牡蠣肽與人參提取物配伍提高雄性小鼠性功能及抗疲勞作用研究

駱賢亮，晏永球,2，馮鳳琴,

（1.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院, 浙江杭州 310058；2.寧波御坊堂生物科技有限公司, 浙江寧波 315012）

隨著年齡的增長(zhǎng)，下丘腦-垂體性腺軸功能逐步減退，促性腺激素釋放激素分泌下降，造成性欲和勃起功能減弱以及肌力下降等癥狀。性功能降低對(duì)男性的健康、心理狀態(tài)和人際關(guān)系產(chǎn)生嚴(yán)重的影響[1]。2015年，一項(xiàng)中老年男性生殖健康調(diào)查發(fā)現(xiàn)40～49歲、50～59歲和60～69歲的男性勃起功能障礙（Erectile dysfunction, ED）患病率分別為55.3%、88.2%和91.8%[2]。2017年，Zhang等[3]調(diào)查發(fā)現(xiàn)40歲以上男性ED總患病率約40.56%，其中抽煙（頻率≥30根/d）和肥胖（BMI≥30 kg/m2）是增加患病概率的危險(xiǎn)因素。此外，研究表明過(guò)度或高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)不僅引起運(yùn)動(dòng)損傷，還可能降低激素水平，引起機(jī)體疲勞、性功能障礙、肌肉運(yùn)動(dòng)力下降等癥狀[4]。市面上改善男性性功能的藥物可能引起某些不良反應(yīng)，如頭痛、鼻塞、肌肉疼痛、視力模糊、面部潮紅等，不能長(zhǎng)期服用[5]。據(jù)報(bào)道，許多抗疲勞、補(bǔ)腎壯陽(yáng)類(lèi)保健食品為達(dá)到速效的目的，非法添加西地那非等處方藥，危害消費(fèi)者健康[6]。為減小藥物帶來(lái)的副作用，開(kāi)發(fā)安全有效的食源性活性物質(zhì)具有實(shí)際應(yīng)用意義。

疲勞是一種精神或身體疲倦、耐力下降的復(fù)雜生理和心理現(xiàn)象[7]，可分為中樞疲勞和外周疲勞[8-9]，其產(chǎn)生與多種因素相關(guān)，包括組織中代謝物質(zhì)的積累、能量供應(yīng)不足、氧化應(yīng)激、肌肉損傷等[10]。長(zhǎng)期疲勞可能引發(fā)癌癥、抑郁、多發(fā)性硬化等疾病的發(fā)生，同時(shí)也是機(jī)體“脆弱”反應(yīng)的警示信號(hào)[11]。此外，肌肉疲勞產(chǎn)生時(shí)，機(jī)體感覺(jué)信息的輸入和運(yùn)動(dòng)信息輸出產(chǎn)生變化，肌肉力量和姿勢(shì)控制能力下降[12]，還可能對(duì)性活動(dòng)能力產(chǎn)生一定影響[13]。改善或緩解疲勞癥狀可能需要較長(zhǎng)時(shí)間，但長(zhǎng)期服用化學(xué)藥物可能會(huì)導(dǎo)致一些不良反應(yīng)或毒性作用[14]。近年來(lái)，市場(chǎng)上多種抗疲勞營(yíng)養(yǎng)飲料，通常包含咖啡因、牛磺酸、葡萄糖醛酸、L-酪氨酸、瓜拉那提取物及其他興奮劑[15]，不適用于所有群體。因此，無(wú)論是慢性疲勞還是性功能低下，均嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量和健康，開(kāi)發(fā)具有明確活性功能的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑具有積極意義。

近年來(lái)，由于藥用植物及天然來(lái)源的生物活性物質(zhì)具有來(lái)源豐富、安全性高、生物活性廣泛等特點(diǎn)，引起醫(yī)療和功能食品領(lǐng)域的極大興趣。中醫(yī)認(rèn)為牡蠣具有滋陰補(bǔ)血、生精固腎、強(qiáng)身健體、恢復(fù)疲勞等功能。研究發(fā)現(xiàn)，牡蠣肉及其水解物可提高小鼠的交配能力及血清睪酮濃度、降低5型磷酸二酯酶水平，表現(xiàn)出明顯改善男性性功能的生物活性[16-18]。劉瑜等[19]發(fā)現(xiàn)牡蠣低聚肽能夠顯著改善環(huán)磷酰胺引起的雄激素部分缺乏綜合征，提高雄鼠捕捉和交配次數(shù)。人參，一種十分珍貴的藥食兼用植物，其藥理活性主要依賴(lài)于皂苷，具有補(bǔ)元?dú)狻⒖蛊?、安神補(bǔ)腦等作用[20-21]。鮑雷等[22]表明人參低聚肽具有提高雄性激素水平、增加性腺指數(shù)和縮短交配潛伏期的能力。雖然牡蠣肽及人參提取物具有良好的生理功效，但兩者復(fù)配對(duì)抗疲勞及提高男性性功能的效果是否具有協(xié)同作用鮮有報(bào)道，缺乏科學(xué)驗(yàn)證。此外，由于牡蠣肽口感較差且價(jià)格相對(duì)昂貴，為提高產(chǎn)品品質(zhì)及降低成本投入，研究有效的替代配方對(duì)該領(lǐng)域產(chǎn)品開(kāi)發(fā)與推廣具有積極意義。綜上，鑒于前人的研究基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)初步探究牡蠣肽與人參提取物配伍對(duì)正常雄性小鼠性功能的影響及抗疲勞作用，為深入研究和開(kāi)發(fā)具有緩解疲勞和改善性功能的產(chǎn)業(yè)化功能食品提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR雄性小鼠（5 w，（20±2）g） 由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，并飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心；雌性ICR小鼠（9～10 周）用于性功能實(shí)驗(yàn) 由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。動(dòng)物使用許可證編號(hào)為：SYXK（浙）2018-0012。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均符合浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物倫理要求，并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利原則與規(guī)范要求進(jìn)行，動(dòng)物倫理批準(zhǔn)編號(hào)為：IACUC-20200518-12。所有動(dòng)物自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及飲水，保持環(huán)境溫度（25±2）℃，于12 h光照與12 h黑暗條件下飼養(yǎng)；牡蠣肽（Oyster peptide, OP）、人參提取物（Ginseng extract, GE） 由寧波御坊堂生物科技有限公司提供，OP分子量在1000 Da以下占比97.96%、140～500 Da占比92.69%、總蛋白含量70.6%，GE總皂苷含量10.83%、水分含量4.0%、灰分1.2%；乳酸（LA）、乳酸脫氫酶（LDH）、血尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T-AOC）、肝糖原（LG）及肌糖原（MG）試劑盒 南京建成生物工程研究所；BCA蛋白定量試劑盒 碧云天生物技術(shù)有限公司；睪酮（T）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒 武漢基因美生物科技有限公司；一氧化氮（NO）及5型磷酸二酯酶（PDE-5）ELISA試劑盒 武漢酶免生物科技有限公司；類(lèi)固醇激素合成快速調(diào)節(jié)蛋白（StAR）、17β-羥類(lèi)固醇脫氫酶（HSD17B3）抗體 Proteintech公司。

