• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    香港牡蠣鈣調(diào)蛋白基因的克隆和組織表達(dá)分析

    2022-02-06 01:29:12李素萍喻達(dá)輝李應(yīng)清白麗蓉
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年24期
    關(guān)鍵詞:外套膜牡蠣貝殼

    李素萍,喻達(dá)輝,李應(yīng)清,王 培,郭 穎,白麗蓉

    (北部灣大學(xué)海洋學(xué)院,廣西北部灣海洋生物多樣性養(yǎng)護重點實驗室,廣西欽州 535011)

    雙殼類動物的貝殼都是鈣代謝產(chǎn)物,含有90%以上的CaCO3晶體和百分之幾的生物大分子基質(zhì)[1]。近10年,人們?yōu)殛U明殼的形成機制作出了許多努力,已從雙殼貝類中鑒定出10余種基質(zhì)蛋白[2-5]。然而,以往對貝殼形成的分子機制研究集中于基質(zhì)蛋白的純化和表征上,而忽略了貝類鈣代謝的機制。鈣離子不僅是參與雙殼類動物許多生理過程的調(diào)節(jié)劑,而且是參與殼結(jié)構(gòu)形成的主要陽離子,在貝殼的形成過程中,需要大量的鈣離子不斷沉積在基質(zhì)蛋白形成的骨架上[6]。Ca2+攝取、積累、轉(zhuǎn)運、摻入的機制以及這些過程中涉及的特定調(diào)節(jié)劑仍然是一個有吸引力的領(lǐng)域,有待進一步研究。

    鈣調(diào)蛋白(Calmodulin,CaM)是一種主要的細(xì)胞內(nèi)鈣受體,存在于許多不同的細(xì)胞類型中,是動物中最保守的蛋白質(zhì)之一。CaM以鈣離子(Ca2+)依賴性方式結(jié)合并調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶。它參與一系列細(xì)胞過程,包括分泌、細(xì)胞分裂和分化、DNA復(fù)制和修復(fù)、肌肉收縮和糖原代謝、滲透細(xì)胞體積調(diào)節(jié)和細(xì)胞內(nèi)通訊[7]。在高等脊椎動物中,CaM由多種基因編碼,如人和小鼠的CaM I、II和III,雞的CaM I和II[8-9]。在雙殼類生物中,鈣調(diào)蛋白可以調(diào)節(jié)Ca2+-ATPase膜系統(tǒng)來捕獲環(huán)境中的Ca2+,細(xì)胞外CaM或CaM樣蛋白(CaMLP)和CaM或CaMLP結(jié)合蛋白被認(rèn)為在生物礦化中起重要作用[10-11]。CaM基因在外套膜裙帶及外套膜外表皮上高表達(dá),外套膜主要參與貝殼形成過程中Ca2+的分泌,因此,雙殼類動物體內(nèi)的CaM不僅是參與許多生理過程的調(diào)控,而且是貝殼結(jié)構(gòu)形成的主要調(diào)控因素[12]。

    香港牡蠣(Crassostreahongkongensis)分布于我國南部沿海,是兩廣地區(qū)最常見、最主要的牡蠣養(yǎng)殖種類之一,具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值[13-15]。但香港牡蠣生長速度緩慢,養(yǎng)殖周期長,沿海地區(qū)臺風(fēng)頻繁,牡蠣養(yǎng)殖深受其害,常常造成巨大經(jīng)濟損失,故在香港牡蠣的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中,一直存在著提高生長速度、縮短養(yǎng)殖周期的強烈需求[16]。香港牡蠣的生長與貝殼形成密切相關(guān),為提高香港牡蠣生長速度、縮短養(yǎng)殖周期,加快貝殼的形成,探究貝殼形成的分子礦化機制是重中之重[17-19]。目前,CaM作為生物體內(nèi)重要的調(diào)控蛋白,是貝殼形成的主要調(diào)控因素,因此以香港牡蠣為研究對象,對香港牡蠣貝殼形成的分子礦化機制進行研究。

