深圳寶安區(qū)無償獻(xiàn)血單項HBV核酸檢測反應(yīng)性結(jié)果分析*

劉宜仲,黃守民,王瑛琨,張 煜,劉藝慶,杜飛嫦

深圳市寶安區(qū)中心血站，廣東深圳 518101

乙型肝炎病毒(HBV)簡稱乙肝病毒，為直徑22～42 nm的球狀顆粒，屬環(huán)狀雙鏈DNA病毒，主要通過血液傳播(輸血和血液制品)，是引起病毒性肝炎的主要病原體之一，可引起全身各系統(tǒng)的一系列不適癥狀，甚至可能發(fā)展為肝硬化、肝癌[1]。我國是HBV高流行地區(qū)，據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心數(shù)據(jù)估計我國人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)流行率為5%～6%[2]。目前，血站基本使用2遍酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑檢測HBsAg，1遍核酸試劑檢測HBV DNA。2019年4月12日中國輸血協(xié)會頒布團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《血液篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊指南T/CSBT 002-2019》[3]，其HBV反應(yīng)性獻(xiàn)血者的歸隊策略只適用于HBV血清學(xué)檢測單試劑反應(yīng)性、核酸檢測(NAT)無反應(yīng)性的獻(xiàn)血者，HBV DNA或核酸聯(lián)合檢測[HBV DNA、丙型肝炎病毒(HCV) RNA、人類免疫缺陷病毒(HIV) RNA]反應(yīng)性的獻(xiàn)血者會被永久屏蔽，但是在血站實際工作中有很多HBV血清學(xué)檢測無反應(yīng)性、HBV DNA或核酸聯(lián)合檢測反應(yīng)性的獻(xiàn)血標(biāo)本有待開展確認(rèn)及隨訪歸隊試驗驗證其是否為NAT假反應(yīng)性。本文對單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)，為單項NAT反應(yīng)性無償獻(xiàn)血人群歸隊的可能性分析提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1材料來源 2017年1月至2020年6月無償獻(xiàn)血標(biāo)本共126 455份；2018年6月至2019年11月單項NAT反應(yīng)性即HBsAg無反應(yīng)性、核酸聯(lián)合檢測(HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA)反應(yīng)性標(biāo)本210份。

1.2儀器與試劑 全自動加樣儀(愛康Xantus) 、全自動酶聯(lián)免疫分析儀(HAMILTON FAME24/20)、全自動核酸檢測分析儀(Grifols Panther)、全自動核酸檢測分析儀(Grifols Tigris)。ELISA試劑：HBsAg檢測試劑盒(萬泰、索靈)；HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物試劑：乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、乙型肝炎E抗體(HBeAb)、乙型肝炎核心抗體(HBcAb)檢測試劑盒，均為萬泰檢測試劑。HBsAg確認(rèn)試驗試劑：HBsAg確認(rèn)試劑盒(珠海麗珠)。NAT試劑：Procleix Ultrio Plus Assay核酸聯(lián)合檢測試劑盒及其核酸鑒別試劑盒，Procleix Ultrio Elite Assay核酸聯(lián)合檢測試劑盒及其核酸鑒別試劑盒。以上試劑盒均經(jīng)中國食品藥品檢定研究院檢驗合格并在有效期內(nèi)，實驗操作均嚴(yán)格執(zhí)行說明書要求。

1.3方法 對無償獻(xiàn)血標(biāo)本用ELISA檢測HBsAg，核酸使用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)(TMA)對標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA 3個項目聯(lián)合檢測，對HBsAg無反應(yīng)性、單項NAT反應(yīng)性的部分血液標(biāo)本進(jìn)行HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物(HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及核酸鑒別檢測；對核酸鑒別無反應(yīng)性的標(biāo)本再進(jìn)行HBsAg確認(rèn)試驗。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HBV篩查結(jié)果情況 2017-2020年無償獻(xiàn)血單項NAT平均反應(yīng)率為0.43%，具體每年無償獻(xiàn)血核酸聯(lián)合檢測反應(yīng)性標(biāo)本情況見表1。

表1 每年無償獻(xiàn)血核酸聯(lián)合檢測反應(yīng)性標(biāo)本情況[n(%)]

