

2.3.2 高效基質(zhì)脂肪吸附劑的優(yōu)化

高效基質(zhì)脂肪吸附劑是一種能夠選擇性去除復(fù)雜基質(zhì)中脂肪含量的獨(dú)特吸附劑，具有快速、易操作和凈化能力強(qiáng)等特點(diǎn)。本研究選擇陰性干制鱸魚樣品為實(shí)驗(yàn)材料，添加濃度為5.0 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個(gè)樣品3平行，外標(biāo)法定量對(duì)600 mg和300 mg兩款EMR-Lipid柱進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示，相比300 mg EMR-Lipid柱，600 mg EMR-Lipid柱去除脂質(zhì)效果更好，但是由于EMR-Lipid會(huì)對(duì)部分目標(biāo)化合物產(chǎn)生較強(qiáng)的吸附作用，使用600 mg EMR-Lipid柱會(huì)導(dǎo)致部分目標(biāo)化合物的回收率低于60%，研究最終確定300 mg EMR-Lipid柱為去除干擾物、保證靈敏度的最佳選擇。

2.3.3 離心條件和濃縮條件的優(yōu)化

雖然EMR-Lipid已經(jīng)去除了樣品中大部分油脂等干擾組分，但是樣品提取液中還殘留少量的油脂、蛋白等組分，研究采用高速冷凍離心對(duì)樣品提取液進(jìn)行處理，能夠有效的促進(jìn)油脂凝結(jié)和蛋白質(zhì)的沉降，減少其對(duì)目標(biāo)化合物檢測(cè)的干擾。本研究對(duì)樣品提取液進(jìn)行了濃縮，選擇平行樣品定量濃縮儀減壓濃縮樣品提取液至近干，并對(duì)濃縮的條件進(jìn)行摸索，確定濃縮溫度為45 ℃；冷凝溫度為-2 ℃；真空度采用梯度下降的方式（250 kPa 5 min，80 kPa 5 min，30 kPa濃縮至干）。該方法可以同時(shí)濃縮處理 24份樣品提取液，完全濃縮至干僅需1 h。該處理方法能夠有效的降低檢測(cè)成本，提高檢測(cè)質(zhì)量和效率。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍和檢出限

在高分辨質(zhì)譜的分析中，其提取的精確質(zhì)量數(shù)色譜圖無基線噪音，因此采用傳統(tǒng)信噪比方法無法定義方法的檢出限。本方法采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的 y軸截距除以斜率的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3.3倍以上數(shù)據(jù)確定檢出限。準(zhǔn)確量取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備工作液，用乙腈/水（10:90，V/V）溶液稀釋成一系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品工作液，在1.3節(jié)條件下依次測(cè)定。結(jié)果顯示各種化合物在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.991，檢出限為 0.02～0.4 μg/kg（見表 2）。

2.4.2 方法準(zhǔn)確度和精密度

為驗(yàn)證本方法的精密度，設(shè)計(jì)以下實(shí)驗(yàn)方案: 在陰性水產(chǎn)品樣品（包括草魚、羅氏蝦、干制鱸魚和干制鮑魚）中進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，并做了精密度試驗(yàn)。在每一種水產(chǎn)品樣品添加濃度為 2.0、4.0、20 μg/kg三個(gè)濃度水平6次平行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示，平均回收率在 70.1%～109.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.0%～14.1%之間，說明本方法的準(zhǔn)確度和精密度滿足要求。

2.4.3 實(shí)際樣品檢測(cè)

利用本研究建立的分析方法檢測(cè) 39批實(shí)際樣品（其中包括5批鱸魚樣品、10批羅非魚樣品、5批干羅氏蝦樣品、8批干制鱸魚樣品、8批干制草魚和 3批干制鮑魚樣品），其中在 1批干制草魚中檢出毒死蜱，檢出量為4.32 μg/kg。

表2 140種目標(biāo)物線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)Table 2 Regression equation, correlation coefficient of the 140 compounds

續(xù)表2

續(xù)表2

續(xù)表2

3 結(jié)論

本研究以水產(chǎn)品及干制水產(chǎn)品制品為實(shí)驗(yàn)材料，以乙腈水溶液為提取劑，前處理過程中采用一種新型脂肪吸附劑EMR-Lipid柱去除樣品基質(zhì)中脂肪和磷脂等雜質(zhì)的干擾，隨后用平行定量濃縮儀進(jìn)行濃縮，建立了檢測(cè)水產(chǎn)品及其制品中116種農(nóng)藥和24種生物毒素殘留的超高效液相色譜-四級(jí)桿/靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜法（UPLC-Q Exactive Orbitrap MS），該方法可同時(shí)定性定量，具有靈敏、快速、簡(jiǎn)單、省時(shí)等特點(diǎn)，方法學(xué)結(jié)果滿足GB/T 27417-2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》的技術(shù)要求。