大球蓋菇工廠化栽培菌株篩選試驗(yàn)

嚴(yán)勝澤 詹美蓉 王圣銪 羅情情 王愛(ài)琴

（三明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院食用菌所，福建三明 365500）

大球蓋菇Stropharia rugoso-annulata，俗稱粗腿蘑、益腎菇、彩云菇，因其形似松茸，又名赤松茸，色澤艷麗、肉質(zhì)細(xì)嫩、蓋滑柄脆、清香可口、營(yíng)養(yǎng)豐富，是國(guó)際食用菌市場(chǎng)十大交易菇類之一，也是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）向發(fā)展中國(guó)家推薦栽培的特色品種之一[1]。大球蓋菇栽培料來(lái)源廣泛，如稻殼、稻草、玉米芯、木屑、桑枝、果枝等農(nóng)林廢棄物，且無(wú)須添加麩皮、米糠等價(jià)格較高的輔料，栽培成本較低。農(nóng)林廢棄物再利用栽培大球蓋菇是促進(jìn)農(nóng)業(yè)生態(tài)良性循環(huán)的典范[2-3]。目前，大球蓋菇栽培以室外發(fā)酵料栽培為主，產(chǎn)量不穩(wěn)，經(jīng)濟(jì)效益低。為了探索工廠化栽培大球蓋菇技術(shù)，提高大球蓋菇產(chǎn)量、經(jīng)濟(jì)效益，筆者進(jìn)行了大球蓋菇工廠化栽培菌株篩選試驗(yàn)，旨在篩選出適合工廠化栽培的高產(chǎn)菌株，以期為大球蓋菇工廠化栽培菌株的選用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試大球蓋菇菌株

D-1（河南省食用菌菌種供應(yīng)中心）、D-2（江蘇省高郵市聯(lián)誼食用菌技術(shù)推廣中心）、D-3（北京吉覃園科技有限公司）、D-9（將樂(lè)金土地生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司）、D-16（遼寧盤錦大球蓋菇合作社）。

1.2 栽培菇房設(shè)計(jì)與布局

1.2.1 出菇房結(jié)構(gòu)

菇房按工藝要求分為發(fā)菌房和出菇房。菇房平面寬2.6 m，長(zhǎng)4.8 m，高3.5 m。按照雙排庫(kù)，東西走向布局，分為10 間出菇房和兩間發(fā)菌房，中間公共通道長(zhǎng)8 m，寬1.5 m。公共通道墻體鋪貼阻燃、防潮聚乙烯發(fā)泡隔熱層，有利于隔熱保溫降低能耗。菇架均為5 層，層距0.35 m，雙列縱向排列，四周及中間留有過(guò)道。

1.2.2 設(shè)備

菇房有制冷、光照、通風(fēng)三種主要設(shè)備。各菇房配備1 臺(tái)5 匹的半封閉水冷制冷機(jī)組（沈陽(yáng)谷輪制冷機(jī)有限公司），配套1臺(tái)雙出風(fēng)（040內(nèi)螺紋高溫蒸發(fā)器）的吊頂冷風(fēng)機(jī)（嵊州市賽方制冷設(shè)備有限公司）；或2 間菇房配備1 臺(tái)8 匹的半封閉水冷制冷機(jī)組壓縮冷凝制冷機(jī)組，配套2 臺(tái)雙出風(fēng)的吊頂冷風(fēng)機(jī)。出菇房的天花板上及縱向二垛墻各安裝1盞40 W 日光燈。排風(fēng)口設(shè)在離地30 cm 左右，另在每間菇房進(jìn)門上方，離地3 m 左右的位置留有換氣窗，在菇房外墻安裝一臺(tái)進(jìn)氣風(fēng)扇，新鮮空氣經(jīng)室外打入菇房，廢氣由菇房的排氣扇排至室外。

1.3 培養(yǎng)基

母種生長(zhǎng)培養(yǎng)基（1 L）：蛋白胨1 g，酵母粉3 g，麥芽糖20 g，瓊脂20 g，水1000 mL，pH自然。配置好培養(yǎng)基分裝入18 mm×200 mm的試管中，每管10 mL，硅膠塞封口，121 ℃，滅菌20 min，冷卻擺斜面?zhèn)溆谩?/p>

