榆銀蝦康散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱洪洋 ， 張 正 ， 王春元 ， 王印庚 ， 袁春營(yíng) ， 于永翔 ， 張 楊 ， 趙偉志

(1.天津科技大學(xué)海洋與環(huán)境學(xué)院 ， 天津 濱海新區(qū) 300450 ； 2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究 ， 山東 青島 266000 ； 3. 海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室 青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室 ， 山東 青島 266000)

2020年我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖因病害造成的經(jīng)濟(jì)損失約589億元，約占水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)值的5.8%[1]。急性肝胰腺壞死病(Acute hepatopancreas necrosis disease,AHPND)是影響國(guó)內(nèi)外對(duì)蝦健康的最嚴(yán)重的疾病之一，其特點(diǎn)是傳播速度快、流行范圍廣、死亡率高[2]。AHPND已經(jīng)給全球的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3-7]，目前主要采用抗生素等化學(xué)類藥物進(jìn)行治療，但化學(xué)藥物長(zhǎng)期、大量的應(yīng)用，會(huì)帶來(lái)環(huán)境污染、藥物殘留等諸多問(wèn)題，并加速耐藥菌株的產(chǎn)生。中草藥具有純天然、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，將是未來(lái)漁藥發(fā)展的一個(gè)重要方向。榆銀蝦康散是針對(duì)海水養(yǎng)殖致病性弧菌，通過(guò)科學(xué)的藥物篩選及合理組方研制出的中藥散劑，具有環(huán)境污染小，藥物殘留低，不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，通過(guò)藥效學(xué)研究證實(shí)其對(duì)副溶血弧菌具有良好的抑制作用[8-10]。中藥散劑的質(zhì)量控制一般從性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等方面進(jìn)行[11-14]。因此，建立榆銀蝦康散簡(jiǎn)便、可行的檢測(cè)方法對(duì)制劑生產(chǎn)的質(zhì)量控制具有重要意義。為了有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用薄層色譜法(Thin layer chromatography,TLC)定性鑒別復(fù)方中的地榆、黃柏、黃芩和山銀花，采用光散射法對(duì)散劑粒度分布進(jìn)行檢查，使用高效液相色譜法(High performance liquid chromatogrphy,HPLC)測(cè)定復(fù)方中黃芩苷的含量，以期建立榆銀蝦康散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品與試劑 榆銀蝦康散，規(guī)格：100 g/袋，批號(hào)為20210717、20210718、20210719。綠原酸對(duì)照品，批號(hào)為110753-202018；黃芩苷對(duì)照品，批號(hào)為110715-202122；沒(méi)食子酸對(duì)照品，批號(hào)為110831-201906；鹽酸小檗堿對(duì)照品，批號(hào)為110713-202015；地榆對(duì)照藥材：1 g/支，批號(hào)為121286-201703；山銀花對(duì)照藥材：1 g/支，批號(hào)為121595-201202；黃芩對(duì)照藥材：0.5 g/支，批號(hào)為120955-201810；黃柏對(duì)照藥材：0.5 g/支，批號(hào)為121510-201807；以上均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

無(wú)水乙醇：HPLC級(jí)，科密歐。甲醇：HPLC級(jí)，Supelco。磷酸：HPLC級(jí)，F(xiàn)isher Chemical。甲苯，HPLC級(jí)，購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠。丙酮、鹽酸、乙酸乙酯、甲酸、乙醚、乙醇、甲醇、三氯化鐵，均為AR級(jí)，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；二氧化硅：儀器標(biāo)準(zhǔn)樣，累計(jì)含量為50%時(shí)對(duì)應(yīng)的粒徑D(50)的標(biāo)準(zhǔn)值為50 μm，美國(guó)Microtrac公司產(chǎn)品。

1.2 主要儀器 KQ5200型超聲波清洗器；XSE205DU精密天平(梅特勒-托利多有限公司)；LC-20A液相色譜儀(日本島津公司)；Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SPD-20A檢測(cè)器，SPD-M20A檢測(cè)器(日本島津公司)；LabSolutions色譜工作站；platisil-ODS C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(上海迪馬科技有限公司)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；薄層色譜攝影儀(天津市思利達(dá)科技有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 薄層色譜鑒別