2.2HBV血清學(xué)檢測及核酸鑒別結(jié)果 對538份單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中210份標(biāo)本(2018年6月至2019年11月)進(jìn)行HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物檢測，71.90%的標(biāo)本HBsAb反應(yīng)性，其中僅HBsAb反應(yīng)性的標(biāo)本占5.24%；有92.86%的標(biāo)本HBcAb反應(yīng)性。在這210份標(biāo)本中，有75.24%(158/210)核酸鑒別為無反應(yīng)性，HBV DNA反應(yīng)率為24.29%(51/210)，HCV RNA反應(yīng)率為0.48%(1/210)，見表2。

表2 單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本的HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物檢測及核酸鑒別試驗結(jié)果

2.3HBsAg確認(rèn)試驗結(jié)果 核酸鑒別為無反應(yīng)性的單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中，HBsAg確認(rèn)試驗無反應(yīng)性的比例占99.37%(157/158)。

3 討 論

本血站ELISA與NAT同時陽性的標(biāo)本占0.36%，根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019版)》[4]獻(xiàn)血者管理規(guī)定，獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)血液的檢測結(jié)果中，乙肝、丙肝、艾滋病任意一項中血清學(xué)檢測和NAT同時呈反應(yīng)性，則永久性屏蔽，此獻(xiàn)血人群不適宜歸隊，需做好解釋工作。而團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《血液篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊指南T/CSBT002-2019》[3]規(guī)定可歸隊的是單試劑HBsAg反應(yīng)性、NAT無反應(yīng)性的獻(xiàn)血者，而實際工作中有一部分HBsAg無反應(yīng)性、NAT反應(yīng)性的標(biāo)本，本血站2017-2020年這部分標(biāo)本比例為0.43%，說明這部分獻(xiàn)血者人數(shù)不少。本研究的210份單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中，核酸鑒別有75.24%為無反應(yīng)性且HBsAg乙肝確認(rèn)試驗(99.37%)幾乎為無反應(yīng)性，提示核酸聯(lián)合檢測存在假陽性的可能。因此，血站對單項NAT反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行歸隊有現(xiàn)實的研究意義。陳錦艷等[5]認(rèn)為，無償獻(xiàn)血假反應(yīng)性會使獻(xiàn)血者產(chǎn)生一定的負(fù)面心理影響，對這一部分獻(xiàn)血者可增加專業(yè)的心理干預(yù)及開展確診試驗，將兩項結(jié)果反饋給獻(xiàn)血者可減少其心理負(fù)擔(dān)。鑒于單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中可能存在的假反應(yīng)性結(jié)果，也應(yīng)對這部分獻(xiàn)血者進(jìn)行鑒別、確認(rèn)及歸隊，可給予獻(xiàn)血者更多的解釋及安慰，減少其心理困擾，針對單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本的歸隊研究體現(xiàn)了血站人文關(guān)懷和對獻(xiàn)血者權(quán)益的保護(hù)。

但單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中，也存在NAT漏檢或者患者可能處于HBV窗口期感染的情況，應(yīng)謹(jǐn)慎歸隊。程衛(wèi)芳等[6]分析28例核酸聯(lián)合檢測或HBV DNA單反應(yīng)性的獻(xiàn)血者歸隊，兩次隨訪NAT仍出現(xiàn)至少1次反應(yīng)性者占75.00%，這部分獻(xiàn)血者經(jīng)分析均為HBV隱匿性感染，提示單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本中能重歸獻(xiàn)血者隊伍者并不多。楊轉(zhuǎn)笑等[7]研究ELISA檢測無反應(yīng)性而NAT反應(yīng)性的標(biāo)本，19例無門檻自愿歸隊模式獻(xiàn)血者有3例HBsAg轉(zhuǎn)陽，提示無門檻自愿歸隊模式獻(xiàn)血者存在窗口期感染風(fēng)險；26例獻(xiàn)血10次以上歸隊模式獻(xiàn)血者中88.46%歸隊成功，提示獻(xiàn)血次數(shù)更多，歸隊成功率越高。本研究核酸聯(lián)合檢測無反應(yīng)性的標(biāo)本中有92.86%的標(biāo)本HBcAb反應(yīng)性，提示大部分核酸聯(lián)合檢測無反應(yīng)性獻(xiàn)血者有或有過感染的風(fēng)險，因此，為了保障用血安全，應(yīng)謹(jǐn)慎歸隊及建立更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臍w隊模式做好歸隊把關(guān)。