    筆者采用RACE技術(shù)克隆了香港牡蠣CaM基因cDNA全長序列,并分析其核酸和氨基酸序列,預(yù)測CaM二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu),并采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測香港牡蠣CaM基因在不同組織中的表達(dá)情況,對香港牡蠣CaM基因的功能進行深入研究,旨在為研究香港牡蠣貝殼形成機制及CaM基因蛋白功能研究提供分子理論基礎(chǔ),為生產(chǎn)實踐提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料香港牡蠣采集于廣西欽州市東風(fēng)市場,取其新鮮的外套膜、鰓、閉殼肌、性腺、心臟、血淋巴、觸唇和消化腺8個組織立即放入液氮速凍,置-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 總RNA提取與cDNA的合成取香港牡蠣的閉殼肌、外套膜、鰓、血液、性腺、心臟、觸唇和消化腺8個組織用研磨儀研磨,參照TransZol Up Plus RNA Kit試劑盒(全式金)提取總RNA,使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗RNA的完整性并用Little Lunatic(USA)測定其濃度,用TransScript II One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix反轉(zhuǎn)錄試劑盒(全式金)合成模板cDNA,置-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 RACE獲得香港牡蠣CaM基因cDNA全長根據(jù)GenBank中已知的太平洋牡蠣(Crassostreagigas)CaM基因cDNA全長序列,設(shè)計特異性引物CaM-F和CaM-R,擴增出目的片段,反應(yīng)程序為94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,運行35個循環(huán);72 ℃終延伸10 min。PCR產(chǎn)物用DNA膠回收試劑盒(TIANGEN)純化,參照pEASY?-T1 Cloning Kit(全式金)說明書進行連接轉(zhuǎn)化,陽性克隆送生工生物工程(上海)有限公司測序,測序結(jié)果與長牡蠣CaM基因cDNA序列比對,相似性極高。

    根據(jù)測序出的目的片段設(shè)計5′RACE和3′RACE擴增的基因特異性引物,參照5′RACE試劑盒(北京百奧博萊科技)說明進行上游未知片段擴增,利用引物5′RACE-A將模板RNA進行逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,模板cDNA經(jīng)加帽反應(yīng)使用引物5′RACE-B進行第1輪反應(yīng),反應(yīng)程序為:94 ℃變性5 min;50 ℃退火2 min,72 ℃延伸4 min,進行1個循環(huán);94 ℃變性40 s,55 ℃退火1 min,72 ℃延伸3 min,進行29個循環(huán);72 ℃終延伸15 min。以稀釋20倍的第1輪PCR產(chǎn)物為模板,用引物5′RACE-C進行第2輪反應(yīng),反應(yīng)程序為:94 ℃變性40 s;55 ℃退火1 min,72 ℃延伸3 min,進行30個循環(huán);72 ℃終延伸15 min。

    參照3′RACE試劑盒(北京百奧博萊科技)說明進行下游未知片段擴增,使用引物3′RACE-A進行第1輪反應(yīng),反應(yīng)條件為:55 ℃ 2 min,72 ℃ 40 min,1個循環(huán);94 ℃變性1 min,55 ℃退火1 min,72 ℃延伸3 min,30個循環(huán);72 ℃ 15 min。以稀釋20倍的第1輪PCR產(chǎn)物為模板,引物3′RACE-B進行第2輪反應(yīng),反應(yīng)程序為:94 ℃ 40 s;55 ℃ 1 min,72 ℃ 3 min,30個循環(huán);72 ℃終延伸15 min。將2輪反應(yīng)之后的5′RACE和3′RACE PCR產(chǎn)物分別進行膠回收后進行連接轉(zhuǎn)化,陽性克隆送生工生物工程(上海)有限公司測序。引物序列見表1。

    表1 試驗所用引物序列Table 1 Sequences of primers in this study

    1.4 生物信息學(xué)分析利用NCBI數(shù)據(jù)庫中的Blast(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)、ORFfinder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)和ChromasPro.2.1.3等軟件對測序結(jié)果進行驗證分析并拼接出全長cDNA序列。使用ProtParam(http://web.expasy.org/protparam/)預(yù)測該蛋白的基本理化性質(zhì);使用Soft Berry-Psite(http://linux1.softberry.com/berry.phtml)預(yù)測蛋白功能位點;使用Signa1P 4.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/Sig-nalP)預(yù)測信號肽序列;使用TMpred(http://www.cbs.dtudk/services/TMHMM)預(yù)測跨膜結(jié)構(gòu)域;使用SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)預(yù)測該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域;使用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/NPSA/npsa_sopma.html)和SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/interactive)分別預(yù)測該蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu);使用PSORTⅡPrediction軟件(https://psort.hgc.jp/form2.html)進行亞細(xì)胞定位分析;使用Clustalx1.81軟件進行多重序列比對;使用MEGA 7.0軟件的鄰接法(neighbor-joining,NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹,進化距離的計算采用Kimura雙參數(shù)模式。