1.3.1.1 地榆的鑒別 取榆銀蝦康散(批號(hào)為20210717、20210718、20210719)粉末3 g，按照2020版《中華人民共和國(guó)獸藥典》二部地榆項(xiàng)下方法處理，最后加2 mL甲醇溶解殘?jiān)鳛楣┰嚻啡芤?。取地榆?duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取沒(méi)食子酸對(duì)照品1 mg，加甲醇制成0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。按榆銀蝦康散成分比例，制成不含地榆的榆銀蝦康散，按照供試品溶液方法，制備出地榆陰性對(duì)照溶液。參照2020版《中華人民共和國(guó)獸藥典》二部地榆項(xiàng)下方法進(jìn)行展開(kāi)并檢視。

1.3.1.2 黃柏的鑒別 取榆銀蝦康散(批號(hào)為20210717、20210718、20210719)粉末0.4 g，加10 mL甲醇后加熱回流30 min，過(guò)濾殘?jiān)?，取濾液作為供試品溶液。取黃柏對(duì)照藥材0.1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。精密稱定鹽酸小檗堿對(duì)照品1 mg，加甲醇制成0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。按榆銀蝦康散成分比例，取除黃柏外的其余藥材，制成不含黃柏的榆銀蝦康散，按照供試品溶液方法，制備出黃柏陰性對(duì)照溶液。吸取上述3種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下觀察。

1.3.1.3 黃芩和山銀花的鑒別 取榆銀蝦康散(批號(hào)為20210717、20210718、20210719)粉末2 g，加15 mL甲醇后靜置12 h，過(guò)濾后將濾液揮干，再加5 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。分別取黃芩藥材粉末0.6 g和山銀花藥材粉末0.2 g，按照供試品溶液方法制成對(duì)照藥材溶液。取黃芩苷對(duì)照品和綠原酸對(duì)照品各1 mg，分別加甲醇制成1 mg/mL的對(duì)照品溶液。按榆銀蝦康散成分比例，分別取除黃芩、黃柏、山銀花、山銀花和黃柏外的其余藥材，按工藝要求制成不含這些藥材的陰性對(duì)照樣品，按照供試品溶液制備方法操作，制得缺少黃芩、黃柏、山銀花、山銀花和黃柏的陰性對(duì)照溶液。參照2020版《中華人民共和國(guó)獸藥典》二部銀黃提取物口服液項(xiàng)下方法進(jìn)行展開(kāi)并檢視。

1.3.2 粒度分布檢查 取適量榆銀蝦康散(批號(hào)為20210717、20210718、20210719)置于激光散射粒度分析儀的樣品槽中，使樣品平鋪均勻，檢測(cè)粒度分布。設(shè)備參數(shù)：空氣壓力：20psi；折光率：2.0；Transpatency方式：Transparent；Distribution：Number；Shape：Irregular；進(jìn)樣時(shí)間：5 s。每個(gè)批次樣品分別測(cè)定3次，取平均值。

1.3.3 黃芩苷的含量測(cè)定

1.3.3.1 色譜條件 用Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫為30 ℃，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；流動(dòng)相比例為甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)。

1.3.3.2 供試品溶液的制備 研究以下2種提取方法對(duì)提取效率的影響。(1)加熱回流提?。悍謩e取本品粉末3份，每份精密稱定約0.5 g，加70%乙醇40 mL后加熱回流3 h，冷卻后過(guò)濾，濾液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇定容，搖勻，精密量取1 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻即得。(2)超聲提取：分別取本品粉末8份，每份精密稱定約0.5 g，置100 mL量瓶中，加 70%乙醇70 mL，分別超聲處理20、30、40 min和60 min，冷卻后用70%乙醇定容，搖勻，濾過(guò)，精密量取1 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻即得。

精密吸取上述供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。

1.3.3.3 對(duì)照品溶液 精密稱定黃芩苷對(duì)照品10.42 mg，加甲醇制成每1 mL含59.65 μg黃芩苷的溶液，即得。

1.3.3.4 陰性對(duì)照品溶液 按榆銀蝦康散成分比例，制備不含黃芩的榆銀蝦康散，按1.3.3.2中確定的制備方法配制缺少黃芩的陰性對(duì)照品溶液。

1.3.3.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取上述3種溶液各10 μL測(cè)定，考察供試品溶液的理論塔板數(shù)、分離度、專屬性。

1.3.3.6 線性關(guān)系考察 精確稱取黃芩苷對(duì)照品10.42 mg(按純度95.4%)，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，搖勻作為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。分別取適量?jī)?chǔ)備液，用甲醇稀釋成9.94、29.82、59.65、79.53 μg/mL和99.41 μg/mL一系列濃度的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3.7 精密度試驗(yàn) 吸取濃度為59.65 μg/mL的對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行儀器精密度試驗(yàn)。在同一實(shí)驗(yàn)室，用不同儀器、不同時(shí)間、不同操作者考察，分別用島津LC-20A SPD-M20A高效液相色譜儀和島津LC-20A SPD-20A高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，計(jì)算黃芩苷含量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。