單項NAT反應(yīng)性的獻(xiàn)血者中有較高比例(71.90%)出現(xiàn)HBsAb反應(yīng)性，HBsAb是保護(hù)性抗體，有研究認(rèn)為，獻(xiàn)血者的歸隊評價指標(biāo)可能需要附加HBsAb(定量)檢測[8]。HBsAb單反應(yīng)性獻(xiàn)血者的HBV DNA反應(yīng)性有可能是由于獻(xiàn)血者打了乙肝疫苗后，HBsAb中和HBV的免疫復(fù)合物在被免疫細(xì)胞吞噬前被檢測到[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，HBV核酸聯(lián)合檢測反應(yīng)性、HBcAb無反應(yīng)性、HBsAb反應(yīng)性的11份標(biāo)本中，其核酸鑒別HBV DNA反應(yīng)的標(biāo)本僅占1份，提示HBV核酸聯(lián)合檢測反應(yīng)性、HBcAb無反應(yīng)性、HBsAb反應(yīng)性的這部分獻(xiàn)血者NAT假反應(yīng)性的可能性較大，其未感染過HBV，同時帶有保護(hù)性抗體HBsAb，這部分人群值得進(jìn)行進(jìn)一步的隨訪和歸隊確認(rèn)。本研究中有1份標(biāo)本HBsAg、HBeAb無反應(yīng)性,HBsAb、HBeAg、HBcAb反應(yīng)性,有研究認(rèn)為，這種結(jié)果可能是高水平HBsAg導(dǎo)致鉤狀效應(yīng)，使HBsAg出現(xiàn)假陰性,或可能是HBsAg水平低于檢測閾值導(dǎo)致[10]。也有研究報道，乙肝患者在治療過程中HBsAg水平處于一個波動狀態(tài),抗病毒治療可促進(jìn)乙肝患者HBsAg轉(zhuǎn)為無反應(yīng)性[11]。HBsAg無反應(yīng)性,HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb反應(yīng)性標(biāo)本在臨床檢驗上非常少見，本研究有1份此類標(biāo)本，但其核酸鑒別結(jié)果為HBV DNA反應(yīng)性，這可能也是高水平HBsAg導(dǎo)致的血清學(xué)假陰性結(jié)果，或者是接種了乙肝疫苗產(chǎn)生了抗體。有血液中心把HBcAb納入血液篩查項目，把HBcAb檢測作為獻(xiàn)血者歸隊策略的一項重要的檢測方法[12]。日本在獻(xiàn)血者篩查中增加了HBsAb和HBcAb檢測，對高滴度HBsAb低滴度HBcAb的獻(xiàn)血者進(jìn)行歸隊，而對低滴度HBsAb高滴度HBcAb的獻(xiàn)血者進(jìn)行屏蔽[13]。對單項NAT反應(yīng)性無償獻(xiàn)血人群歸隊的可能性研究中增加HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物檢測，可有助于更加了解獻(xiàn)血者情況，以及給獻(xiàn)血者結(jié)果回饋解釋提供更多的數(shù)據(jù)。

本文對單項NAT反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行HBV血清學(xué)4項標(biāo)志物檢測及核酸鑒別試驗，并對核酸鑒別無反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行HBsAg確認(rèn)試驗，分析核酸聯(lián)合檢測存在假反應(yīng)性的可能性，綜合分析單項NAT反應(yīng)性無償獻(xiàn)血人群歸隊的可能性，對擴(kuò)大獻(xiàn)血隊伍和對獻(xiàn)血者結(jié)果回饋解釋有一定意義。但為保障用血安全，應(yīng)謹(jǐn)慎歸隊[14]。從血清學(xué)檢測、NAT及確認(rèn)試驗結(jié)果初步探討獻(xiàn)血者的感染狀況，仍在流行病學(xué)調(diào)查方面存在不足。下一步可對獻(xiàn)血者增加流行病學(xué)及臨床癥狀調(diào)查，進(jìn)行多次追蹤檢測，進(jìn)一步補(bǔ)充完善信息，提供更加全面的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；同時可補(bǔ)充HBV檢測的其他方法(如化學(xué)發(fā)光等)及增加獻(xiàn)血者獻(xiàn)血次數(shù)的歸隊門檻[7]等，以建立更科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膯雾桸AT反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊策略。