    1.5 熒光定量PCR分析以香港牡蠣8個組織的cDNA為模板,根據(jù)全長序列設(shè)計定量引物qRTCaM-F和qRTCaM-R,以GAPDH為內(nèi)參基因,每個樣品進行3次重復(fù)。參照TransStart? Tip Green qPCR SuperMix熒光定量試劑盒(全式金)進行qRT-PCR,反應(yīng)程序為:94 ℃預(yù)變性30 s;94 ℃變性5 s,55 ℃退火15 s,進行30個循環(huán);72 ℃延伸10 s。數(shù)據(jù)由Roche LightCycler 96軟件生成并記錄,按照2-ΔΔCt計算組織表達(dá)水平,采用SPSS 22軟件進行單因素方差分析法(one-way ANOVA),Tukey檢驗,P<0.05表示顯著性差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 香港牡蠣CaM基因cDNA全長序列以香港牡蠣的cDNA為模板,使用RACE試劑盒獲得香港牡蠣鈣調(diào)蛋白ChCaM基因序列全長cDNA(Gen Bank登錄號為:MZ192519),其全長為770 bp,開放閱讀框(Open reading frame,ORF)為450 bp,5′非編碼區(qū)(5′-UTR)54 bp及3′非編碼區(qū)(3′-UTR)266 bp,香港牡蠣CaM基因編碼149個氨基酸。通過SMART在線分析軟件預(yù)測香港牡蠣CaM含有4個EF-hand結(jié)構(gòu)域,分別位于12~40、48~76、85~113、121~149位氨基酸(圖1)。針對香港牡蠣CaM蛋白質(zhì)進行理化性質(zhì)分析,發(fā)現(xiàn)氨基酸理論分子量為16.82 kD,帶正電荷的氨基酸殘基(Arg+Lys)有15個,帶負(fù)電荷的氨基酸殘基(Asp+Glu)有38個,理論等電點為4.14。該蛋白脂溶指數(shù)(Aliphatic index)為64.83,親水性(GRAVY)總平均值為-0.656,半衰期約為30 h,不穩(wěn)定指數(shù)為31.08,因此該蛋白是一類穩(wěn)定的親水性蛋白質(zhì)。Soft Berry-Psite預(yù)測該蛋白功能位點,發(fā)現(xiàn)香港牡蠣CaM具有2個N-肉豆蔻?;稽c,7個酪蛋白激酶II磷酸化位點,2個蛋白激酶C磷酸化位點和1個N-糖基化位點(圖2)。使用SignalP 4.1 Server程序未能預(yù)測到信號肽信號;使用TMpred軟件未發(fā)現(xiàn)跨膜結(jié)構(gòu),不屬于跨膜蛋白;利用PSORTⅡPrediction軟件對香港牡蠣CaM蛋白進行亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn)該蛋白在細(xì)胞質(zhì)中分布最多,占52.2%,在分泌系統(tǒng)小泡中分布最少,為4.3%,細(xì)胞核和線粒體中分別為30.4%和13.0%。

    注:方框表示起始密碼子和終止密碼子,綠色陰影部分為鈣調(diào)蛋白結(jié)構(gòu)域,黃色陰影部分為AATAAA加尾信號 Note:The boxes represent the start and stop codons,the green area represents the calmodulin domain,and the yellow area represents the AATAAA tail addition signal圖1 香港牡蠣CaM基因的核酸序列和氨基酸序列Fig.1 Nucleotide and deduced amino acid sequence from ChCaM gene

    圖2 香港牡蠣CaM的功能位點預(yù)測Fig.2 Prediction of functional site of ChCaM

    2.2 香港牡蠣CaM結(jié)構(gòu)預(yù)測使用SOPMA工具對香港牡蠣CaM蛋白的二級結(jié)構(gòu)進行預(yù)測,結(jié)果顯示,CaM預(yù)測蛋白包含59.73% α螺旋(alpha helix)、6.04%延伸鏈(extended strand)、9.40% β轉(zhuǎn)角(beta turn)和24.83%不規(guī)則卷曲(random coil)(圖3)。通過SWISS-MODEL對香港牡蠣和人的CaM基因編碼的蛋白進行三級結(jié)構(gòu)模擬,模擬發(fā)現(xiàn)二者蛋白三級結(jié)構(gòu)相似性極高(圖4)。

    注:藍(lán)色.α螺旋;紅色.延伸鏈;綠色.β轉(zhuǎn)角;粉紅.不規(guī)則卷曲 Note:Blue.Alpha helix;Red.Extended strand;Green.Beta turn;Pink.Random coil圖3 香港牡蠣CaM蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.3 Predicted two-dimensional structure of ChCaM

    注:a.香港牡蠣;b.人;c.疊加 Note:a.Crassostrea hongkongensis;b.Homo sapiens;c.Overlay圖4 CaM蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.4 Predicted three-dimensional structure of CaM

