烏靈膠囊對卒中后癲癇病人炎性因子及氧化應(yīng)激水平的影響

余廣蘭，魏俊

腦卒中是神經(jīng)內(nèi)科常見的急性腦血管病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率的特點，嚴重威脅人民的生命健康。Jackson在1864年首次提出腦血管疾病與癲癇的關(guān)系[1]。腦卒中后癲癇（post-stroke epilepsy，PSE）是指既往無癲癇病史，卒中后在一定時間內(nèi)發(fā)作的癲癇病變，并排除腦部病變和其他代謝性疾病[2]。據(jù)統(tǒng)計，PSE整體發(fā)病率約3%～30%，在65歲以上的老年新發(fā)癲癇病人中，PSE病人的比例可達 30%～49%[3-4]。Tanaka等[5]研究發(fā)現(xiàn)，約三分之一的PSE病人在一年內(nèi)發(fā)作復(fù)發(fā)。PSE作為卒中后常見的并發(fā)癥，可加重卒中后的腦損傷，嚴重影響腦卒中病人的生活質(zhì)量和社會功能，是導致其殘疾及死亡的重要原因。因此，如何采用有效措施控制及預(yù)防卒中后癲癇發(fā)作是亟待解決的課題。歐洲癲癇診療指南推薦，對于已經(jīng)發(fā)生卒中后癲癇發(fā)作的病人，均應(yīng)給予抗癲癇藥物（antiepileptic drugs，AEDs）輔助治療[6]。但是，對于AEDs的選擇、給藥劑量及用藥時間并未形成共識。左乙拉西坦是一種新型AEDs，為吡咯烷酮衍生物，口服具有廣譜、起效快、生物利用度高及病人耐受性好等特點，且與其他藥物之間的相互作用較少，對病人的睡眠和認知功能幾乎無不良影響[7]。在國際抗癲癇聯(lián)盟（international leagueagainst epilepsy，ILAE）建議中，對于成人部分性癲癇發(fā)作，左乙拉西坦被作為A級推薦[8]。但據(jù)統(tǒng)計，單藥治療PSE在1年內(nèi)的完全控制率為54%～67%[9]。烏靈膠囊是藥用真菌烏靈菌制成的中藥制劑，具有補腎健腦、養(yǎng)心安神的功效。研究表明，烏靈菌粉具有抗癲癇的作用[10]。本研究將烏靈膠囊應(yīng)用于采用左乙拉西坦治療的PSE病人中，探討其臨床療效及對病人炎性因子、氧化應(yīng)激及神經(jīng)細胞因子水平的影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析宜賓市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2015年12月至2018年12月收治的120例PSE病人的臨床資料。納入標準：所有病人均符合第四屆全國腦血管病學術(shù)會議制定的腦卒中診斷標準[11]，并經(jīng)影像學檢查證實為腦卒中；PSE的診斷參照2014年國際抗癲癇聯(lián)盟制定的標準[12]；非誘發(fā)性癲癇發(fā)作≥2次；均為遲發(fā)性癲癇（腦卒中2周后發(fā)生）。排除標準：原發(fā)性癲癇；卒中前有癲癇病史或有癲癇家族史；伴有嚴重的基礎(chǔ)疾?。◥盒阅[瘤及心、肺、肝、腎器官功能不全等）；合并腦部其他器質(zhì)性病變（顱內(nèi)感染、腦腫瘤等）；合并代謝性疾病；對本研究所使用的藥物有過敏史或過敏反應(yīng)。所有病人按治療方法不同分為觀察組與對照組，各60例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 腦卒中后癲癇120例一般臨床資料比較

1.2 方法對照組：口服左乙拉西坦片（UCB Pharma S.A.比利時，批號J20160085），起始治療劑量為500毫克/次，每日2次，根據(jù)臨床效果及耐受情況，可逐漸增加至1 500毫克/次，每日2次。觀察組：在對照組基礎(chǔ)上加用烏靈膠囊（浙江佐力藥業(yè)股份有限公司，批號Z19990048）口服，3粒/次，每日3次。兩組均連續(xù)治療6個月。

