福建省某規(guī)模場后備母豬藍耳病抗體變化規(guī)律研究與應(yīng)用

黃秋宇

（福建省龍巖市農(nóng)業(yè)學(xué)校，福建 龍巖 364000）

在豬場的復(fù)養(yǎng)擴產(chǎn)過程中，由于養(yǎng)殖戶片面追求擴大生豬產(chǎn)能，大量三元母豬進入種豬群，使豬藍耳病再次成為豬場健康的一大難題。作為國際養(yǎng)豬界的“第一豬病”，由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）所引起，藍耳病在豬群內(nèi)的普遍感染，會導(dǎo)致豬群產(chǎn)生免疫抑制，且很容易繼發(fā)或混合感染鏈球菌等條件致病菌，使之在非洲豬瘟的背景下更易快速蔓延。

即便我國已然實現(xiàn)豬藍耳病疫苗的普遍免疫，但豬場感染率依舊較高。福建龍巖地區(qū)的養(yǎng)豬生產(chǎn)過程不管是否接種豬藍耳病疫苗，都會有該病的發(fā)生，主要原因是后備母豬的健康管理不到位。因此通過對豬群后備母豬藍耳病抗體水平的監(jiān)測，可實現(xiàn)對其健康狀況與免疫效果的全面了解，從而合理地調(diào)整后備母豬飼養(yǎng)管理，把握后備母豬進入種豬群時機，以便更好地控制藍耳病的發(fā)生及流行。

1 臨床癥狀

產(chǎn)房仔豬可見腹部乳頭根部發(fā)藍（見圖1），在斷奶之前豬場發(fā)病死亡保育豬具有良好的長勢，斷奶2 周之后會出現(xiàn)呼吸道疾病，消瘦蒼白、咳嗽，上升體溫，同欄中較肥胖的豬可能突然倒地發(fā)病，持續(xù)一周后就會死亡，個別豬出現(xiàn)耳尖部發(fā)紫（見圖2），會突然死亡，部分豬鼻部流出帶血分泌物。

圖1 乳頭根部發(fā)藍

圖2 耳尖部發(fā)紫

2 剖檢變化

解剖病死豬可見，其氣管內(nèi)的泡沫較多，心包膜增厚存在黃色積液，肺臟間質(zhì)增寬、嚴(yán)重充血壞死（圖3），脾臟梗死，肝臟腫大，淋巴結(jié)腫大出血，腎臟出現(xiàn)壞死點變色等系列病變。

圖3 肺間質(zhì)增寬

3 感染與免疫特點

3.1 持續(xù)感染 肺泡巨噬細胞是感染的靶細胞，所以肺泡巨噬細胞具有先天性免疫反應(yīng)，建成了抵抗的首道防線。病毒感染誘發(fā)的體液免疫和細胞免疫，能將循環(huán)中的病毒清除，但無法將淋巴組織內(nèi)的病毒清除掉，致使病毒持續(xù)性感染。出現(xiàn)再次感染時，便有記憶性免疫反應(yīng)出現(xiàn)，僅一部分免疫細胞擁有安全保護作用，此種非傳統(tǒng)抗感染免疫存在的不確定因素較多，其中包含了豬群與個體豬間存在的天然免疫反應(yīng)差異。受持續(xù)性感染影響，感染豬會成為短期病毒攜帶者，據(jù)相關(guān)研究顯示臨床癥狀消失2 個月內(nèi)，病豬依舊具有傳染性。同時還有研究指出，在感染豬的扁桃體與上呼吸道內(nèi)，病毒能夠存活的時間超過5 個月。感染病毒之后無法激發(fā)、IL-1、TNF、等細胞因子，是導(dǎo)致持續(xù)感染的重要因素，特別是對感染先天性免疫應(yīng)答的作用很大，若無法激活則會影響后天性獲得性免疫、先天性免疫反應(yīng)抵抗和消除病毒的功能。

3.2 細胞免疫 感染之后，會出現(xiàn)以與病毒特異性細胞增殖為體征的細胞免疫。有研究表明，抗特異性淋巴細胞增殖發(fā)生在感染28d 后，高峰是第49天，到了第77 天開始降低，細胞增殖反應(yīng)幅度會受重復(fù)感染影響，出現(xiàn)加大的情況，該增殖反應(yīng)能夠通過Ⅱ類抗原的抗體與阻斷，說明此種反應(yīng)對 淋巴細胞具有依賴性。感染后會出現(xiàn)細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，反應(yīng)會影響其感染程度，自然感染豬體內(nèi)的淋巴細胞亞群出現(xiàn)了改變，在外周血中的細胞比例明顯降低。因為通常和繼發(fā)感染的聯(lián)系緊密，所以，此種變化并不總是出現(xiàn)。細胞比例的變化，多發(fā)生在感染早期與康復(fù)期，分別是由細胞數(shù)目減少與細胞數(shù)量增加所引起。豬感染4 周后，會出現(xiàn)細胞變化，但要在感染后的9d～14 周能檢測此種變化。

3.3 保護性免疫是體內(nèi)中和抗體起到的作用 早期抗體可在感染后的7～9d 檢測出來。在主動保護試驗中早期抗體不能對攻毒的動物予以保護。而中和抗體是在感染之后的4 周或更遲時出現(xiàn)，由于中和抗體出現(xiàn)不規(guī)律和抗體產(chǎn)生緩慢，難以發(fā)揮保護性。有研究中和抗體能阻止病毒血癥；也有報道認(rèn)為消除病毒血癥，主要是中和表位抗體的出現(xiàn)。大量研究證實，大部分成功的疫苗免疫，均是中和抗體發(fā)揮保護作用。

