脾虛肝亢證抽動障礙動物模型制備研究與應(yīng)用現(xiàn)狀

史文麗 陳慧敏 馬丙祥

(1 河南中醫(yī)藥大學(xué)，鄭州，450000； 2 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州，450000)

抽動障礙(Tic Disorder，TD)是一種復(fù)雜的兒童常見的神經(jīng)發(fā)育障礙性疾病[1-2]，臨床表現(xiàn)為突然、快速、反復(fù)、非節(jié)律性的運(yùn)動或發(fā)聲[3-4]，屬于中醫(yī)學(xué)“肝風(fēng)證”“慢驚風(fēng)”“抽搐”“筋惕肉瞤”等范疇，90%可伴注意力缺陷多動障礙、強(qiáng)迫障礙、自閉、焦慮、品行障礙、人格障礙及睡眠障礙等共患病[5-6]。目前全球發(fā)病率逐步上升[7]，國內(nèi)發(fā)病率為1%～4%，全球發(fā)病率約3%，對學(xué)習(xí)、生活、社交均造成危害[8-10]。

動物模型是挑戰(zhàn)和驗(yàn)證病理生理學(xué)假說的重要工具，并且在驗(yàn)證新的治療方案中扮演重要角色。目前，國內(nèi)醫(yī)學(xué)界對TD及其動物模型的認(rèn)知程度非常有限，尤其是基于病證結(jié)合的動物模型。中醫(yī)臨床強(qiáng)調(diào)的是整體觀和辨證觀，最新的中藥新藥臨床試驗(yàn)設(shè)計與評價技術(shù)指南將本病分為肝亢風(fēng)動、痰火擾神、氣郁化火、脾虛痰聚、脾虛肝亢、陰虛風(fēng)動6個證候，其中脾虛肝亢證最常見。因此，進(jìn)行更精確的脾虛肝亢證TD動物模型相關(guān)研究有利于病因、病機(jī)探索及加速新藥研發(fā)進(jìn)程。

1 脾虛肝亢證淵源

宋代閆孝忠(一說閆季忠)所著《小兒藥證直訣》卷上五臟所主有云：“心主驚，肝主風(fēng)，脾主困，肺主喘，腎主虛。”[11]雖然強(qiáng)調(diào)了五臟分證，但同時需要重視五臟之間的相互影響[12-14]，故臨床采用“五臟證治理論”辨證治療TD[15-16]。由于小兒“肝常有余、脾常不足”體質(zhì)特點(diǎn)，故脾虛肝亢證最為多見。小兒脾常不足，飲食失節(jié)，恣嗜寒涼，常吃零食，或患病用藥，損傷脾氣，脾虛木乘，肝風(fēng)內(nèi)動，加之脾失運(yùn)化水濕，終致風(fēng)痰內(nèi)擾[17]?；谏鲜觯⒔Y(jié)合兒科宗師錢乙的“五臟證治理論”解析TD，認(rèn)為該病與體質(zhì)相關(guān)，病位責(zé)之于五臟，主要在肝，與脾關(guān)系密切，初步總結(jié)出“脾虛肝亢、風(fēng)痰內(nèi)擾”是TD的主要病機(jī)，可從肝脾論治，這與當(dāng)代很多醫(yī)家學(xué)術(shù)思想一致，并且符合“五臟有余不足論”[18-22]。

2 病證結(jié)合動物模型的建立

既往動物模型多局限于“病”的復(fù)制，故不能觀察中醫(yī)證候演變，亦無法體現(xiàn)中醫(yī)的辨證論治。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之“病”結(jié)合中醫(yī)之“證”建立的病證結(jié)合動物模型，有利于探索疾病及其演變過程與證候之間的關(guān)聯(lián)性，并將動物研究更貼近人類疾病的臨床診治，是當(dāng)前動物模型研究中較為理想的造模方法，并隨著部分病證結(jié)合動物模型的日趨成熟，填補(bǔ)了“一證一個體”基礎(chǔ)研究的空白[23-24]。

