基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究小兒咽扁顆粒治療急性咽炎的作用機(jī)制

張可可 陳建新 趙慧輝 賈彩霞 李韶菁

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京，100700； 2 長(zhǎng)沙衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，長(zhǎng)沙，410100； 3 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

咽炎(Pharyngitis)是一種常見的感染性疾病，即在咽部發(fā)生了炎癥反應(yīng)。當(dāng)寄生在咽部的溶血性鏈球菌作為其致病菌引起時(shí)，若得不到及時(shí)的治療，有可能會(huì)發(fā)生風(fēng)濕性心臟病、感染性心內(nèi)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等一系列嚴(yán)重并發(fā)癥。因此，對(duì)咽炎的及時(shí)治療刻不容緩。Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)，是由實(shí)驗(yàn)室與中國(guó)科學(xué)院自動(dòng)化研究所合作研發(fā)的綜合類大型網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)，它是第一個(gè)公開包含全面信息的可視化數(shù)據(jù)庫(kù)，這些信息包括：關(guān)于中醫(yī)癥狀之間的關(guān)系，中醫(yī)證候和中草藥。Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)于藥理作用的研究、中藥活性成分的尋找、中藥機(jī)制的研究有著至關(guān)重要的意義[1]。課題組前期研究表明小兒咽扁顆粒對(duì)大鼠25%氨水噴霧急性咽炎模型有著良好的抗炎作用，本文利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)這一方法，分析其起效機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.1.1 小兒咽扁顆粒所含成分的收集與篩選 小兒咽扁顆粒主要由金銀花、玄參、麥冬、桔梗、金果欖、射干、牛黃、冰片8味中藥組成，具有清熱利咽、解毒止痛的功效[2]。由于受目前分離、提純工藝技術(shù)的限制，中藥所含化學(xué)成分十分復(fù)雜，通過(guò)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)、分析文獻(xiàn)來(lái)搜集其有效成分。通過(guò)查閱和調(diào)研國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)室新開發(fā)的通過(guò)癥狀繪圖增強(qiáng)的中醫(yī)綜合Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.symmap.org/)[1]、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)收集小兒咽扁顆粒的中藥化學(xué)成分，并對(duì)收集到的化合物進(jìn)行篩選。按文獻(xiàn)報(bào)道來(lái)設(shè)置篩選條件，篩選條件為“口服生物利用度(Oral Bioavailability，OB)≥30%和類藥性(Drug Likeness，DL)≥0.18”[4]。有些數(shù)據(jù)庫(kù)中缺失的化合物，則按文獻(xiàn)報(bào)道[5]進(jìn)行增補(bǔ)，將與炎癥相關(guān)的中藥有效成分加入進(jìn)來(lái)。最后，將篩選后的化合物與增補(bǔ)后的化學(xué)成分進(jìn)行匯總。

1.1.2 小兒咽扁顆粒中藥-化學(xué)成分網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 通過(guò)利用Cytoscape 3.5.1軟件對(duì)小兒咽扁顆粒的中藥-化學(xué)成分進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。此網(wǎng)絡(luò)代表小兒咽扁顆粒內(nèi)8味中藥與其有效成分之間的關(guān)系。

1.1.3 小兒咽扁顆粒中化學(xué)成分相關(guān)靶點(diǎn)的獲取 在Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索小兒咽扁顆粒所含8味中藥成分，并通過(guò)中藥成分，找到相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白，并在Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)中找到其相應(yīng)的基因型表型。

1.1.4 咽炎相關(guān)靶點(diǎn)獲取 在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)、在線《人類孟德爾遺傳》(Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM)(http://www.omim.org/)[3]數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與咽炎相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白。搜索的關(guān)鍵詞為咽炎，在這2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索，以檢索到相應(yīng)的疾病靶點(diǎn)蛋白，并在Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)中找到其相應(yīng)的基因型表型。

