大馬士革玫瑰組培與快繁技術(shù)研究

龔維紅

摘 要：以大馬士革玫瑰當(dāng)年生莖段為材料，開展大馬士革玫瑰組培快繁技術(shù)的研究。結(jié)果表明：取材時(shí)間以5月為佳，取材部位以莖尖下5～8節(jié)芽為好，繼代培養(yǎng)以MS+ZT 0.1mg/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L為佳，其增殖系數(shù)可達(dá)3.7;生根培養(yǎng)基以MS+NAA 0.2mg/L為好，其生根率為71.6%。

關(guān)鍵詞：大馬士革玫瑰;組培;快繁

中圖分類號 S685.120.4+3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2022）01-0019-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Rosa Damascena

GONG Weihong

（Suzhou Polytechnic Institute of Agriculture， Suzhou 215008， China）

Abstract： The passage studied on the techniques of fast multiplication of shoot tips for Rosa damascene. The result show： The best time for getting stems is May， the best parts for getting materials are 5～8 knots under shoot tips. The best medium for germination and propagation is MS+ZT 0.1mg/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L， proliferation rate reached 3.7. The best medium for rooting was MS+NAA 0.2mg/L， rooting rate was 71.6%.

Key words： Damascus Rose; Tissue culture; Rapid propagation

大馬士革玫瑰，薔薇科，薔薇屬，是提取玫瑰精油和玫瑰香水的主要原料，尤其用其玫瑰花提取的玫瑰精油經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高，素有“液體黃金”之稱，在醫(yī)療保健、高檔香水、美容用品、食品添加劑、煙草等行業(yè)中廣泛應(yīng)用。該品種玫瑰中含有300多種化學(xué)成分（如香茅醇、香葉醇等），還含有人體必需的18種氨基酸及微量元素，比國內(nèi)已有的玫瑰品種多了80余種有效成分，是世界公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)玫瑰品種。但大馬士革玫瑰用傳統(tǒng)方式進(jìn)行繁殖，繁殖系數(shù)小、成活率低，2012年筆者進(jìn)行了大馬士革玫瑰硬枝扦插試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用常規(guī)方式扦插，其生根率不到10%，遠(yuǎn)低于其他品種的玫瑰。趙蓓蓓等[1]研究發(fā)現(xiàn)，綠枝扦插需要在全光照迷霧條件下，采用適合濃度的生長調(diào)節(jié)劑處理才能達(dá)到90%，而且扦插繁殖受季節(jié)限制。而組織培養(yǎng)具有生長周期短、增殖系數(shù)高、能周年生產(chǎn)的特點(diǎn)[2]，國內(nèi)雖有一些有關(guān)大馬士革玫瑰組培的報(bào)道[3-5]，但對取材時(shí)間、取材部位未做過相關(guān)研究。為了更好地探索大馬士革玫瑰的組培過程，以有效緩解目前大馬士革玫瑰傳統(tǒng)繁殖方式不能滿足市場需求的困境，筆者從外植體取材部位、取材時(shí)間、增殖培養(yǎng)基激素的選擇、生根培養(yǎng)基篩選等方面對大馬士革玫瑰的組培技術(shù)進(jìn)行了研究，以期為大馬士革玫瑰工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試材料為上海市園林科學(xué)研究所鄔橋?qū)嶒?yàn)基地的2年生盆栽大馬士革玫瑰。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

1.2.1 外植體的獲取與滅菌 逢單月5號選取生長正常無病害植株，摘取當(dāng)年生新發(fā)嫩枝，去葉、去皮刺后用小毛刷蘸取含洗潔劑的水溶液，將莖及葉腋處的灰塵及雜物洗刷干凈，在自來水下沖洗1h，剪成帶2～3個(gè)芽的小段，將莖尖1～4個(gè)芽、莖尖下5～8節(jié)芽及莖尖下9～12個(gè)芽位分別放置在3個(gè)不同容器中。在超凈工作臺上將洗凈的不同部位的莖段分別放入75%酒精溶液中浸泡30s，用無菌水過濾2～3遍，再用0.1%升汞消毒8min，然后用無菌水沖洗5遍，無菌濾紙吸干備用，最后用滅過菌的剪刀將材料剪成單芽小段。