2.1 實(shí)驗(yàn)動物的選擇 考慮到抽動表型的高度復(fù)雜性，動物方面通常采用哺乳動物，包括小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、貓和猴子，其中以嚙齒類動物小鼠、大鼠為主，主要是基于它們具有很高的成本效益和與人類神經(jīng)生物學(xué)高度相似性[25]。基于人群和雙胞胎家庭的研究驗(yàn)證了TD的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，隨著二代測序及全基因組的廣泛應(yīng)用，推翻了TD符合孟德爾遺傳規(guī)律的單基因遺傳病假說，不僅增加了大量候選基因，而且制備了基因突變及基因敲除動物模型[26-27]。故基因變異動物已逐步擴(kuò)展應(yīng)用，但多出現(xiàn)在國外的基礎(chǔ)研究中。

2.2 TD“病”模型的制備 目前國內(nèi)外的TD動物模型大致分為基因、環(huán)境因素暴露及藥理學(xué)3大類，其中基因模型和環(huán)境因素暴露模型是國際研究熱點(diǎn)，前者因更能明確造模目的及藥物作用靶點(diǎn)、符合模型評價的結(jié)構(gòu)有效性和預(yù)測有效性，故應(yīng)有最多，主要包括SLC6A3、MAOA、CNTNAP2、SLITRK、HDC、NLGN、SAPAP3和D1CT-7等基因模型[28]，但缺點(diǎn)是表面有效性不能完全符合且價格昂貴。環(huán)境因素暴露模型(多發(fā)生于孕期和圍產(chǎn)期)主要包括早期應(yīng)激和產(chǎn)科因素模型、早期神經(jīng)炎癥模型，在發(fā)病因素研究中應(yīng)用最多。目前國內(nèi)基礎(chǔ)研究使用最多的是藥物模型，主要使用苯丙胺(Amphetamine，AMP)、阿撲嗎啡(Apomorphine，APO)、2，5-二甲氧4-碘苯-2-氨基丙烷(2,5-dimethoxy 4-iodobenzene-2-aminopropane，DOI)、亞氨基二丙腈(Imino Dipropionitrile，IDPN)、6-羥基多巴胺氫溴酸鹽(6-Hydroxydopamine hydrobromide，6-OHDA)、谷氨酸等實(shí)現(xiàn)模型制備，具體如何操作不再贅述，在中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究中IDPN模型應(yīng)用最多。但是，上述三大類TD動物模型并沒有和中醫(yī)的“證”相結(jié)合，只是進(jìn)行“病”的模型制備。

2.3 脾虛肝亢證的“證”模型的制備 李繼君等[23]制備脾虛肝亢證TD動物模型方法：采用血清微量灌注技術(shù)，將該證候患者未稀釋血清微量灌注于Wistar大鼠腦內(nèi)，1例血清僅用于1只大鼠。該方法從刻板動作進(jìn)行了主癥的表面有效性分析，寧動顆粒干預(yù)后TD大鼠刻板動作減少,從主癥的角度預(yù)測模型有效性。寧動顆粒以鉤藤、天麻、黨參、麥冬為君，以龍骨、牡蠣為臣，以白芍、甘草為佐使之藥，從柔肝平肝角度進(jìn)行肝亢的有效性預(yù)測，尚缺乏脾虛癥狀及其評估。陳自佳[24]制備小鼠模型方法：腹腔注射IDPN 350 mg/(kg·d)誘導(dǎo)當(dāng)日，結(jié)合濃度為1 g/mL的番瀉葉顆粒劑溶液20 mL/(kg·d)、50 mL/(kg·d)及大黃顆粒劑溶液50 mL/(kg·d)灌胃，連續(xù)8 d，最終發(fā)現(xiàn)大黃組表面有效性及結(jié)構(gòu)有效性最佳。在主癥方面從自主活動和刻板動作進(jìn)行分析，兼癥從食欲不振(食量減少)、消瘦(體質(zhì)量下降)、大便溏泄(排便次數(shù)增多，便形溏稀，肛門污穢)、倦怠乏力(懸空拉尾抵抗力減弱)、毛發(fā)不榮、拱背、萎靡嗜睡進(jìn)行脾虛癥狀評估，從胸腺及脾臟指數(shù)、胃泌素、D-木糖等指標(biāo)進(jìn)行病理學(xué)評估。通過健脾止動湯進(jìn)行有效性預(yù)測評估，方中太子參、茯苓、甘草益氣健脾，陳皮理氣健脾、和中化滯，半夏辛溫燥濕化痰、辛行苦泄，川芎、防風(fēng)等清肝瀉火。劉曉芳等[29]制備大鼠模型方法：腹腔注射IDPN 300 mg/(kg·d)誘導(dǎo)當(dāng)日，結(jié)合飲食失節(jié)、慢性束縛以及過度疲勞。該方法在主癥方面從自主活動和刻板動作進(jìn)行分析，在兼癥方面，從神疲氣短、少氣懶言、食少便溏等進(jìn)行脾虛證的驗(yàn)證。在有效性預(yù)測方面通過自擬方干預(yù)后自主動作和刻板動作減少，方中四逆散加減以透邪解郁、調(diào)和肝脾，升降散加減以宣發(fā)郁熱、調(diào)暢氣機(jī)，烏梅丸加減以調(diào)和陰陽、柔肝息風(fēng)，從疏肝平肝達(dá)“總以調(diào)暢氣機(jī)為要”，并通過血清中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子進(jìn)行結(jié)構(gòu)有效性及有效性預(yù)測評估。TD基本病機(jī)為肝風(fēng)內(nèi)動，和肝亢關(guān)系密切。如上所述，這3種方法均對主癥表面有效性進(jìn)行評估，并進(jìn)行了有效性預(yù)測評估，后2種方法進(jìn)一步評估了結(jié)構(gòu)有效性，并從脾虛方面評估其表面有效性，但肝亢癥狀驗(yàn)證不足。整體上，第2種方法最為全面地從“證”的模型構(gòu)建進(jìn)行評估，選用方劑以四君子湯為主，從健脾入手進(jìn)而扶土抑木、化痰熄風(fēng)，最貼切其脾虛肝亢、風(fēng)痰內(nèi)擾證的發(fā)病機(jī)制。