    2.3 香港牡蠣CaM氨基酸序列同源性從NCBI下載11個其他物種CaM氨基酸序列(表2),經(jīng)DNAstar軟件對香港牡蠣與其他物種的CaM進行氨基酸序列同源性分析(圖5),結(jié)果發(fā)現(xiàn)香港牡蠣和長牡蠣的CaM同源性最高,相似度高達(dá)100%,美洲牡蠣次之,達(dá)到98.7%,其他物種的相似度為93%~97%。運用DNAMAN軟件將香港牡蠣CaM的氨基酸序列與其他已公布的8種生物進行多重序列比對分析(圖6),結(jié)果顯示,香港牡蠣CaM氨基酸序列與長牡蠣和美洲牡蠣有較高的相似性,而與魚類、甲殼類和哺乳動物序列相似性相對較低;CaM氨基酸排序呈現(xiàn)很高的相似性和高度保守性。結(jié)果表明,CaM的氨基酸序列具有典型的鈣調(diào)蛋白特征(EF-hand結(jié)構(gòu)域),發(fā)現(xiàn)以上9個物種均有4個EF-hand結(jié)構(gòu)域(I、II、III和IV),且它們表現(xiàn)出彼此的序列同源性。每個結(jié)構(gòu)域由12個氨基酸殘基組成,其中6個作為金屬-蛋白質(zhì)復(fù)合物中Ca2+的配體[如天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)]。CaM基因所編碼的氨基酸序列高度保守,尤其表現(xiàn)在EF-hand結(jié)構(gòu)域Ca2+結(jié)合位點上,暗示CaM基因在機體中有極其重要的功能和作用。

    2.4ChCaM基因系統(tǒng)進化樹為比較不同物種CaM基因序列的親緣關(guān)系,從NCBI數(shù)據(jù)庫中查找其他物種CaM基因cDNA序列,用MEGA 7.0軟件構(gòu)建ChCaM與其他物種的系統(tǒng)進化樹(圖7),結(jié)果顯示,香港牡蠣CaM與長牡蠣的遺傳距離最近,并與美洲牡蠣、蝦夷扇貝和池蝶蚌等雙殼類動物聚為一大支,具有較高的同源性,而與文昌魚和虹鱒等魚類、人和小鼠等哺乳動物以及中華絨螯蟹和克氏原螯蝦等甲殼類動物分支較長,距離較遠(yuǎn),同源性較低。

    2.5 香港牡蠣CaM基因的組織特性表達(dá)使用SPSS 22.0軟件進行單因素分析,通過實時定量PCR的方法檢測香港牡蠣CaM mRNA在各個組織中的表達(dá)量,結(jié)果表明,CaM基因在香港牡蠣各個組織中均有表達(dá),其中鰓組織的表達(dá)量最高,其次為外套膜、消化腺、觸唇、血淋巴、性腺、閉殼肌,在心臟的表達(dá)量最低(圖8)。

    圖5 香港牡蠣CaM氨基酸與其他11個物種的同源百分比Fig.5 Percent identity of CaM amino acids of Crassostrea hongkongensis and other 11 species

    表2 同源百分比與序列比對所用物種Table 2 Species used in alignment and percent identity

    3 討論

    3.1 香港牡蠣CaM基因cDNA序列特征和系統(tǒng)進化鈣調(diào)蛋白是貝類中重要的調(diào)控蛋白,是鈣離子結(jié)合蛋白家族成員,能夠結(jié)合微量鈣離子,對真核細(xì)胞內(nèi)的酶起到激活作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生命活動,進而調(diào)控Ca2+的吸收、轉(zhuǎn)運和分泌[20-21]。該研究利用RACE技術(shù)克隆獲得香港牡蠣CaM基因的cDNA序列,全長為770 bp,編碼149個氨基酸。生物信息學(xué)分析香港牡蠣CaM蛋白具有4個典型的EF-hand結(jié)構(gòu)域,能夠與鈣離子結(jié)合,屬于典型的鈣離子結(jié)合蛋白家族成員,這與已有研究報道的合浦珠母貝體內(nèi)的鈣調(diào)蛋白的結(jié)構(gòu)域相似[10]。鈣調(diào)蛋白是一種由148個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),可形成2個球狀區(qū)域,由1個靈活的中心連接器連接[22]。

    注:顏色表示氨基酸序列相似度(黑色.100%;粉色.70%;綠色.50%及以上;白色.50%以下),上方綠色箭頭表示4個EF-hand結(jié)構(gòu)域,紅色方框為EF-hand鈣結(jié)合域 Note:The color indicates the similarity of amino acid sequence(black.100%;Pink.70%;Green.≥50% and <70%;White.<50%).Green arrow indicates 4 EF-hand domains above,the red box is EF-hand calcium-binding domain圖6 香港牡蠣CaM氨基酸序列與其他物種CaM的序列比對Fig.6 Alignment CaM amino acid of Crassostrea hongkongensis and other species

    注:括號中為GenBank登錄號 Note:The GenBank entry number is given in parentheses圖7 CaM核酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹Fig.7 Phylogenetic tree of CaM from various species

    注:不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significantly different (P<0.05)圖8 CaM基因在香港牡蠣不同組織的表達(dá)情況Fig.8 Expression pattern of CaM gene in different tissues of Crassostrea hongkongensis