1.3.3.8 日間穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取樣品0.5 g，按1.3.3.2確定的方法制備供試品溶液，在制備后0、2、4、8 h和12 h各進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積，計(jì)算精密度。

1.3.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取樣品6份，每份精密稱取0.5 g，按1.3.3.2確定的方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣10 μL，檢測(cè)并記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.3.3.10 加樣回收率試驗(yàn) 取本品(黃芩苷含量44.97 mg/g)約0.25 g，精密稱取6份，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品12 mg，制備供試品溶液，進(jìn)樣，計(jì)算回收率。

1.3.3.11 耐用性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按1.3.3.2確定的方法制備供試品溶液，分別考察流動(dòng)相比例變化±5%、柱溫變化±5 ℃、流速±0.1 mL/min對(duì)樣品色譜行為的影響，記錄色譜圖。觀察黃芩苷和臨近峰的基線分離情況。

1.3.3.12 榆銀蝦康散樣品測(cè)定 取榆銀蝦康散樣品3批，各批次取平行樣品2份，按1.3.3.2確定的方法制備供試品溶液，每份樣品進(jìn)樣量10 μL，記錄峰面積并計(jì)算黃芩苷含量。

2 結(jié)果

2.1 地榆的薄層色譜鑒別 供試品溶液與對(duì)照品溶液和對(duì)照藥材溶液在色譜中同一位置顯示出一樣顏色的斑點(diǎn)，而缺少地榆的榆銀蝦康散陰性對(duì)照溶液沒(méi)有相應(yīng)的斑點(diǎn)(圖1)。

圖1 地榆的薄層色譜圖Fig.1 Thin-layer chromatography of Sanguisorbae radix1～3：供試品溶液(批號(hào)：20210717，20210718，20210719)； 4：沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液； 5：地榆對(duì)照藥材溶液； 6：缺少地榆的陰性對(duì)照溶液1-3:Test solution (batch number:20210717,20210718,20210719); 4:Control solution of gallic acid; 5:Control herbs solution of Sanguisorbae radix; 6:Negative control solution without Sanguisorbae radix

2.2 黃柏的薄層色譜鑒別 供試品溶液與對(duì)照品溶液和對(duì)照藥材溶液在色譜中同一位置顯示出一樣的熒光斑點(diǎn)，而缺少黃柏的榆銀蝦康散陰性對(duì)照溶液沒(méi)有相應(yīng)的斑點(diǎn)(圖2)。

圖2 黃柏的薄層色譜圖Fig.2 Thin-layer chromatography of P.cidnensis cortex1～3：供試品溶液(批號(hào)：20210717、 20210718、 20210719)； 4：鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液； 5：黃柏對(duì)照藥材溶液； 6：缺少黃柏的陰性對(duì)照溶液1-3:Test solution (batch number:20210717,20210718,20210719); 4:Control solution of berberine hydrochloride; 5:Control herbs solution of P.cidnensis cortex; 6:Negative control solution without P.cidnensis cortex

2.3 黃芩和山銀花的薄層色譜鑒別 供試品溶液與黃芩苷對(duì)照品溶液和黃芩對(duì)照藥材溶液在色譜中同一位置顯示出一樣的暗色斑點(diǎn)，且缺少黃芩的陰性對(duì)照溶液沒(méi)有相應(yīng)的斑點(diǎn)；供試品溶液與綠原酸對(duì)照品溶液和山銀花對(duì)照藥材溶液在色譜中同一位置顯示出一樣的熒光斑點(diǎn)，且缺少山銀花陰性對(duì)照溶液和缺少黃柏陰性對(duì)照溶液都有熒光強(qiáng)度較暗的斑點(diǎn)，缺少山銀花和黃柏陰性對(duì)照溶液無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)(圖3)。