測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度的菌絲培養(yǎng)基（1 L）：蛋白胨1 g，酵 母 粉3 g，麥 芽 糖20 g，瓊 脂20 g，水1000 mL，pH 自然。配置好培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，硅膠塞封口，121 ℃，滅菌20 min，在超凈工作臺(tái)（蘇州安泰SW-CJ-2FD）中倒入培養(yǎng)皿（北京白鯊生物科技有限公司，規(guī)格為90 mm×15 mm）中，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入15～20 mL。

栽培料培養(yǎng)基：木屑20%，谷殼20%，稻草40%，棉籽殼20%。料含水量70%～75%。配置：提前1～2 d 預(yù)濕稻草，木屑最好提前2～3 個(gè)月淋水、發(fā)酵，有利于滅菌，菌絲充分吸收營(yíng)養(yǎng)成分。按照培養(yǎng)料配方稱取主輔料混合均勻，加0.5% 石灰，調(diào)節(jié)好含水量，堆成高1～1.2 m，寬1.0～1.5 m 的料堆。當(dāng)距離堆頂20 cm 處料溫達(dá)65 ℃左右保持24 h 后翻堆，發(fā)酵階段共翻堆3～4 次，翻堆時(shí)視料水分適當(dāng)補(bǔ)水。每平方米投料折干30 kg。

覆土為肥沃、疏松的菜園土，曬干后加水?dāng)嚢瑁繛?0%左右，最后加入石灰調(diào)土為pH為6.0。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 母種培養(yǎng)

將活化后的菌種接入固體PDA 培養(yǎng)皿中心位置，30 ℃恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)28 d左右。每個(gè)菌株培養(yǎng)5個(gè)培養(yǎng)皿，重復(fù)3 次。比較菌絲萌發(fā)時(shí)間，菌絲長(zhǎng)勢(shì)，測(cè)定比較菌絲生長(zhǎng)速度。

菌絲平均生長(zhǎng)速度的測(cè)定：待菌絲生長(zhǎng)后，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，每7 d 測(cè)量1 次，取平均值，計(jì)算菌絲的平均生長(zhǎng)速度。

菌絲平均生長(zhǎng)速度=菌落直徑（cm）/菌絲生長(zhǎng)時(shí)間（d）。

1.4.2 原種和栽培種培養(yǎng)

1 支 母 種 接750 mL 原 種 瓶3～5 瓶，溫 度24～26 ℃，黑暗培養(yǎng)25～30 d。一瓶原種接栽培袋24～30袋，溫度24～26 ℃，黑暗培養(yǎng)25～30 d。

栽培種菌絲平均生長(zhǎng)速度測(cè)定：待菌絲封面后，每3 d觀察菌絲吃料情況，待菌絲吃料一定高度時(shí)開(kāi)始第一次畫(huà)線，菌絲滿袋后，進(jìn)行第二次畫(huà)線，并隨機(jī)選取3個(gè)位置，測(cè)量?jī)纱萎?huà)線間的生長(zhǎng)量，取平均值。

菌絲平均生長(zhǎng)速度=菌絲生長(zhǎng)量（cm）/兩次畫(huà)線間隔天數(shù)（d）。

1.4.3 栽培試驗(yàn)方法

采用塊栽方式。備一0.5 m×0.4 m×0.3 m 的木板模具，先將裁剪好的塑料膜鋪入模具內(nèi)，再鋪料播種。先鋪料10 cm 厚，然后播種（圖1），再鋪料10 cm，再播種一次。播種結(jié)束后，拆除模具，扎好塑料膜放在托盤上，送入發(fā)菌房培養(yǎng)菌絲。每個(gè)菌株播種5塊，重復(fù)3次，試驗(yàn)共75塊。

圖1 鋪料播種（白色為菌種）

1.4.4 發(fā)菌管理

發(fā)菌房?jī)?nèi)溫度23～25 ℃，相對(duì)濕度70%～80%，無(wú)光照。培養(yǎng)7 d 左右，查看菌絲生長(zhǎng)情況和培養(yǎng)料內(nèi)溫度，保持料內(nèi)溫度不超過(guò)26 ℃。