    每個區(qū)域結(jié)合EF-hand基序中的2個鈣離子,這是鈣結(jié)合蛋白中普遍存在的一個基序,因此鈣調(diào)蛋白可以結(jié)合4個鈣離子,與哺乳動物人和軟體動物香港牡蠣的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致。鈣結(jié)合位點為12個氨基酸,包含許多負(fù)電荷或極性氨基酸殘基,如天冬氨酸、谷氨酸和天冬酰胺,這些氨基酸的側(cè)鏈與Ca2+形成離子鍵。CaM含有豐富氧原子側(cè)鏈的氨基酸殘基,即使在Ca2+濃度很低的環(huán)境中也能吸引鈣離子促進Ca2+與氨基酸結(jié)合。氨基酸的功能位點預(yù)測發(fā)現(xiàn),其4個EF-hand結(jié)構(gòu)域上有1個N-糖基化位點,2個蛋白激酶C磷酸化位點,3個酪氨酸激酶磷酸化位點等,表明其在細(xì)胞與細(xì)胞間結(jié)合和信號傳導(dǎo)過程中起著重要作用。

    鈣調(diào)蛋白是一種必需的蛋白質(zhì),也是一種穩(wěn)定的蛋白質(zhì),任何一種鈣調(diào)蛋白編碼基因的突變或者鈣調(diào)蛋白結(jié)合位點的損傷通常都是致命的[7]。來自不同脊椎動物物種的CaM基因編碼具有相同氨基酸序列的相同CaM分子,表明其在脊椎動物進化過程中高度保守[23]。此外,2個不同的無脊椎動物???Metridiumsenile)和池蝶蚌(Hyriopsisschlegeli)也編碼相同的CaM蛋白,表明CaM蛋白在無脊椎動物進化過程中也高度保守[23-24]。通過多序列比對,發(fā)現(xiàn)香港牡蠣CaM基因與長牡蠣CaM基因的同源性最高,核酸序列同源性為97.11%,氨基酸序列同源性高達(dá)100%,說明CaM蛋白在雙殼類動物進化過程中高度保守,進一步反映了這種蛋白質(zhì)在細(xì)胞正常功能中的重要性。比較香港牡蠣CaM基因核酸序列EF-hand結(jié)構(gòu)域之間的同源性,發(fā)現(xiàn)EFh1和EFh3與EFh2和EFh4核酸序列具有高度同源性,均為57.5%,表明參與鈣離子結(jié)合的部分分子比其他部位更保守[10]。構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn),香港牡蠣CaM基因和長牡蠣CaM基因位于同一分支,說明香港牡蠣和長牡蠣的親緣關(guān)系較近,與其他物種的親緣關(guān)系較遠(yuǎn),這與他們的生物學(xué)分類相符。由此推測,CaM保守結(jié)構(gòu)域在進化過程中具有較高的保守性,并且不同物種有不同的差異性。

    3.2 香港牡蠣CaM基因的組織表達(dá)分析貝殼形成是一個復(fù)雜、精密調(diào)控的生物礦化過程,自然條件下構(gòu)成貝殼的碳酸鈣晶體并不是在單一組織作用下形成的,而是多個組織共同作用的結(jié)果[25-26]。熒光定量檢測發(fā)現(xiàn),CaM基因在香港牡蠣鰓組織中表達(dá)量最高,是心臟組織表達(dá)量的(198.57±4.00)倍,與合浦珠母貝和池蝶蚌CaM基因組織表達(dá)趨勢相同[24]。在雙殼類動物中,鰓是從水中吸收鈣的主要器官,在膜Ca2+-ATP酶系統(tǒng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[27-28]。香港牡蠣CaM在鰓組織中高表達(dá),說明CaM在香港牡蠣鰓吸收和積累鈣的過程中具有重要的調(diào)控作用。在軟體動物中,外套膜與貝殼直接接觸的區(qū)域能夠分泌角質(zhì)層和鈣化層[29],是殼的形成過程中的關(guān)鍵調(diào)控因子。筆者發(fā)現(xiàn)CaM基因在香港牡蠣外套膜組織中表達(dá)量是心臟組織的表達(dá)量的(183.64±7.18)倍,這與其他動物的報道相似。這暗示了香港牡蠣CaM基因通過鰓和外套膜組織共同參與調(diào)控Ca2+的吸收、轉(zhuǎn)運和分泌等鈣代謝途徑。由此推測香港牡蠣貝殼的形成是由鰓從外界環(huán)境中吸收Ca2+并轉(zhuǎn)運到外套膜中,并通過鈣泵將離子從外套膜運輸?shù)酵馓浊环置谥行纬韶悮?。因此,在貝類貝殼形成的生物礦化過程中,鈣調(diào)蛋白被認(rèn)為有極其重要的作用。