3 病證結(jié)合動物模型的評價體系

3.1 宏觀表征 根據(jù)中醫(yī)辨證思維，中華中醫(yī)藥學(xué)會兒科分會臨床評價學(xué)組發(fā)布的《兒童抽動障礙中藥新藥臨床試驗(yàn)設(shè)計與評價技術(shù)指南》將脾虛肝亢證TD定義為：主癥：1)腹部抽動明顯；2)手腳多動，難于靜坐；3)注意力不集中。兼癥：1)性情急躁；2)煩躁易怒；3)睡眠不安；4)多夢；5)目赤；6)口苦；7)嘆息；8)脅脹；9)健忘；10)食欲不振；11)便溏。舌脈：舌淡紅，苔薄白；脈細(xì)弦。具備主癥1)，兼癥6項(xiàng)，參考舌脈即可辨證[30]。“有諸內(nèi)者，必形諸外”，該評價方法以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為根本，通過四診合參信息反映中醫(yī)病證本質(zhì)。目前研究多通過行為學(xué)測定、自主活動儀檢測、刻板運(yùn)動觀察評分這3個方面進(jìn)行主癥評價，滿足模型表面有效性評估[24]。脾虛兼癥通過模型動物的活動活躍度、形態(tài)變化、毛色順滑度及體表被毛性、飲食量、排便次數(shù)及腹形大小等判定[24]，但部分兼癥(尤其是肝亢癥狀)以及舌脈無法評定。由上可見，病證結(jié)合動物模型雖能夠最大限度模擬，但因?yàn)椴∽C復(fù)雜、不斷演變、個體差異以及癥狀和體征主觀判斷性強(qiáng)等特點(diǎn)，量化指標(biāo)統(tǒng)計分析方面存在難度。從上述3種病證結(jié)合動物模型看，已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了主癥(如腹部抽動、手腳多動)及脾虛癥狀(食欲不振、便溏)的模擬，但肝亢癥狀(性情急躁、煩躁易怒、目赤、口苦等)目前暫未實(shí)現(xiàn)，提示了下一步研究方向。由此說明病證結(jié)合動物模型的評價體系尚未成熟，需要進(jìn)一步完善。

3.2 微觀指標(biāo)

在實(shí)際工作中無法將病證結(jié)合動物模型的宏觀表征等同于中醫(yī)特定的臨床證候，在實(shí)驗(yàn)中研究者多結(jié)合病理生理學(xué)基礎(chǔ)，滿足模型結(jié)構(gòu)有效性及預(yù)測有效性評估，體現(xiàn)將臨床證候相關(guān)的理化指標(biāo)融入微觀層面的診治指標(biāo)。筆者結(jié)合模型鑒定的3個要素把微觀指標(biāo)分為3大部分，其中中樞神經(jīng)病理生理學(xué)、理化指標(biāo)用于“病”模型鑒定，非中樞神經(jīng)指標(biāo)用于“證”模型鑒定，這也體現(xiàn)了中醫(yī)基礎(chǔ)理論的整體觀，其中脾虛證的評估較為成熟，可供今后參考[24，29]，但肝亢證的微觀指標(biāo)尚未在本病中報道。

