200株淋球菌對7種抗生素的耐藥性情況分析

韓旭（天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院,天津 300120）

淋球菌對抗菌藥物的敏感性隨病原菌抗菌活性改變，加之抗菌藥物的不合理性使用和基礎(chǔ)疾病多樣化等因素的影響，它的耐藥率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，使得其感染引發(fā)的淋病治療成為了難點[1]。故進(jìn)行淋球菌體外藥物敏感性前哨監(jiān)測有助于耐藥菌株傳播的預(yù)防和保證抗菌療法的有效性。本研究統(tǒng)計分析了我院200株淋球菌分離菌株對7種抗生素的體外最低抑菌濃度（MIC）、質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌（TRNG）及產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌（PPNG）等情況，以期為臨床抗菌藥物的有效性選擇提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 200株淋球菌分離培養(yǎng)自2019年8月-2021年8月我院婦科、皮膚病與性病門診患者的生殖道分泌物。所有菌株經(jīng)革蘭氏染色、觀察菌落形態(tài)、行氧化酶和糖發(fā)酵試驗鑒證，分純后再純代培養(yǎng)一次，然后洗脫保存于脫脂牛奶中，-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

青霉素、頭孢曲松、頭孢克肟、四環(huán)素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星和大觀霉素7種抗生素和WHO標(biāo)準(zhǔn)菌株C、J、K、L、P由天津市疾病預(yù)防控制中心提供。

1.2 方法 將所有臨床分離菌株和WHO標(biāo)準(zhǔn)菌株凍融后接種于巧克力平板培養(yǎng)18-24小時，培養(yǎng)后用無菌生理鹽水取菌落配成1×107CFU/mL菌懸液。高壓滅菌淋球菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，冷卻至50℃時加入10%新鮮無菌脫纖維綿羊血。取7種倍比稀釋好的抗生素工作液（青霉素濃度為0.06-8mg/L，頭孢曲松和頭孢克肟濃度為0.002-1mg/L，四環(huán)素濃度為4-16mg/L，阿奇霉素濃度為0.016-8mg/L，環(huán)丙沙星濃度為0.008-16mg/L，大觀霉素濃度為1-128mg/L）0.2mL置于20mL淋球菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻后傾倒入平板。取各株菌懸液接種在各濃度平板上，在37℃、5% CO2環(huán)境下培養(yǎng)20-24小時，觀察和記錄MIC值。判斷各藥物對菌株的敏感性，四環(huán)素MIC≥16mg/L即為TRNG菌株。紙片碘量法檢測產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶，若藍(lán)色濾紙顏色變?yōu)闊o色即為PPNG菌株。

2 結(jié)果

2.1 淋球菌抗菌活性和TRNG、PPNG菌株檢出情況 所有菌株對大觀霉素敏感性最高，對環(huán)丙沙星耐藥性最高。見表1。

表1 200株淋球菌抗菌活性結(jié)果統(tǒng)計[n(%)]

2.2 多重耐藥檢測情況 多重耐藥菌株占比75%。見表2。

表2 多重耐藥檢測情況[n(%)]

3 討論

2012年疾病控制中心將淋球菌從形態(tài)學(xué)角度將其分類為革蘭陰性雙球菌，且極具普遍易感性的淋球菌被列為了“超級細(xì)菌”，其可通過對細(xì)胞膜通透性的改變、改變藥物作用靶點、產(chǎn)生抗生素滅活酶等多種機制而使得抗菌藥物易感性降低。因此，須對淋球菌耐藥情況進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)測以規(guī)范抗菌藥物使用，從而降低多重耐藥菌株的發(fā)生率[2]。

本文研究發(fā)現(xiàn)，所有淋球菌對環(huán)丙沙星耐藥率高達(dá)99.50%，這與李明[3]等人的統(tǒng)計結(jié)果相一致，原因可能與氟喹諾酮類藥物廣泛用于臨床泌尿生殖道感染有關(guān)，故環(huán)丙沙星已不適合推薦用于臨床治療。本研究統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)200株淋球菌對青霉素的耐藥率為91.50%，高于李明[3]等人報道的73.80%，與黎小東[4]等人的報道結(jié)果大體一致，說明淋球菌對青霉素的耐藥情況具有地域差異性；且本研究檢出PPNG占比達(dá)45.50%，高于黎小東[4]和李明[3]等人報道的35.00%和38.50%，表明青霉素不能用于本地區(qū)淋病的治療，且應(yīng)注意出現(xiàn)使用其他β-內(nèi)酰胺酶類抗生素發(fā)生交叉耐藥的情況。檢出91.00%菌株對四環(huán)素耐藥，其中TRNG占比38.00%，提示四環(huán)素也不適合用于淋病的治療。但在實際臨床工作中，經(jīng)驗性使用青霉素和四環(huán)素治療時進(jìn)行PPNG和TRNG流行率監(jiān)測仍具必要性。阿奇霉素是對多種病原菌具有抗菌活性的新型大環(huán)內(nèi)酯類藥物；本院淋球菌對阿奇霉素的耐藥率為17.50%，與國內(nèi)大多數(shù)地區(qū)的耐藥情況相符合[5]，但分析多重耐藥情況發(fā)現(xiàn)與阿奇霉素相關(guān)的多重耐藥率高達(dá)31.50%，表明阿奇霉素聯(lián)合其他藥物用于淋球菌治療可能效果更佳。本研究發(fā)現(xiàn)200株淋球菌的多重耐藥率為75.00%，與楊寒淞[6]等人的報道大體相同，故加強對淋球菌的多重耐藥監(jiān)測具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)頭孢曲松、頭孢克肟和大觀霉素敏感率分別為95.00%、92.50%和100.00%，且未發(fā)現(xiàn)相關(guān)多重耐藥情況出現(xiàn)，表明這3種藥物可用于淋球菌的一線治療，但也應(yīng)該密切監(jiān)測耐藥情況以防耐藥菌株的暴發(fā)流行。