1.1.5 中藥有效成分相關(guān)靶點(diǎn)與咽炎相關(guān)靶點(diǎn)的相互映射 在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)搜索咽炎相關(guān)蛋白，與小兒咽扁顆粒的靶點(diǎn)進(jìn)行映射，得到小兒咽扁顆粒治療咽炎的共同靶點(diǎn)。

1.1.6 映射后的靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、核心靶點(diǎn)的尋找 運(yùn)用Cytoscape 3.5.1軟件構(gòu)建，制作出“中藥-化學(xué)成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。運(yùn)用String 11.0、Cytoscape構(gòu)建映射后的靶標(biāo)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，靶標(biāo)之間的連線代表二者之間的相互作用。通過(guò)使用Cytoscpe自帶軟件找出核心靶點(diǎn)。

1.1.7 小兒咽扁顆粒治療急性小兒咽炎預(yù)測(cè)靶標(biāo)富集分析 使用映射后的基因型表型，在功能注釋生物信息學(xué)微陣列分析(Functional Annotation Bioinformatics Microarray Analysis，DAVID 6.8)數(shù)據(jù)庫(kù)(https://david.ncifcrf.gov/)數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得基因相關(guān)的通路富集分析，包括體內(nèi)生物過(guò)程的通路分析以及基因本體(Gene Ontology,GO)通路分析。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)部分結(jié)果由Symmap數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMSP、人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GeneCards)、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM)、uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)、DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)、Omicshare(http://www.omicshare.com/)自動(dòng)計(jì)算P值(P<0.05)生成。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.2.1 動(dòng)物 Sprague Dawley大鼠60只(SPF)，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g。三級(jí)實(shí)驗(yàn)室屏障環(huán)境飼養(yǎng)，動(dòng)物購(gòu)于北京百諾威生物科技有限公司，許可證號(hào)SCXK(京)。實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施前獲得中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)的審核和批準(zhǔn)(倫理審批號(hào)：2018B154)。

1.2.2 藥物 小兒咽扁顆粒[華潤(rùn)三九(黃石)藥品有限公司，批號(hào):1803007Z]、阿司匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號(hào)：BJ38903)、高活性干酵母(安琪酵母有限公司)、生理鹽水(石家莊四藥有限公司，批號(hào)：1409143203)。

1.2.3 試劑與儀器 腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)試劑盒(欣博盛生物科技有限公司，批號(hào)：R180710-102a)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)試劑盒(欣博盛生物科技有限公司，批號(hào)：R180710-003a)、IL-1β試劑盒(欣博盛生物科技有限公司，批號(hào)：R180710-007a)；醫(yī)用電子體溫計(jì)(邁克大夫，型號(hào):MT1961)、酶標(biāo)儀(SUNRISE，瑞士，型號(hào):16039400)。

1.2.4 分組與模型制備 將根據(jù)給藥方法分為正常組、模型組、阿司匹林組、小兒咽扁顆粒低劑量組、小兒咽扁顆粒中劑量組、小兒咽扁顆粒高劑量組。每組10只。大鼠禁食不禁水8 h，每小時(shí)測(cè)體溫1次，連續(xù)2次，選體溫變化不超過(guò)0.3 ℃的動(dòng)物備用，平均體溫作為正常體溫。給留用大鼠背部皮下注射20%酵母懸液10 mL/kg，6 h后測(cè)定體溫，選取體溫升高0.8 ℃以上大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

1.2.5 給藥方法 小兒咽扁顆粒配制方法：使用時(shí)以無(wú)菌生理鹽水配制成混懸液，現(xiàn)用現(xiàn)配；阿司匹林腸溶片配制方法：稱取阿司匹林腸溶片300 mg，加入適量蒸餾水研磨成均勻的混懸液，并定容至100 mL，即得阿司匹林混懸液，現(xiàn)用現(xiàn)配；25%干酵母懸液配制方法：稱取高活性干酵母10 g置于研缽中，加入適量蒸餾水研磨成均勻的混懸液，并定容至50 mL，即得20%干酵母懸液，現(xiàn)用現(xiàn)配。各組采取灌胃給藥，模型組按照10 mL/kg劑量給予生理鹽水、阿司匹林組按200 mg/kg給予阿司匹林混懸液，小兒咽扁顆粒組分別給予低劑量(3 g/kg)、中劑量(6 g/kg)、高劑量(12 g/kg)小兒咽扁顆?；鞈乙?。正常組不給藥。