    4 結(jié)論

    該研究克隆了香港牡蠣CaM基因cDNA序列,全長為770 bp,編碼149個氨基酸,具有4個EF-hand結(jié)構(gòu)域。通過多序列比對及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn),香港牡蠣CaM基因與長牡蠣CaM基因的同源性最高(97.11%),并且位于同一分支。熒光定量檢測發(fā)現(xiàn),CaM基因在香港牡蠣各組織中都有表達(dá),其中鰓組織的表達(dá)量最高,其次為外套膜、消化腺、觸唇、血淋巴、性腺、閉殼肌,心臟的表達(dá)量最低。該研究結(jié)果將有望為香港牡蠣貝殼形成的生物礦化機制及CaM基因功能研究提供基礎(chǔ)資料。

    猜你喜歡
    外套膜牡蠣貝殼
    告別自汗用牡蠣,四季都輕松
    銀貝殼
    趣味(語文)(2021年12期)2021-04-19 12:16:06
    光照強度對番紅硨磲外套膜顏色變化的影響
    原來你是這樣的貝殼
    貝殼里的海
    小小的貝殼一幅幅的畫
    基于Ⅲumina平臺的厚殼貽貝外套膜轉(zhuǎn)錄組從頭測序
    海灣扇貝外套膜及臟器剝離機理試驗
    曇石山文化的牡蠣器
    大眾考古(2015年6期)2015-06-26 08:27:16
    《如何煮狼》:煮狼的女人愛牡蠣
    小說月刊(2014年8期)2014-04-19 02:39:15
    色吧在线观看| 日本色播在线视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美bdsm另类| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日本午夜av视频| 精华霜和精华液先用哪个| 日本与韩国留学比较| 男女边摸边吃奶| 成人毛片a级毛片在线播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 大陆偷拍与自拍| 日韩欧美 国产精品| 亚洲精品,欧美精品| 边亲边吃奶的免费视频| 国产极品天堂在线| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩在线高清观看一区二区三区| 午夜日本视频在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av国产久精品久网站免费入址| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产成人freesex在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产男女内射视频| 日韩亚洲欧美综合| av在线app专区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 熟女电影av网| 十分钟在线观看高清视频www | 色5月婷婷丁香| a级毛片在线看网站| 国产一区二区在线观看av| 九色成人免费人妻av| 婷婷色综合大香蕉| 成人国产av品久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 在线观看三级黄色| 成人国产av品久久久| 中文字幕制服av| 三上悠亚av全集在线观看 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日韩大片免费观看网站| 亚州av有码| 精品一区在线观看国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品第二区| 国产中年淑女户外野战色| 国产亚洲一区二区精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 久久精品夜色国产| 丝袜在线中文字幕| 高清毛片免费看| 精品亚洲成国产av| 久久这里有精品视频免费| 人人妻人人看人人澡| 精品酒店卫生间| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品一区二区性色av| 久久久午夜欧美精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 多毛熟女@视频| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日日啪夜夜撸| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 成人漫画全彩无遮挡| 午夜激情福利司机影院| 国产精品国产av在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品久久久久久精品古装| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品偷伦视频观看了| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲国产精品国产精品| 制服丝袜香蕉在线| 午夜久久久在线观看| 曰老女人黄片| 欧美人与善性xxx| 亚洲美女黄色视频免费看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费黄色在线免费观看| 欧美日本中文国产一区发布| 桃花免费在线播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美变态另类bdsm刘玥| 免费观看a级毛片全部| 丰满迷人的少妇在线观看| videossex国产| 久久99精品国语久久久| 在线精品无人区一区二区三| 午夜免费观看性视频| 亚洲国产精品999| 黄色日韩在线| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲精品aⅴ在线观看| 一区二区三区精品91| 成人国产麻豆网| 欧美另类一区| 国精品久久久久久国模美| 曰老女人黄片| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 超碰97精品在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩| 久久国内精品自在自线图片| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲av男天堂| 少妇 在线观看| 亚洲久久久国产精品| 免费观看a级毛片全部| 亚洲成人手机| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 尾随美女入室| 国产一区二区在线观看av| 中文字幕精品免费在线观看视频 | av黄色大香蕉| 一级,二级,三级黄色视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 乱人伦中国视频| 国产精品久久久久久久电影| 9色porny在线观看| 高清在线视频一区二区三区| av.在线天堂| 夫妻午夜视频| 久久久久久久大尺度免费视频| av天堂中文字幕网| 多毛熟女@视频| 国产69精品久久久久777片| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 大香蕉97超碰在线| 国产精品99久久久久久久久| 人人妻人人澡人人看| 一区二区三区乱码不卡18| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久久国产电影| 日韩欧美 国产精品| 青春草亚洲视频在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久久人妻| 国产熟女欧美一区二区| 人人澡人人妻人| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美xxⅹ黑人| 黄色怎么调成土黄色| 久久久久久久久久久丰满| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日本黄色片子视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久精品94久久精品| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av日韩在线播放| 在线观看国产h片| 亚洲不卡免费看| 国产精品一区二区性色av| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲图色成人| 婷婷色麻豆天堂久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 观看免费一级毛片| 国产黄频视频在线观看| 老司机影院成人| 秋霞伦理黄片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品久久久久成人av| 久久久欧美国产精品| 五月伊人婷婷丁香| 日韩 亚洲 欧美在线| 