4 材料與方法

4.1 豬場選取 該豬場存欄母豬1000 頭。跟蹤對象為本場自留后備母豬。該豬場2020 年后備母豬的疫苗免疫情況如下：

130 日齡 豬藍耳病弱毒苗

150 日齡 豬瘟弱毒苗

160 日齡 一邊豬乙型腦炎弱毒苗 另一邊細小病毒滅活苗

170 日齡 豬藍耳病弱毒苗

180 日齡 豬偽狂犬病基因工程苗

190 日齡 豬口蹄疫滅活苗

200 日齡 豬瘟弱毒苗

210 日齡 一邊豬乙型腦炎弱毒苗 另一邊細小病毒滅活苗

220 日齡 豬藍耳病弱毒苗

230 日齡 豬偽狂犬病病毒基因工程苗

4.2 血樣的采集及處理 根據(jù)生產(chǎn)需要監(jiān)測2020年本場自留后備母豬，分別在上述疫苗程序免疫后一個月內(nèi)采集豬前腔靜脈血。血樣采集每份3～5mL，用離心管保存，并完成編號，待30min 靜置析出血清之后，做好冷藏工作送往實驗室，離心10min，3000 轉(zhuǎn)/min，將血清分離備用。

4.3 器材與試劑 酶標(biāo)儀：美國Thermo Fisher MultiskanGO；全自動酶標(biāo)洗板機PW960；恒溫生化培養(yǎng)箱；美國單道與8 道可調(diào)移液槍。用美國公司所產(chǎn)試劑盒檢測豬藍耳病抗體，保存環(huán)境為-4℃。

4.4 ELISA 抗體檢測方法 遵循試劑盒的操作方法，所有試劑在使用之前應(yīng)恢復(fù)到，至少1h 以上。輕輕振蕩混合或旋轉(zhuǎn)試劑，各個樣品所使用吸頭均為單獨的一個。在實驗基礎(chǔ)上，于95%置信區(qū)間水平（CL）上，通過此試劑盒對豬藍耳病抗體進行檢測，特異性、敏感性均良好。

4.5 結(jié)果成立條件 陽性參照值與陰性參照值的平均值相減，應(yīng)≥0.15。同時，陰性參照值平均值（NCX）需≤0.15。

結(jié)果判定：若不存在抗體，則提示陰性，若存在抗體，提示陽性。

5 結(jié)果與分析

采集時間安排在2020 年的1～12 月份的11個時間段，采集后備母豬血液樣品共計282 份，各時間段豬藍耳病抗體監(jiān)測水平結(jié)果分析（見圖4，圖5），全年該豬場后備母豬有較高的藍耳病抗體陽性率，S/P 值大于0.4 的陽性率均在100%以上，且陽性抗體值較高，具有較為穩(wěn)定的抗體平均值，基本在1.5～2.5 區(qū)間，平均值為1.96。具有較大的離散度波動數(shù)值，平均值為23.11，最大為33.9，最小是10.04。就抗體離散度與平均值分布可見，后備母豬藍耳病抗體水平變化規(guī)律趨于穩(wěn)定，陽性率及S/P值合格，但是個別月份離散度偏高，因此對后備母豬的藍耳病抗體監(jiān)測非常有必要，防止離散度偏高的后備母豬直接進入種豬群，導(dǎo)致豬群的健康出問題。

圖4 豬藍耳病抗體S/P 值情況表

圖5 豬藍耳病抗體離散度情況表

6 討 論

本研究對該豬場后備母豬藍耳病抗體血清抗體水平的監(jiān)測與分析，并可以此判定后備母豬的藍耳病免疫效果。根據(jù)該豬場實際生產(chǎn)情況分析其后備母豬藍耳病抗體標(biāo)準(zhǔn)區(qū)間可定為：離散度分布在10～35 區(qū)間，抗體平均值表現(xiàn)在1.5～2。建立此標(biāo)準(zhǔn)區(qū)間，能夠為我們借助血清學(xué)的定期數(shù)據(jù)分析和監(jiān)測提供方便，通過對該場后備母豬藍耳病疫苗免疫后抗體水平變化規(guī)律的掌握，能夠在數(shù)據(jù)層面為后備母豬免疫方案的調(diào)整提供支持，同時，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果能對后備母豬群健康情況做有效分析，進而對其染病幾率有更多掌握，采取更具針對性的預(yù)防措施和飼養(yǎng)管理。

結(jié)果提示，該豬場通過對免疫后的后備母豬群進行定期抗體水平監(jiān)測，全年抽檢后備母豬藍耳抗體S/P 均值為1.96，11 次抽檢樣品之間離散度為15.2。實際生產(chǎn)中該場藍耳病長期保持穩(wěn)定狀態(tài)，也未出現(xiàn)大面積流行與暴發(fā)其他疾病的情況，這與豬場采用的免疫程序、效果，及飼養(yǎng)管理有著很大關(guān)系。

本研究所選取的豬場在生物安全的嚴(yán)格管理下，長時間使用固定免疫程序及固定品牌疫苗，改善后備豬舍的飼養(yǎng)環(huán)境，后備豬群自身適應(yīng)本場內(nèi)的豬藍耳病病毒，從而使得抗體水平整齊度升高，使免疫空白、免疫漏洞得以良好消除。