1.2.6 檢測(cè)指標(biāo)與方法 1)測(cè)基礎(chǔ)體溫:取大鼠置于恒溫的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中，每天用蘸有少量液狀石蠟的體溫計(jì)輕輕插入肛門內(nèi)2 cm測(cè)肛門溫度(體溫)，連續(xù)3 d使適應(yīng)環(huán)境和測(cè)溫刺激。各組灌胃給藥，分別于給藥后0.5、1、2、4、6 h測(cè)定肛門溫度。給藥前體溫為發(fā)熱體溫。2)炎癥介質(zhì)水平：給藥后6 h后，腹主動(dòng)脈采血，取血清，進(jìn)行炎癥介質(zhì)測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 小兒咽扁顆粒所含成分的收集與篩選 小兒咽扁顆粒中收集到了97個(gè)化學(xué)成分滿足篩選條件，其中金銀花23個(gè)、射干17個(gè)、金果欖10個(gè)、玄參9個(gè)、桔梗7個(gè)、牛黃15個(gè)、冰片3個(gè)、麥冬13個(gè)。其中金銀花所含的化學(xué)成分?jǐn)?shù)量最多，占全方總化學(xué)成分?jǐn)?shù)量的23.7%；排名第2位的是射干，所含化學(xué)成分?jǐn)?shù)量占全方總化學(xué)成分?jǐn)?shù)量的17.5%，排名第3位的是牛黃，所含化學(xué)成分?jǐn)?shù)量占全方總化學(xué)成分?jǐn)?shù)量的15.5%。

2.2 小兒咽扁顆粒中藥-化學(xué)成分網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 如圖1所示，黃色的方框代表小兒咽扁顆粒里的8味中藥，分別為金銀花、玄參、麥冬、桔梗、金果欖、射干、牛黃、冰片；藍(lán)色方框代表每個(gè)中藥中的化學(xué)成分(金銀花23個(gè)、射干17個(gè)、金果欖10個(gè)、玄參9個(gè)、桔梗7個(gè)、牛黃15個(gè)、冰片3個(gè)、麥冬13個(gè))，連線表示化學(xué)成分與中藥的所屬關(guān)系，小兒咽扁顆粒中每一味中藥所包含的化學(xué)成分，共97個(gè)。表1為圖1中各化學(xué)成分的具體名稱。其中谷固醇(Beta-sitosterol)為金銀花、麥冬、玄參所共同包含；木樨草素(Luteolin)為金銀花、桔梗、射干所共同包含；豆甾醇(Stigmasterol)為金銀花、射干所共同包含。

表1 化學(xué)成分編號(hào)對(duì)應(yīng)名稱

圖1 小兒咽扁顆粒中所含中藥及其化學(xué)成分網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖

2.3 中藥-化學(xué)成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 該網(wǎng)絡(luò)包含311個(gè)節(jié)點(diǎn)和675條邊，97個(gè)化合物的網(wǎng)絡(luò)的節(jié)點(diǎn)自由度為4.341。見圖2。

圖2 小兒咽扁顆粒治療炎癥疾病的中藥-化學(xué)成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系

2.4 成分靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 治療咽炎的相關(guān)蛋白，與小兒咽扁顆粒的靶點(diǎn)進(jìn)行映射，得到107個(gè)小兒咽扁顆粒治療咽炎的靶點(diǎn)，并找到作用于這些靶點(diǎn)的成分。見表3。對(duì)映射后的靶點(diǎn)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖。見圖3。MYST組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(單核細(xì)胞白血病)4[MYST Histone Acetyltransferase(Monocytic Leukemia)4，MYST4]、三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族A成員1(ATP-binding Cassette Sub-family A Member 1，ABCA1)、視黃酸受體α(Retinoic Acid Receptor Alpha，RARA)、與Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1(Runt-related Transcription Factor 1，RUNX1)為核心靶點(diǎn)。核心化合物是隱黃素(Kryptoxanthin)。見表2。