1.3 觀察指標①臨床療效：治療6個月后評價臨床療效，療效標準[13]為臨床控制：用藥期間無癲癇發(fā)作；顯效：用藥期間月癲癇發(fā)作頻率較治療前減少≥75%；有效：用藥期間月癲癇發(fā)作頻率減少50%～74%；無效：用藥期間月癲癇發(fā)作頻率減少<50%或增加?？傆行?臨床控制+顯效+有效。②采集兩組治療前及治療后6個月后清晨空腹外周靜脈血，采用ELISA法檢測炎性因子：白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），采用化學比色法檢測氧化應(yīng)激指標：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、髓過氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）；采用ELISA法檢測神經(jīng)細胞因子：神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、EF手型鈣結(jié)合蛋白（S100B蛋白）及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料用±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，不同時間組內(nèi)比較采用配對樣本t檢驗。計數(shù)資料用例數(shù)或率表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后臨床療效比較治療后，觀察組總有效率高于對照組（χ2=5.07，P=0.024）。見表2。

表2 腦卒中后癲癇120例兩組治療前后臨床療效比較/例（%）

2.2 兩組治療前后炎性因子水平比較治療前，兩組IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；治療后，兩組IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平低于治療前（P<0.05），觀察組IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平低于對照組（P<0.05）。見表3。

表3 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組炎性因子水平比較/（pg/mL，±s）

表3 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組炎性因子水平比較/（pg/mL，±s）

注：IL-1β為白細胞介素-1β，IL-6為白細胞介素-6，IL-8為白細胞介素-8，TNF-α為腫瘤壞死因子-α。①與對照組比較，P<0.05。

例數(shù)6 0 IL-1β組別對照組治療前治療后t值P值觀察組治療前治療后t值P值IL-6IL-8TNF-α 28.70±5.49 17.51±5.39 11.22 0.000 32.01±7.70 21.46±4.57 9.04 0.000 27.51±7.29 16.36±4.96 10.22 0.000 46.09±7.47 29.73±5.86 13.81 0.000 60 45.54±10.17 19.90±4.51①17.67 0.000 29.03±5.91 12.32±4.40①17.95 0.000 31.31±6.83 15.68±4.66①15.69 0.000 26.12±8.01 10.57±4.53①13.75 0.000

2.3 兩組治療前后氧化應(yīng)激指標比較治療前，兩組SOD、MDA、MPO、GSH-Px水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；治療后，兩組SOD、GSH-Px水平高于治療前，MDA、MPO水平低于治療前（P<0.05）；觀察組SOD、GSH-Px水平高于對照組，MDA、MPO水平低于對照組（P<0.05）。見表4。

表4 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組氧化應(yīng)激指標比較/±s

表4 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組氧化應(yīng)激指標比較/±s

注：SOD為超氧化物歧化酶，MDA為丙二醛，MPO為髓過氧化物酶，GSH-Px為谷胱甘肽過氧化物酶。①與對照組比較，P<0.05。

組別對照組治療前治療后t值P值觀察組治療前治療后t值P值例數(shù)60 SOD/（U/mL）MDA/（nmol/mL）MPO/（U/L）GSH-px/（U/L）86.29±8.54 97.21±9.12?6.74 0.000 15.83±3.71 10.82±1.24 10.27 0.000 636.12±118.83 539.29±116.09 4.50 0.000 46.83±6.73 59.11±6.96?9.78 0.000 60 46.03±7.20 78.50±9.06①?20.85 0.000 85.90±10.59 129.15±11.42①?20.05 0.000 15.76±3.67 6.43±1.28①18.30 0.000 631.25±114.72 422.87±105.69①11.76 0.000

2.4 兩組治療前后神經(jīng)細胞因子比較治療前，兩組NSE、S100B、BDNF水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；治療后，兩組NSE、S100B低于治療前，BDNF高于治療前（P<0.05）；觀察組NSE、S100B低于對照組，BDNF高于對照組（P<0.05）。見表5。

表5 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組神經(jīng)細胞因子比較/（ng/mL，±s）

表5 腦卒中后癲癇120例治療前后兩組神經(jīng)細胞因子比較/（ng/mL，±s）

注：NSE為神經(jīng)元特異性烯醇化酶，S100B蛋白為EF手型鈣結(jié)合蛋白，BDNF為腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子。①與對照組比較，P<0.05。

例數(shù)60 NSE組別對照組治療前治療后t值P值觀察組治療前治療后t值P值S100B BDNF 10.71±1.83 8.38±1.58 7.328 0.000 0.35±0.06 0.21±0.08 10.839 0.000 17.99±4.20 22.90±4.48 5.950 0.000 60 18.16±4.69 26.23±4.31①11.011 0.000 10.45±1.79 6.22±1.23①14.758 0.000 0.36±0.07 0.13±0.03①21.932 0.000