圖3 黃芩和山銀花的薄層色譜圖Fig.3 Thin-layer chromatography of Scutellariae radix and L. flos1～3：供試品溶液(批號(hào)：20210717、 20210718、 20210719)； 4：黃芩苷對(duì)照品溶液； 5：黃芩對(duì)照藥材溶液； 6：缺少黃芩陰性對(duì)照溶液； 7：綠原酸對(duì)照品溶液； 8：山銀花對(duì)照藥材溶液； 9：缺少山銀花陰性對(duì)照溶液； 10：缺少黃柏陰性對(duì)照溶液； 11：缺少黃柏和山銀花陰性對(duì)照溶液1-3:Test solution (batch number:20210717,20210718,20210719); 4:Control solution of baicalin; 5:Control herbs solution of Scutellariae radix; 6:Negative control solution without Scutellariae radix; 7:Control solution of chlorogenic acid; 8:Control herbs solution of L. flos; 9:Negative control solution without L. flos; 10:Negative control solution without P. cidnensis cortex; 11:Negative control solution without P. cidnensis cortex and L. flos

2.4 粒度分布檢查 3批樣品粒度分布檢查結(jié)果顯示，<75 μm的顆粒比例分別為99.4%、99.0%和99.0%，RSD為0.22%。結(jié)果表明，3批散劑的顆粒均勻度相對(duì)較好，且均符合粒度的要求。

2.5 黃芩苷的含量測(cè)定

2.5.1 樣品溶液制備方法考察 由表1可知，超聲提取的方法不穩(wěn)定，供試品溶液的制備方法確定為：精密稱定本品粉末約0.5 g，加40 mL 70%的乙醇溶液，加熱回流3 h，放置冷卻后過(guò)濾至100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇定容。精密量取1 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得。

表1 供試品溶液不同提取方法考察Table 1 Investigation on different extraction methods of test solution

2.5.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)按黃芩苷計(jì)為4 239，符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》規(guī)定不低于2 500。專屬性考察結(jié)果如圖4所示，在1.3.3.1色譜條件下樣品中黃芩苷與相鄰雜質(zhì)峰分離良好，陰性對(duì)照在黃芩苷出峰時(shí)間無(wú)色譜峰，檢測(cè)無(wú)干擾。

圖4 黃芩苷的系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram of system adaptability test of baicalinA：黃芩苷對(duì)照品溶液； B：缺少黃芩的陰性對(duì)照溶液； C：供試品溶液A:Control solution of baicalin; B:Negative control solution without Scutellariae radix; C:Test solution

2.5.3 線性關(guān)系考察 以黃芩苷進(jìn)樣含量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃芩苷在9.94～99.41 μg/mL范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與峰面積積分值線性關(guān)系良好：Y=36 881X-29 331(R2=0.999 6)(圖5)。

圖5 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of baicalin

2.5.4 精密度試驗(yàn) 經(jīng)計(jì)算RSD為0.19%(n=6)，符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》規(guī)定RSD不大于2.0%，表明該方法具有良好的精密度。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，用不同儀器、不同時(shí)間、不同操作者，按建立的色譜條件，分別用LC-20A SPD-20A高效液相色譜儀和島津LC-20A SPD-M20A高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，經(jīng)計(jì)算RSD為0.62%，表明中間精密度良好。

2.5.5 日間穩(wěn)定性試驗(yàn) 經(jīng)計(jì)算RSD為0.14%，表明12 h內(nèi)樣品具有良好的穩(wěn)定性。

2.5.6 重復(fù)性試驗(yàn) 測(cè)定的黃芩苷平均含量為41.89 mg/g，RSD為1.14%，表明該檢測(cè)方法重復(fù)性良好。

2.5.7 加樣回收率試驗(yàn) 結(jié)果如表2所示，平均加樣回收率為100.95%，RSD為0.45%，表明該方法加樣回收率良好。

表2 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)Table 2 Recovery test of baicalin

2.5.8 耐用性試驗(yàn) 結(jié)果表明，柱溫分別為20 ℃、25 ℃、30 ℃時(shí)RSD為0.50%；流動(dòng)相比例分別為甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)、甲醇∶水∶磷酸(45∶55∶0.2)、甲醇∶水∶磷酸(50∶50∶0.2)時(shí)，RSD為2.17%；流速分別為0.9 mL/min、1.0 mL/min、1.1 mL/min時(shí)，RSD為9.16%，峰面積偏差或含量變化較小，能保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.5.9 榆銀蝦康散樣品測(cè)定 經(jīng)測(cè)定，3批榆銀蝦康散的黃芩苷含量分別為40.77、40.08 mg/g和38.62 mg/g,表明不同批號(hào)的榆銀蝦康散中黃芩苷的含量穩(wěn)定性較好。