圖3 小兒咽扁顆粒治療炎癥疾病的成分靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)與核心靶點(diǎn)關(guān)系圖

表2 小兒咽扁顆粒治療咽炎的核心靶點(diǎn)

表3 小兒咽扁顆粒治療咽炎靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)成分

2.5 金銀花、射干靶點(diǎn)分析與差異性基因分析 如圖4所示，金銀花和射干共同含有的治療炎癥的靶標(biāo)蛋白數(shù)量為8個(gè)，占靶標(biāo)蛋白的7.8%；其中金銀花獨(dú)有的靶標(biāo)蛋白數(shù)為91個(gè)，占總靶標(biāo)蛋白的89.2%；射干獨(dú)有的靶標(biāo)蛋白數(shù)為3個(gè)，占總靶標(biāo)蛋白的2.9%。小兒咽扁顆粒中，金銀花的靶標(biāo)蛋白數(shù)目占全方治療炎癥疾病總靶點(diǎn)蛋白數(shù)目的41.5%。而排名第2位的牛黃和排名第3位的射干的靶標(biāo)蛋白數(shù)目分別占全方治療炎癥疾病總靶點(diǎn)蛋白數(shù)目的41.5%。其余7味中藥治療炎癥疾病的靶點(diǎn)蛋白數(shù)占全方治療炎癥疾病總靶點(diǎn)蛋白數(shù)目的18.2%和17.7%，在數(shù)量上遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于金銀花。

圖4 金銀花與射干共有及特有的治療炎癥的靶點(diǎn)分析

2.6 小兒咽扁顆粒治療咽炎靶點(diǎn)的生物過(guò)程、富集分析 對(duì)小兒咽扁顆粒與炎癥相關(guān)的107個(gè)目標(biāo)靶點(diǎn)進(jìn)行京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)富集分析和GO生物過(guò)程分析。其中，排位前20位的GO生物過(guò)程與KEGG通路分析如圖5、圖6所示。在GO分析中，對(duì)藥物的反應(yīng)、對(duì)乙醇的反應(yīng)、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、轉(zhuǎn)錄過(guò)程的正調(diào)控、基因表達(dá)的正調(diào)控、對(duì)雌二醇的反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等排位靠前。在KEGG通路分析中顯示，小兒咽扁顆粒治療咽炎的機(jī)制可能與腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)信號(hào)通路、叉頭框O(Forkhead Box O,FoxO)信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-kinase/serine-threonine Protein Kinase,PI3K/AKT)信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia-inducible Factor-1,HIF-1)信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、P53信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear Factor Kappa B，NF-κB)信號(hào)通路、類節(jié)點(diǎn)受體信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、酪氨酸激酶受體(Receptor Kinases Tyrosine)、ErbB信號(hào)通路、催乳素信號(hào)通路、巴爾病毒感染、促分裂原活化的蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase，MAPK)信號(hào)通路、蛋白酪氨酸激酶、Janus激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活因子(Janus Kinase/Signal Transducer and Activators of Transcription，JAK-STAT)信號(hào)通路、鞘脂類信號(hào)通路等有關(guān)。

圖5 GO生物過(guò)程分析

圖6 KEGG通路分析HTLV-1改為1型人T細(xì)胞白血病病毒

2.7 各組時(shí)間點(diǎn)體溫測(cè)定結(jié)果 模型組大鼠體溫顯著性升高；陽(yáng)性對(duì)照藥的阿司匹林于給藥后0.5、1、2、4、6 h均可顯著降低大鼠體溫；小兒咽扁顆粒中劑量組和高劑量組于給藥后1 h和2 h，大鼠體溫呈下降趨勢(shì)。見表4。