3 討論

近年來，腦卒中的發(fā)病率逐年上升，但通過組織纖溶酶原激活劑和神經(jīng)保護制劑的應(yīng)用及機械取栓技術(shù)的發(fā)展，腦卒中死亡率已有大幅度地下降[1]。腦卒中后常見的并發(fā)癥PSE是幸存者殘疾甚至死亡的重要原因之一[2]。腦組織的特性使其對氧化應(yīng)激損傷有高度敏感性[14]。研究證實，氧化應(yīng)激反應(yīng)引起的氧化損傷在腦卒中的病理過程中起著關(guān)鍵作用[15]。腦卒中發(fā)病過程中的氧化應(yīng)激反應(yīng)所產(chǎn)生超負荷的活性氧（reactive oxygen species，ROS）、活性氮（reactive nitrogen species，RNS）等物質(zhì)，可誘導神經(jīng)細胞凋亡，進而導致癲癇發(fā)作[16]。而癲癇發(fā)作會加重血腦屏障的破壞，促進腦部炎癥反應(yīng)，激活星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，釋放TNF-α、IL-1β、IL-6及高遷移率組蛋白1（high mobility histone1，HMGB1）等炎性因子，降低癲癇發(fā)作閾值，造成惡性循環(huán)[17]。因此，氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎性因子對神經(jīng)系統(tǒng)的作用在PSE發(fā)病過程中扮演著重要角色。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、MPO水平低于治療前，SOD、GSHPx水平高于治療前（P<0.05）。結(jié)果提示，氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎性因子參與PSE的病理過程。

烏靈膠囊是用我國珍稀藥用真菌烏靈菌經(jīng)現(xiàn)代生物技術(shù)制成的純中藥制劑，主要成分為烏靈菌粉，具有抗焦慮及抑郁、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、健腦護腦等藥理作用，在臨床上廣泛用于失眠、頭痛、焦慮、抑郁等癥狀及糖尿病、腸易激綜合征及慢性疲勞綜合征的治療[18]。研究表明，烏靈菌粉可促進抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（GABA）進入腦內(nèi)，提高谷氨酸脫羧酶（GAD）活性促進興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸（Glu）脫羧生成GABA并激活GABA受體，從而發(fā)揮抗癲癇作用[19]。除此之外，烏靈菌粉抗氧化應(yīng)激及炎性因子釋放的作用已逐步被證實。白云霞等[20]研究表明，烏靈菌粉能增加動脈粥樣硬化兔抗氧化酶活力，抑制C反應(yīng)蛋白（CRP）、IL-6、TNF-α等炎性因子的產(chǎn)生而降低或緩解動脈粥樣硬化。劉鳳麗等[21]研究表明，烏靈膠囊可通過提高IL-9，降低IL-1β、IL-10等炎性因子的表達而改善腦卒中后疲勞。本研究結(jié)果顯示，治療后，觀察組IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、MPO水平低于對照組，SOD、GSH-Px水平高于對照組（P<0.05）。結(jié)果提示，加用烏靈膠囊較單用左乙拉西坦可進一步降低PSE病人的氧化應(yīng)激反應(yīng)并抑制炎性因子釋放。

PSE過程中伴隨著神經(jīng)元修復(fù)性改變和神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)的異常。NSE、S100B、BDNF是與神經(jīng)細胞生長、損傷和修復(fù)相關(guān)的蛋白，其表達與PSE的發(fā)生有關(guān)，可以一定程度反映神經(jīng)系統(tǒng)的損傷程度[22]。本研究結(jié)果顯示，治療后，觀察組總有效率高于對照組（P<0.05）；觀察組NSE、S100B低于對照組，BDNF高于對照組（P<0.05）。提示烏靈膠囊輔助左乙拉西坦治療PSE療效顯著，可以減少NSE、S100B神經(jīng)損傷因子的釋放及增加神經(jīng)保護因子BDNF的表達，抗氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎性因子釋放可能是烏靈膠囊提高治療有效率，減輕神經(jīng)損傷的機制之一。

綜上所述，烏靈膠囊輔助治療PSE，可提高治療有效率，且能明顯減少病人炎性因子釋放及降低氧化應(yīng)激水平并減輕神經(jīng)損傷。但本研究樣本量較小，可能造成結(jié)果偏倚。