在线精品无人区一区二区三| 少妇的逼好多水| 一级av片app| 日本免费在线观看一区| 国产高清有码在线观看视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲精品国产av成人精品| 另类亚洲欧美激情| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产美女午夜福利| 成人亚洲欧美一区二区av| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩亚洲高清精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久99热这里只频精品6学生| 十八禁高潮呻吟视频 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 91久久精品电影网| 又大又黄又爽视频免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产色婷婷99| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产欧美在线一区| 久久午夜福利片| 国产高清国产精品国产三级| av女优亚洲男人天堂| 日本欧美视频一区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲美女视频黄频| 久久综合国产亚洲精品| 男人和女人高潮做爰伦理| 91精品国产九色| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品视频女| 亚洲精品色激情综合| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲图色成人| 国产一区二区三区综合在线观看 | 三级国产精品片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美三级亚洲精品| 我的女老师完整版在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 日日啪夜夜爽| 欧美 日韩 精品 国产| 丰满少妇做爰视频| 在线看a的网站| 欧美bdsm另类| 亚洲精品久久午夜乱码| 一区二区三区免费毛片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 久久久久久久国产电影| 大香蕉久久网| 久久人妻熟女aⅴ| 十分钟在线观看高清视频www | 日韩 亚洲 欧美在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲精品国产色婷婷电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 麻豆成人av视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品久久久久久久电影| av免费在线看不卡| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲三级黄色毛片| 国产永久视频网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产综合精华液| 免费看日本二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国国产精品蜜臀av免费| 春色校园在线视频观看| 久久久久久人妻| 黄色一级大片看看| 日韩精品有码人妻一区| 美女内射精品一级片tv| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲av男天堂| 久久国内精品自在自线图片| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 一级毛片久久久久久久久女| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品色激情综合| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美人与善性xxx| 国产熟女午夜一区二区三区 | 少妇精品久久久久久久| 日韩制服骚丝袜av| 91精品国产九色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久国内精品自在自线图片| 99视频精品全部免费 在线| 久久久久久久精品精品| a级片在线免费高清观看视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产精品国产精品| 五月伊人婷婷丁香| 91精品国产九色| 午夜日本视频在线| 最近的中文字幕免费完整| 国产有黄有色有爽视频| 美女内射精品一级片tv| 亚洲经典国产精华液单| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产在线男女| 黑人猛操日本美女一级片| 涩涩av久久男人的天堂| 99热网站在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久久久视频综合| 免费黄网站久久成人精品| 欧美精品一区二区免费开放| 99热这里只有是精品在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 一级毛片我不卡| 亚洲中文av在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品久久久久久久久av| 精品一区二区三卡| 日韩大片免费观看网站| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲综合色惰| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 只有这里有精品99| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 一区二区三区免费毛片| 免费av不卡在线播放| 一级二级三级毛片免费看| 精品久久久噜噜| 七月丁香在线播放| 久久久国产欧美日韩av| 各种免费的搞黄视频| 免费黄网站久久成人精品| 免费观看a级毛片全部| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产永久视频网站| 最近的中文字幕免费完整| 午夜福利网站1000一区二区三区| 老司机亚洲免费影院| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美人与善性xxx| 我要看日韩黄色一级片| 在线播放无遮挡| 一级毛片电影观看| 男人添女人高潮全过程视频| 精品久久久久久久久av| 中文字幕久久专区| xxx大片免费视频| videos熟女内射| 国产成人91sexporn| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久国产乱子免费精品| 亚洲av不卡在线观看| 深夜a级毛片| 性色av一级| 亚洲av国产av综合av卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产黄色免费在线视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 男女啪啪激烈高潮av片| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品自拍成人| 日韩一区二区三区影片| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲一区二区三区欧美精品| a级毛色黄片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产成人aa在线观看| 我的老师免费观看完整版| 一本大道久久a久久精品| 插逼视频在线观看| 大香蕉97超碰在线| 成人毛片a级毛片在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 男女边摸边吃奶| 少妇 在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产成人aa在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 韩国av在线不卡| 国产精品国产三级专区第一集| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩人妻高清精品专区| 午夜激情福利司机影院| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲av不卡在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 男女边吃奶边做爰视频| 日韩视频在线欧美| 国产精品免费大片| 97超碰精品成人国产| 国产亚洲最大av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最近中文字幕高清免费大全6| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 99久久综合免费| 色网站视频免费| 亚洲精品国产av成人精品| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩人妻高清精品专区| 性色av一级| 亚洲天堂av无毛| 91精品国产九色| 26uuu在线亚洲综合色| 中文字幕制服av| 亚洲欧洲国产日韩| 新久久久久国产一级毛片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美97在线视频| √禁漫天堂资源中文www| 欧美高清成人免费视频www| 久久ye,这里只有精品| 人妻一区二区av| 日本爱情动作片www.