表4 各組不同時(shí)間點(diǎn)體溫

2.8 各組IL-6，IL-1β和TNF-α比較 給藥6 h后，模型組IL-6，IL-1β和TNF-α均顯著性提高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；陽(yáng)性藥阿司匹林組可顯著性降低血清中IL-6，IL-1β和TNF-α的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；小兒咽扁顆粒低劑量組、中劑量組和高劑量組對(duì)于血清中IL-6，IL-1β和TNF-α的含量呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

傳統(tǒng)的中藥研究方法一般是通過(guò)從原藥材中提取、分離其有效成分，再通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、臨床試驗(yàn)進(jìn)行有效性和安全性等各種指征測(cè)評(píng)，最終應(yīng)用于臨床診治。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是以實(shí)驗(yàn)作為支撐，將各種情況反映出來(lái)，缺點(diǎn)是進(jìn)程較為緩慢。近些年來(lái)，隨著互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的迅速發(fā)展，一系列通過(guò)計(jì)算機(jī)研究中藥的方法應(yīng)運(yùn)而生[6-10]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為生物信息學(xué)其中一種研究手段，對(duì)中醫(yī)藥化學(xué)成分復(fù)雜的復(fù)方制劑，中藥藥理的多成分、多通路、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，相較于傳統(tǒng)方法有著很大的優(yōu)勢(shì)。

咽炎是一種感染性疾病，可由多種致病菌引起，致病菌A組溶血性鏈球菌(Group A Streptococcus，GAS)可能引起諸如急性腎小球腎炎、感染性心內(nèi)膜炎、風(fēng)濕性心瓣膜病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等并發(fā)癥。有循證研究表明，5歲以上兒童GAS痰培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率隨年齡的增加而增加[11]。因此，一旦確定感染為溶血性鏈球菌時(shí)，及時(shí)而有效的抗感染治療措施十分重要?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療咽炎的方法一般是進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，確定感染菌株，再?zèng)Q定是否進(jìn)行抗感染治療。若進(jìn)行抗感染，則使用青霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[12]。中醫(yī)治療咽炎也有不良反應(yīng)較少、價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)。

本文采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，通過(guò)多個(gè)角度探究了小兒咽扁顆粒治療咽炎的潛在分子機(jī)制和靶點(diǎn)通路。通過(guò)篩選小兒咽扁顆粒中所含的化學(xué)成分，并通過(guò)成分所尋找的靶點(diǎn)，與通過(guò)咽炎這一疾病所尋找的靶點(diǎn)相互映射，從而找到了小兒咽扁顆粒治療咽炎的靶點(diǎn)，并且通過(guò)計(jì)算，確定了其中起重要作用的關(guān)鍵化合物隱黃素和關(guān)鍵靶點(diǎn)MYST4、ABCA1、RARA、RUNX1。隱黃素是一種天然色素，可在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成為視黃醇，是一種抗氧化劑，起到保護(hù)視桿細(xì)胞的效果[13]。RARA則為隱黃素的受體[14]，涉及的疾病是急性早幼粒細(xì)胞白血病(Acute Promyelocytic Leukemia，APL)，其發(fā)生的機(jī)制由染色體基因的異位所引起。研究發(fā)現(xiàn)，ABCA1是膽固醇從周圍逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵蛋白分子，可作為治療低密度脂蛋白膽固醇血癥的關(guān)鍵靶點(diǎn)，起到防治心血管疾病的作用[15-16]，研究者在2017年發(fā)現(xiàn)了其三維結(jié)構(gòu)[17]。RUNX1是在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的一種蛋白質(zhì)，與它相關(guān)的疾病是急性髓性白血病1蛋白，相關(guān)疾病為急性髓性白血病M2型、急性淋巴性白血病、骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic Syndrome，MDS)[18]。MYST4位于10號(hào)染色體2區(qū)2帶2號(hào)，與其突變相關(guān)的疾病有子宮平滑肌瘤[19]、MDS[20]。以上結(jié)果為我們提供了更多研發(fā)中成藥治療急性咽炎乃至其他疾病，如心血管疾病、白血病等提供了新的思路和線索，對(duì)于精準(zhǔn)醫(yī)療和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的實(shí)施也有一定的意義。