播種后1～2 d 菌絲開(kāi)始定植，50～60 d 后，待大部分料快的菌絲長(zhǎng)透料三分之二后開(kāi)始覆土。覆土后料溫控制25 ℃以下，室溫控制在19～21 ℃，相對(duì)濕度80%～85%，控制CO2質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2000 mg/kg以內(nèi)。正常情況下覆土后3～5 d 能見(jiàn)到菌絲進(jìn)入覆土層，逐漸轉(zhuǎn)入生殖生長(zhǎng)階段。

1.4.5 出菇管理

按一間出菇房15 塊，分3 間出菇房進(jìn)行出菇管理。覆土后5～10 d 便可出菇。此階段的管理是大球蓋菇的又一關(guān)鍵時(shí)期，控制溫度10～15 ℃，相對(duì)濕度90%～95%，CO2質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2000 mg/kg 以內(nèi)，光照500～700 lx，每天光照8 h。

1.4.6 采收

當(dāng)子實(shí)體的菌褶尚未破裂或剛破裂，菌蓋呈鐘形時(shí)為采收期，最遲應(yīng)在菌蓋內(nèi)卷，菌褶呈灰白色時(shí)采收。采收時(shí)，用左手壓住物料，右手拇指、食指抓住菇體的下部，輕輕扭轉(zhuǎn)一下，松動(dòng)后再向上拔，要注意不要松動(dòng)周圍的小菇蕾，以免影響下潮菇的生長(zhǎng)。采收后，須清理床面殘留物，用土補(bǔ)平菇穴。記錄各菌株產(chǎn)量，并計(jì)算生物學(xué)效率。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試大球蓋菇菌株母種菌絲生長(zhǎng)比較

由表1可知，在母種培養(yǎng)基上，供試大球蓋菇菌株均在24 h內(nèi)萌發(fā)；D-16菌株菌絲平均生長(zhǎng)速度最快（0.313 cm/d），但供試菌株間菌絲平均生長(zhǎng)速度沒(méi)有顯著性差異；供試菌株菌絲均生長(zhǎng)濃密、潔白，長(zhǎng)勢(shì)旺盛。

表1 供試大球蓋菇菌株母種菌絲生長(zhǎng)比較

2.2 供試大球蓋菇菌株栽培種菌絲生長(zhǎng)比較

由表2可知，在栽培種培養(yǎng)基中，大球蓋菇菌株D-3 菌絲生長(zhǎng)速度最快，日均生長(zhǎng)速度為1.843 mm/d；供試菌株菌絲生長(zhǎng)速度排序：D-3 ＞D-16＞D-9＞D-1＞D-2。D-3、D-16菌株菌絲生長(zhǎng)濃密、潔白，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，D-9、D-1、D-2生長(zhǎng)較旺盛，潔白。

表2 供試大球蓋菇菌株栽培種菌絲生長(zhǎng)比較

圖2 覆膜培養(yǎng)菌絲

圖3 出菇階段

2.3 供試大球蓋菇菌株產(chǎn)量

由表3 可知，供試菌株產(chǎn)量由高到低排序：D-16＞D-3＞D-9＞D-1＞D-2，其中菌株D-16 產(chǎn)量最高，為15.96 kg/m2。

表3 供試大球蓋菇菌株產(chǎn)量比較

3 小結(jié)與討論

大球蓋菇具有非常廣闊的發(fā)展前景，該菇栽培技術(shù)簡(jiǎn)單粗放，具有極強(qiáng)的抗雜菌能力，栽培成功率高，栽培原料來(lái)源廣，但是，其栽培模式多以傳統(tǒng)栽培模式為主，費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，且受自然環(huán)境影響較大[4]。試驗(yàn)采用工廠化塊栽模式，成功地篩選出了兩株性狀優(yōu)良、產(chǎn)量較高的大球蓋菇菌株，為進(jìn)一步研究大球蓋菇工廠化栽培技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。但是，由于現(xiàn)有栽培水平較為粗放，受到各種環(huán)境因素的影響，加之大球蓋菇自身生長(zhǎng)特性的原因，導(dǎo)致采菇周期過(guò)長(zhǎng)，大大地增加了工廠化栽培的成本。因此，縮短采菇周期，提高出菇產(chǎn)量，是今后工廠化栽培大球蓋菇的主要研究方向。