3.2.1 通過中樞神經(jīng)病理生理學(xué)變化進(jìn)行“病”模型評價 病理生理學(xué)改變最能體現(xiàn)模型評價中的結(jié)構(gòu)有效性，是模型鑒定的重要部分，多項(xiàng)研究通過蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin，HE)染色方法已驗(yàn)證TD模型動物的神經(jīng)病理改變，主要觀察海馬CA2區(qū)、門區(qū)及齒狀回神經(jīng)元結(jié)構(gòu)及數(shù)目是否出現(xiàn)改變。海馬CA2區(qū)錐體細(xì)胞排列紊亂，數(shù)量減少，部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，大量細(xì)胞出現(xiàn)核固縮壞死，門區(qū)錐體細(xì)胞排列紊亂，大量神經(jīng)元細(xì)胞腫脹、核固縮壞死，由典型的多角形變?yōu)槿切位虿灰?guī)則形，周邊膠質(zhì)細(xì)胞浸潤，頂樹突明顯減少，排列混亂；齒狀回神經(jīng)元壞死，大部分顆粒細(xì)胞濃縮、深染，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，排列疏松[31]。

3.2.2 通過中樞神經(jīng)理化指標(biāo)變化進(jìn)行“病”模型評價

3.2.2.1 多巴胺 多巴胺(Dopamine，DA)是由中腦為主的多個腦區(qū)的神經(jīng)元產(chǎn)生，主要是黑質(zhì)致密部(Substantia Nigra Pars Compacta，SNc)和腹側(cè)被蓋區(qū)(Ventral Tegmental Area，VTA)，并能投射支配許多大腦區(qū)域，包括紋狀體和其他基底神經(jīng)節(jié)核、不同的額葉皮質(zhì)區(qū)和部分邊緣系統(tǒng)。主要的DA能神經(jīng)通路是黑質(zhì)紋狀體通路(SNc→背紋狀體)、中間邊緣通路(VTA→伏隔核)和中間皮質(zhì)通路(VTA→額葉皮質(zhì))。多個實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)IDPN可干擾DA在機(jī)體內(nèi)代謝，故使用此方法制備的TD模型組動物表現(xiàn)為DA及其多巴胺1型受體(DA Receptor Type 1，D1R)代謝產(chǎn)物高香草酸(Homovanillic Acid，HVA)升高，D2R、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Dopamine Transporter，DAT)、兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(Catechol-O-methyltransferase,COMT)降低，靜安口服液、菖蒲郁金湯、祛風(fēng)止動方等可調(diào)控D2R、DAT、COMT進(jìn)而下調(diào)DA表達(dá)以及HVA含量[32-34]。

3.2.2.2 5-羥色胺 5-羥色胺能神經(jīng)元(Serotoninergic Neuron，SN)是以5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)為遞質(zhì)的神經(jīng)元，主要集中于腦干的中縫核，并投射到紋狀體、黑質(zhì)及皮層，支配神經(jīng)系統(tǒng)的所有區(qū)域。既往研究表明TD患者血漿色氨酸水平明顯降低，推測與5-HT代謝酶合成過多或誘導(dǎo)性過高有關(guān)，進(jìn)而推論TD與5-HT代謝紊亂有關(guān)，并且下游產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸也可反映5-HT的代謝水平。DOI是選擇性5-HT(2A/2C)受體激動劑，故多采用DOI模型觀察5-HT含量變化，而中藥干預(yù)可起到上調(diào)作用[32]。5-HT在腦的高級部位和多種神經(jīng)活動方面起著普遍的抑制和穩(wěn)定作用，故在TD合并強(qiáng)迫癥的研究中應(yīng)用最多，并有學(xué)者正在研究該指標(biāo)與睡眠障礙之間的關(guān)聯(lián)性。