1.2.2 外植體取材時(shí)間的篩選 逢單月5日取材，以MS為基本培養(yǎng)基，附加3%蔗糖、0.7%瓊脂和6-BA 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L的生長調(diào)節(jié)劑。觀察芽體萌發(fā)生長情況，并及時(shí)記錄。培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為25℃左右，光照強(qiáng)度為2500Lx，光照時(shí)間為12h/d。

污染率（%）=（污染苗數(shù)/接種外植體數(shù)）×100 （1）

芽誘導(dǎo)率（%）=（≥0.5cm芽體外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100 （2）

褐變率（%）=（褐化苗數(shù)/接種外植體數(shù)）×100 （3）

存活率（%）=（存活外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100 （4）

1.2.3 外植體取材部位的篩選 分別以莖尖1～4芽位、莖尖下5～8個(gè)芽位、莖尖下9～12個(gè)芽位為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，附加6-BA 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L，觀察記錄不同部位芽萌發(fā)生長情況。

1.2.4 增殖激素的篩選 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，以6-BA、ZT和IBA為生長調(diào)節(jié)劑，6-BA分別采用0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0mg/L，ZT采用0.1、0.2mg/L，NAA采用0.1mg/L，每個(gè)處理接種20瓶，每瓶2個(gè)外植體，連續(xù)繼代2次并調(diào)查增殖系數(shù)。增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)相同。

增殖率=增殖芽數(shù)/接種芽數(shù) （5）

1.2.5 壯苗與生根 將分化出來的試管苗轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基內(nèi)復(fù)壯，將復(fù)壯后長勢旺盛、節(jié)間伸長適度的無根小苗轉(zhuǎn)移到不同濃度的NAA、IBA的MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行試管內(nèi)生根試驗(yàn)，40d后觀察生根情況，篩選出最適宜生根的培養(yǎng)基。

生根率=生根苗數(shù)/接種苗數(shù) （6）

2 結(jié)果與分析

2.1 不同取材時(shí)間對大馬士革玫瑰培養(yǎng)效果的影響 對大馬士革玫瑰進(jìn)行隔月取材（試驗(yàn)材料為莖段中上部飽滿芽），以篩選出合適的取材時(shí)間。由圖1和表1可知，取材時(shí)間對大馬士革玫瑰誘導(dǎo)有較大影響，5月份不僅誘導(dǎo)率、成活率高，污染率、褐化率低，而且成苗時(shí)間短，7d左右芽體便能生長;而1月份芽要17d才能萌發(fā)，并且苗較瘦弱;7月、9月盡管芽體萌發(fā)速度尚可，但材料消毒困難，極易發(fā)生污染，而且由于內(nèi)生菌存在，培養(yǎng)5～7d后枝條頂端會不斷冒出灰白色霉菌，下端也有灰色霉菌產(chǎn)生，給無菌苗獲取帶來一定困難。因此，5月是大馬士革玫瑰取材的最佳時(shí)間。

2.2 取材部位對芽誘導(dǎo)的影響 不同部位芽體飽滿程度不同，萌發(fā)速率不同。由表2可知，莖尖下5～8節(jié)芽位的芽7d左右即能萌發(fā)，并且誘導(dǎo)率高達(dá)96%，而莖尖的芽需要10d左右才能萌發(fā)，誘導(dǎo)率只有65%。這說明芽體萌發(fā)速率與取芽部位有密切關(guān)系，所取莖段腋芽越飽滿，生長越健壯，萌發(fā)越快。

2.3 不同激素濃度對大馬士革玫瑰增殖的影響 植物生長調(diào)節(jié)劑能夠促進(jìn)植物生長、器官分化等，在組織培養(yǎng)形態(tài)建成中起著至關(guān)重要的作用。由表3可知，不同的激素、不同的濃度對大馬士革玫瑰增殖有著不同的影響。當(dāng)ZT濃度是0.1mg/L時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，增殖率也隨之提高，當(dāng)6-BA濃度超過0.8mg/L以后，增殖率呈現(xiàn)下降的趨勢;當(dāng)ZT濃度為0.2mg/L、6-BA濃度小于0.5mg/L時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，增殖率呈現(xiàn)上升趨勢，當(dāng)6-BA濃度超過0.5mg/L以后，增殖率發(fā)生下降。因此，最適宜大馬士革玫瑰增殖的培養(yǎng)基是：MS+ZT 0.1mg/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L，其增殖系數(shù)可達(dá)3.7。同時(shí)，在試驗(yàn)中，隨著ZT及6-BA濃度的增加，玻璃化苗的現(xiàn)象增加，尤其是在2次繼代后，玻璃化現(xiàn)象更為嚴(yán)重。因此，為了使苗生長健康，在繼代2～3次后，應(yīng)采用無激素的基本培養(yǎng)基進(jìn)行1次復(fù)壯，以緩解玻璃化的現(xiàn)象。