在线观看| 黄色一级大片看看| 性色avwww在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品日本国产第一区| 国产永久视频网站| 免费看av在线观看网站| 26uuu在线亚洲综合色| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩大片免费观看网站| 99久久精品一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| a级片在线免费高清观看视频| 视频中文字幕在线观看| 黄色日韩在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 免费看av在线观看网站| 日本wwww免费看| tube8黄色片| 午夜久久久在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久97久久精品| av福利片在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| a级毛色黄片| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品国产a三级三级三级| 一本色道久久久久久精品综合| 夜夜爽夜夜爽视频| av天堂久久9| 看免费成人av毛片| 日韩欧美精品免费久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久99热6这里只有精品| 日本午夜av视频| 十八禁高潮呻吟视频 | 伦精品一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 女性生殖器流出的白浆| 在现免费观看毛片| 只有这里有精品99| 午夜精品国产一区二区电影| 中国三级夫妇交换| 久久这里有精品视频免费| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲一区二区三区欧美精品| 在线 av 中文字幕| 老女人水多毛片| 99热国产这里只有精品6| 少妇 在线观看| 两个人的视频大全免费| 丰满少妇做爰视频| 亚洲中文av在线| 校园人妻丝袜中文字幕| a级片在线免费高清观看视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 在线观看一区二区三区激情| 女人精品久久久久毛片| 老熟女久久久| 少妇丰满av| 欧美成人精品欧美一级黄| 午夜av观看不卡| 在线观看www视频免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产美女午夜福利| 日韩欧美 国产精品| 久久久久网色| 高清黄色对白视频在线免费看 | 两个人免费观看高清视频 | 国产淫语在线视频| 国产成人精品婷婷| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲高清免费不卡视频| 在线观看av片永久免费下载| 极品教师在线视频| 777米奇影视久久| 亚洲国产精品999| 精品卡一卡二卡四卡免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲精品乱久久久久久| 尾随美女入室| 性色avwww在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 能在线免费看毛片的网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 中文字幕免费在线视频6| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 午夜老司机福利剧场| 成人毛片a级毛片在线播放| 免费看日本二区| 日韩大片免费观看网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲国产最新在线播放| 最新的欧美精品一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 少妇高潮的动态图| a 毛片基地| 久久精品国产自在天天线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲欧洲国产日韩| 国产av一区二区精品久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 熟女电影av网| 在线观看www视频免费| 色吧在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 黄色一级大片看看| 国产淫片久久久久久久久| 国产熟女午夜一区二区三区 | 日韩欧美 国产精品| 国产精品蜜桃在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 大香蕉久久网| 国产美女午夜福利| 亚洲怡红院男人天堂| 赤兔流量卡办理| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日日啪夜夜撸| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 麻豆成人午夜福利视频| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 久久鲁丝午夜福利片| 日韩亚洲欧美综合| 国产一区二区在线观看日韩| 久久这里有精品视频免费| 毛片一级片免费看久久久久| 男人舔奶头视频| 又爽又黄a免费视频| 中国国产av一级| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 色吧在线观看| 亚洲在久久综合| 在线 av 中文字幕| 成人国产麻豆网| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 老女人水多毛片| 天美传媒精品一区二区| 国产免费一级a男人的天堂| 中文字幕免费在线视频6| 黑人猛操日本美女一级片| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久人人爽人人片av| 亚洲国产精品专区欧美| 国产伦理片在线播放av一区| 国内精品宾馆在线| 日本午夜av视频| 日韩一区二区视频免费看| 美女内射精品一级片tv| 一区二区三区精品91| 精品久久久噜噜| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲精品自拍成人| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久影院123| 欧美xxⅹ黑人| 国产爽快片一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av.av天堂| 国产毛片在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 69精品国产乱码久久久| a级一级毛片免费在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 久久国产乱子免费精品| 99久久精品一区二区三区| 能在线免费看毛片的网站| 国产 一区精品| 99久久精品一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 久久国产乱子免费精品| 久热这里只有精品99| av国产久精品久网站免费入址| 91aial.com中文字幕在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 99九九在线精品视频 | 丝袜喷水一区| 精品少妇久久久久久888优播| a级毛片在线看网站| 日本91视频免费播放| av国产精品久久久久影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日本爱情动作片www.在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片|