3.2.2.3 去甲腎上腺素 產(chǎn)生去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE)的神經(jīng)元位于腦干，投射廣泛，支配所有中樞神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域。實(shí)驗(yàn)證明IDPN模型組大鼠腦組織及血漿的NE水平較正常對照組顯著升高，菖蒲郁金湯能一定程度上降低NE能神經(jīng)元興奮性，通過抑制NE表達(dá)從而達(dá)到抗抽動效應(yīng)[33]。DA是合成NE的前體，影響DA代謝的藥物也可能影響NE的水平，產(chǎn)生NE的神經(jīng)纖維與產(chǎn)生DA、乙酰膽堿和5-HT的神經(jīng)元相互連接。因此，自然發(fā)生的改變和藥理學(xué)誘導(dǎo)的NE信號變化都可能導(dǎo)致其他調(diào)節(jié)途徑的復(fù)雜改變，而NE水平的降低可抑制行為、提高注意力及記憶力。

3.2.2.4 氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì) 氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)改變作為TD的病理生理學(xué)基礎(chǔ)，因與中醫(yī)的陰陽平衡理論相似是近年研究的熱點(diǎn)之一。氨基酸本身作為一種神經(jīng)遞質(zhì)及多種神經(jīng)遞質(zhì)的前體物質(zhì)和中間產(chǎn)物，參與神經(jīng)系統(tǒng)的營養(yǎng)發(fā)育及信息的傳遞、整合。既往研究已證實(shí)，TD模型動物腦組織及血樣中興奮性氨基酸谷氨酸(Glutamic Acid，GLU)、谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Glutamate Transporter 1,GLT1)、興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(Excitatory Amino Acid Transporter2,EAAT2)升高，抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric Acid，GABA)降低[35]，而健脾止動湯可下調(diào)GLU[36]和EAAT2[37]，進(jìn)一步闡述通過調(diào)節(jié)陰陽可抑制神經(jīng)興奮性，因此以氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)作為靶點(diǎn)的研究廣泛用于TD及注意力缺陷多動障礙的基礎(chǔ)研究及新藥制藥領(lǐng)域。

目前采用藥理學(xué)模型觀察理化指標(biāo)變化在國內(nèi)應(yīng)用較多，同樣也是藥物機(jī)制研究的熱點(diǎn)模型。在基礎(chǔ)研究中學(xué)者多采集紋狀體、皮質(zhì)、腦脊液的透析液、血液作為標(biāo)本進(jìn)行神經(jīng)遞質(zhì)指標(biāo)檢測，在方法上神經(jīng)遞質(zhì)采用高效液相色譜法和(或)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，而受體、轉(zhuǎn)運(yùn)體等關(guān)鍵蛋白采用蛋白質(zhì)印跡法、熒光定量PCR等方法，亦有采用MicroPET技術(shù)檢測DAT報道。除此之外，基于強(qiáng)啡肽[38]、下丘腦-垂體-腎上腺軸[39-40]、下丘腦-垂體-性腺軸進(jìn)行的動物實(shí)驗(yàn)較少，但后二者在臨床研究中應(yīng)用較多。目前通過上述病理基礎(chǔ)對TD疾病模型的有效性評估較為成熟[41]，但用于脾虛肝亢證TD病證模型方面較少[42]。不同證型差異性研究暫空白，今后可將中樞神經(jīng)病理生理學(xué)和神經(jīng)理化指標(biāo)用于疾病模型評價。

3.2.3 通過非中樞神經(jīng)指標(biāo)變化進(jìn)行“證”模型評價

3.2.3.1 脾臟和胸腺指數(shù)測定 脾臟和胸腺是2大免疫器官，前者為中樞細(xì)胞免疫，后者為外圍免疫器官，二者結(jié)構(gòu)變化及功能高低直接影響機(jī)體免疫水平，多位學(xué)者認(rèn)為這2項(xiàng)指數(shù)可作為判斷脾虛相關(guān)證候的病理指標(biāo)。陳自佳[24]和劉曉芳等[29]的實(shí)驗(yàn)表明中醫(yī)證型組和模型組動物脾臟和胸腺指數(shù)較空白組下降，再次驗(yàn)證二者的直接關(guān)聯(lián)性。

3.2.3.2 胃泌素和D-木糖濃度測定 胃泌素(Gastrin，GAs)又稱促胃液素，直接參與消化道結(jié)構(gòu)與功能的發(fā)育和成熟，是反映胃蠕動及胃動力學(xué)的關(guān)鍵指標(biāo)，因能促進(jìn)胃排空和激發(fā)胃竇平滑肌收縮反應(yīng)，被認(rèn)為是脾虛肝亢證的病理基礎(chǔ)，另有用于脾虛肝郁證的報道[29]。D-木糖能客觀體現(xiàn)消化吸收功能，從中醫(yī)角度上講，脾主運(yùn)化水谷，并將精微物質(zhì)散布至五臟六腑及四肢末節(jié)，正與上述的消化吸收相吻合，故D-木糖被認(rèn)為是與小腸吸收功能和脾虛證呈正相關(guān)的敏感和特異指標(biāo)，并在基礎(chǔ)研究中得到證實(shí)[24]。