2.4 生根培養(yǎng)基的篩選 當(dāng)苗高長到2.5cm左右時(shí)，移到MS培養(yǎng)基中進(jìn)行復(fù)壯，當(dāng)復(fù)壯苗長到3cm左右時(shí)接種到含有不同濃度NAA和IBA的MS生根培養(yǎng)基上，40d后觀察生根情況。由表4可知，當(dāng)NAA濃度小于0.2mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增加，生根率和生根數(shù)均呈現(xiàn)上升趨勢，而當(dāng)NAA濃度超過0.2mg/L時(shí)，生根率和生根數(shù)呈現(xiàn)下降趨勢，同樣單獨(dú)使用IBA也呈現(xiàn)出相同規(guī)律。綜合使用10種生根培養(yǎng)基，認(rèn)為采用MS+NAA 0.2mg/L對大馬士革玫瑰生根效果較好，不僅生根率高，而且生根數(shù)量多，有利于移栽后成活。

3 結(jié)論與討論

3.1 外植體取材時(shí)間 1年內(nèi)不同月份采集的大馬士革玫瑰莖段培養(yǎng)效果不同，春季5月為最佳取材時(shí)間，冬季1月采集較不適宜。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因可能是：5月莖段生長健壯，腋芽飽滿，貯藏營養(yǎng)豐富，生理活性強(qiáng)，此時(shí)進(jìn)行離體培養(yǎng)容易萌發(fā);1月氣溫低，腋芽尚處于半休眠狀態(tài)，此時(shí)進(jìn)行離體培養(yǎng)，因體內(nèi)促進(jìn)腋芽萌發(fā)的激素水平低下，芽不易萌發(fā)，故而不適宜取材。夏季7月也不太適宜，因?yàn)榇藭r(shí)外植體內(nèi)生菌較高，進(jìn)行初培，極易污染。因此，外植體取材最佳時(shí)間為春季5月。

3.2 取材部位 以大馬士革玫瑰莖段為外植體進(jìn)行快繁時(shí)，選取枝條中上部5～8節(jié)的腋芽培養(yǎng)效果最好，頂部效果較差，這可能與芽的異質(zhì)性有關(guān)。頂芽因發(fā)育時(shí)間短，內(nèi)含營養(yǎng)物有限，且消毒時(shí)間長，損傷大，影響了其萌發(fā);中部芽因營養(yǎng)積累充分，激素含量適中，所以誘導(dǎo)率高。

3.3 植物激素 基本培養(yǎng)基保證了培養(yǎng)物的生存與最低的生理活動(dòng)，但只有配合使用適當(dāng)?shù)闹参锷L調(diào)節(jié)劑才能誘導(dǎo)細(xì)胞分裂、生長、分化。適當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素和生長素比例能促進(jìn)芽的萌發(fā)。試驗(yàn)結(jié)果表明，適合大馬士革玫瑰增殖的培養(yǎng)基為：MS+ZT 0.1mg/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L，其增殖系數(shù)可達(dá)3.7，其他激素組合雖然也可促進(jìn)增殖，但增殖效果相對較差。由此可見，增殖過程中適量、適宜選用生長調(diào)節(jié)劑種類及濃度非常重要。

3.4 生根培養(yǎng)基 根據(jù)植物生根原理，植物的生根與植物體內(nèi)生長素的含量有關(guān)，低濃度能促進(jìn)根的生長，高濃度則抑制根的生長。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對大馬士革玫瑰生根較為有利的培養(yǎng)基是：MS+NAA 0.2mg/L，不僅生根率高，而且生根數(shù)量多，根粗，健壯;高濃度的則生根量少，根弱。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)編：徐世紅）