3 討論

中藥處方的定性鑒別研究主要目的是保證在生產(chǎn)流通過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)少藥、偽藥、違規(guī)添加等現(xiàn)象。在中藥處方的鑒別研究中原則上應(yīng)對(duì)處方中所有藥味進(jìn)行鑒別研究，《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版記載的154種散劑中主要鑒別方法為顯微鑒別、薄層色譜鑒別和理化鑒別?？紤]到榆銀蝦康散是由地榆、黃柏、黃芩和山銀花四味中藥經(jīng)粉碎后通過(guò)200目篩而制成的散劑，部分植物細(xì)胞已破碎，不能完整體現(xiàn)單味藥材的顯微特征，重現(xiàn)性和專屬性不強(qiáng)。因此，本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不采用顯微鑒別的方法。而薄層色譜法具有直觀性強(qiáng)、分離度好、簡(jiǎn)單易操作等優(yōu)點(diǎn)，所以在榆銀蝦康散鑒別研究過(guò)程中只采用薄層色譜法對(duì)處方中四味藥進(jìn)行定性鑒別。在黃柏的鑒別研究過(guò)程中，首先采用《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版二部黃柏項(xiàng)下的薄層鑒別方法，以鹽酸黃柏堿作為對(duì)照品[15]，發(fā)現(xiàn)該方法操作復(fù)雜，且供試品色譜中鹽酸黃柏堿斑點(diǎn)不清晰；其后，嘗試《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版一部復(fù)方黃柏液涂劑項(xiàng)下的鑒別方法，改用鹽酸小檗堿作為對(duì)照品[16]，該方法供試品斑點(diǎn)清晰，并獲得了良好的重現(xiàn)性。需要特別指出的是，在山銀花的鑒別研究中，采用綠原酸對(duì)山銀花進(jìn)行鑒別[15,17]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，因黃柏中也含有少量綠原酸，導(dǎo)致缺少山銀花的陰性對(duì)照溶液(含有黃柏)也出現(xiàn)較暗的熒光斑點(diǎn)，所以對(duì)其山銀花中綠原酸鑒別稍有干擾。但因黃柏出現(xiàn)的熒光斑點(diǎn)亮度大大低于因山銀花出現(xiàn)的熒光斑點(diǎn)，所以，該方法仍可用作榆銀蝦康散中山銀花的鑒別。

根據(jù)已有研究報(bào)道，散劑降低粒度可以提高有效成分溶出率、增加體內(nèi)吸收、提高生物利用度，最終達(dá)到增強(qiáng)療效的目的[18-19]。從對(duì)蝦生物學(xué)特征來(lái)看，其消化道短，那么藥物吸收時(shí)間也較短；為此，榆銀蝦康散的粒度越細(xì)其療效越好。本課題組制成不同粒度的榆銀蝦康散藥液，對(duì)AHPND致病原副溶血弧菌的體外抑菌效果進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示其抑菌效果為300目>200目>80目(相關(guān)結(jié)果將另行發(fā)表)。《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版關(guān)于散劑粒度的要求為通過(guò)5號(hào)篩(80目)的粉末不少于95%，微粉劑的粒度要求為小于48 μm(300目)的粉末不少于95%。考慮到微粉劑生產(chǎn)成本較高，所以榆銀蝦康散的粒度選定為200目，該粒度范圍仍屬于散劑。

除對(duì)榆銀蝦康散的藥味進(jìn)行定性鑒別外，對(duì)處方中主效成分進(jìn)行含量測(cè)定也是控制榆銀蝦康散質(zhì)量的有效手段。黃芩是榆銀蝦康散中主要藥味，其所含的成分主要為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等黃酮類物質(zhì)，其中黃芩苷的含量高、性質(zhì)穩(wěn)定，在中藥材及制劑標(biāo)準(zhǔn)中常作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分。因此，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)處方中黃芩主要成分黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定，可對(duì)榆銀蝦康散成分含量進(jìn)行定量化監(jiān)測(cè)。本試驗(yàn)中對(duì)影響黃芩苷含量的供試品提取方法進(jìn)行了比較分析，確定黃芩苷供試品溶液采用加熱回流法制備，在最終的色譜條件下，該方法分離度好，精密度高，重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾，可用作處方中黃芩苷的含量測(cè)定方法。

綜上，本試驗(yàn)通過(guò)薄層色譜法對(duì)榆銀蝦康散中主要成分(地榆、黃柏、黃芩、山銀花)進(jìn)行定性鑒別、采用光散射法對(duì)粒度分布進(jìn)行檢查以及高效液相色譜法對(duì)黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定，建立了一套該散劑主要成分的定性、定量分析方法，操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、精密度高，能夠作為榆銀蝦康散的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)為該種散劑的深入研究提供了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也為申報(bào)新漁藥提供了試驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考資料。