4 小結(jié)與討論

在TD模型的3種制備方法中，藥理學(xué)模型因最能體現(xiàn)表面有效性、結(jié)構(gòu)有效性、預(yù)測有效性的3種評價，在國內(nèi)最為肯定且使用最多，故以此為背景淺談脾虛肝亢證TD病證結(jié)合動物模型的相關(guān)研究。目前國內(nèi)外已經(jīng)能根據(jù)藥理學(xué)模型進(jìn)行不同神經(jīng)遞質(zhì)變化的研究，如觀察藥物是否通過調(diào)控DA起到治療作用時需選用IDPN模型，而關(guān)于5-HT的機(jī)制研究需選用DOI模型，但尚未有能將每種神經(jīng)遞質(zhì)對應(yīng)其自身的藥理學(xué)模型。另一不足之處是藥理學(xué)模型與中醫(yī)的“證”尚未建立對應(yīng)關(guān)系，在“病”模型制備的同時需要“證”的構(gòu)建。在“證”構(gòu)建方面，脾虛證的構(gòu)建和評價方法很多，但關(guān)于脾虛肝亢證的較少，嚴(yán)格意義上講，用于TD的僅有2個，文獻(xiàn)中涉及的通過大黃、大承氣湯、飲食偏嗜、勞倦及利血平等方法制備的脾虛證模型是否能用或者如何用于脾虛肝亢證TD模型制備尚不可知[43]，如何根據(jù)基因模型進(jìn)行病證結(jié)合動物模型制備也有待于進(jìn)一步探討[44]。模型評價是基礎(chǔ)研究的重要部分，既往研究已表明，在宏觀表征方面研究者能分別通過“病”和“證”對脾虛肝亢證TD進(jìn)行簡單模型評價；在微觀指標(biāo)方面，中樞神經(jīng)病理生理學(xué)改變在多項(xiàng)基礎(chǔ)研究中得到證實(shí)，有助于結(jié)構(gòu)有效性評價。用于臨床的理化指標(biāo)在動物體內(nèi)不能一一被復(fù)制，但已經(jīng)在動物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證的中樞神經(jīng)遞質(zhì)可基本滿足“病”模型的評價，其中IDPN/DA和DOI/5-HT的關(guān)聯(lián)性是需要注意的，并且IDPN干預(yù)后的實(shí)驗(yàn)鼠體質(zhì)量降低提示IDPN模型本身具有體質(zhì)量下降這一體現(xiàn)脾虛證的特征，更適合脾虛肝亢證TD疾病模型制備[24]。脾臟和胸腺指數(shù)測定、胃泌素和D-木糖濃度測定目前已被驗(yàn)證可確切用于脾虛肝亢證TD基礎(chǔ)研究中，但伴隨脾虛肝亢這一“證”構(gòu)建的日益成熟，后續(xù)會不斷出現(xiàn)評價“證”的宏觀表征和微觀指標(biāo)。

TD動物模型的研究可提高醫(yī)學(xué)者對本病的認(rèn)識和研究水平，成為探索神經(jīng)精神系統(tǒng)與TD發(fā)病聯(lián)系的關(guān)鍵點(diǎn)。中醫(yī)病證結(jié)合的動物模型可彌補(bǔ)西醫(yī)“病”模型和單因素的中醫(yī)病因病機(jī)“證”模型的不足，且更具說服力，是臨床診斷治療及新藥研發(fā)的基礎(chǔ)[45]。通過脾虛肝亢證TD病證結(jié)合動物模型的文獻(xiàn)回顧性分析發(fā)現(xiàn)，對于“證”的構(gòu)建、評價和如何將“病”和“證”更好地結(jié)合仍存在局限性。同時為了使實(shí)驗(yàn)研究更貼近臨床療效，怎樣建立“證”的量化評價體系，進(jìn)一步提高中醫(yī)藥建設(shè)的現(xiàn)代化和科學(xué)化，是我們要繼續(xù)努力的方向。