方中金銀花和射干共為君藥，金銀花可清熱解毒、疏散風(fēng)熱，射干可清熱解毒、消痰利咽；金果欖、玄參、麥冬、桔梗4味藥共為臣藥，玄參可清熱涼血，瀉火解毒，麥冬可養(yǎng)陰潤(rùn)肺、益胃生津、清心除煩，桔?？尚戊钐?、利咽排膿；牛黃、冰片為佐藥，牛黃可化痰開竅、涼肝熄風(fēng)、清熱解毒，冰片可開竅醒神、清熱止痛。其中金銀花、射干、金果欖、玄參、冰片在實(shí)驗(yàn)中均表明有一定的抗菌作用，牛黃和麥冬有一定的抗炎作用。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)分析，從數(shù)量上來(lái)看，金銀花、牛黃、射干治療咽炎的靶點(diǎn)蛋白數(shù)目較多，起主要作用。進(jìn)一步對(duì)金銀花、射干靶點(diǎn)分析得出金銀花可能為小兒咽扁顆粒治療咽炎的主要藥物。這與以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)的方劑配伍組成中的組方關(guān)系中，金銀花為君藥的配伍關(guān)系不謀而合?，F(xiàn)代藥理發(fā)現(xiàn)，金銀花中的有效成分黃酮類、綠原酸類、揮發(fā)油類可以抑制革蘭氏陽(yáng)性球菌、革蘭氏陰性桿菌的生長(zhǎng)，且對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA)也有效果；同時(shí)，通過(guò)抑制滲出、抑制增生、解熱、增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能等過(guò)程，起到抗炎作用。

通過(guò)對(duì)小兒咽扁顆粒治療咽炎在生物過(guò)程富集分析，在GO生物過(guò)程中，對(duì)藥物的反應(yīng)、對(duì)乙醇的反應(yīng)、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、轉(zhuǎn)錄過(guò)程的正調(diào)控、基因表達(dá)的正調(diào)控、對(duì)雌二醇的反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等過(guò)程，與治療咽炎可能有一定的相關(guān)性。

在KEGG信號(hào)通路分析中，小兒咽扁顆粒治療咽炎的機(jī)制可能與TNF信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、PI3K/AKT信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、P53信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等有關(guān)。TNF信號(hào)家族包括細(xì)胞凋亡信號(hào)通路、JAK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路，主要功能是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)炎癥的發(fā)生。根據(jù)GO分析和KEGG分析，進(jìn)一步表明小兒咽扁顆粒對(duì)急性咽炎從多方面、多層次防治急性咽炎。

通過(guò)運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探索了小兒咽扁顆粒治療急性咽炎的作用機(jī)制，分析了其治療的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)和有效靶點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)小兒咽扁顆?？梢酝ㄟ^(guò)對(duì)藥物的反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡等過(guò)程治療咽炎，其作用機(jī)制可能與TNF、FoxO、PI3K/AKT、HIF-1、T細(xì)胞受體信號(hào)通路有關(guān)，其中TNF信號(hào)通路可能是其發(fā)揮作用的關(guān)鍵通路；關(guān)鍵化合物是隱黃素，關(guān)鍵靶點(diǎn)是ABCA1、RARA、RUNX1、MYST4。但是，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究尚有一定的局限性，如某些化合物、靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)中還并未收錄，數(shù)據(jù)庫(kù)信息并未及時(shí)更新，中藥的品種、產(chǎn)地、炮制均對(duì)藥物的成分含量有一定影響，患者個(gè)體差異也對(duì)藥效有一定影響。因此，今后仍有必要對(duì)研究進(jìn)行改進(jìn)和深入研究。