SHJ-A6恒溫水浴鍋 江蘇安普；Infinite M200 Pro酶標(biāo)儀 瑞士TECAN公司；DM500光學(xué)顯微鏡 上海徠卡顯微系統(tǒng)貿(mào)易有限公司；RM2016病理切片機(jī) 上海徠卡儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 性功能評(píng)價(jià) 將48只小鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白組（同等體積蒸餾水）、牡蠣肽對(duì)照組（0.2 mg/g bw）、人參提取物對(duì)照組（0.2 mg/g bw）、配方低劑量組（0.1 mg/g bw）、配方中劑量組（0.2 mg/g bw）和配方高劑量組（0.6 mg/g bw），每組8只。配方組中，OP與GE配方按比例11:39配制（以國(guó)標(biāo)用量，以及不同比例配方的體外抗氧化活性和消化穩(wěn)定性確定最終配比）。以0.01 mL/g bw灌胃量給予小鼠相應(yīng)劑量的受試物，連續(xù)給藥42 d。48只雌性ICR小鼠于實(shí)驗(yàn)前48 h皮下注射5 μg苯甲酸雌二醇，于實(shí)驗(yàn)前5 h皮下注射5 μg孕酮誘發(fā)動(dòng)情[23]。參考Xi等[13]的實(shí)驗(yàn)方法，灌胃42 d結(jié)束后，在昏暗安靜、有紅色燈光的房間進(jìn)行（19:00～24:00），將雄性小鼠單獨(dú)放在籠子里，使其適應(yīng)15 min。雌性和雄性小鼠放在同一個(gè)籠子里，通過(guò)攝影機(jī)攝錄25 min內(nèi)小鼠交配行為。統(tǒng)計(jì)各組小鼠的性行為參數(shù)，包括捕捉次數(shù)（雄鼠捕捉雌鼠的次數(shù)）；騎跨潛伏期（雄鼠出現(xiàn)第一次騎跨行為的時(shí)間間隔）；騎跨次數(shù)（雄鼠發(fā)生騎跨行為的次數(shù)）；插入潛伏期（雄鼠有第一次插入行為的時(shí)間）；插入次數(shù)（雄鼠射精前插入行為的總次數(shù)）；射精潛伏期（雄鼠第一次插入到射精的時(shí)間間隔）；射精次數(shù)（雄鼠射精的總次數(shù)）；射精后間隔期（雄鼠射精后到再次騎跨插入之間的時(shí)間間隔）。待交配實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從眼球后靜脈收集雄性小鼠血液樣本，3000 r/min離心10 min獲得血清，測(cè)定睪酮（T）、促黃體生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）和NO的濃度。稱(chēng)量附睪、精囊腺、睪丸、陰莖、肝臟、腎臟、胸腺和脾臟重量，計(jì)算臟體比。采用4%多聚甲醛固定肝臟，并通過(guò)HE染色法觀(guān)察肝臟組織。

1.2.2 血清相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè) 參照生化試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定小鼠血清中LDH活性、LA和BUN含量。按照ELISA測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定T、LH、FSH和NO的濃度。

1.2.3 組織中生化指標(biāo)的測(cè)定 取保存好的肌肉和肝臟組織樣本，用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，精確稱(chēng)重，按照試劑盒說(shuō)明測(cè)定肝糖原和肌糖原含量。另稱(chēng)取（0.1±0.05）g肌肉組織，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定肌肉中MDA含量和T-AOC。組織中總蛋白含量的測(cè)定參照BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。取保存好的小鼠陰莖海綿體組織，稱(chēng)取（0.01±0.005）g組織，按照1:9（g:mL）料液比加入生理鹽水，置于組織研磨器中研磨，得到勻漿后離心，取上清。按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定NO和PDE-5含量。

1.2.4 免疫組化測(cè)定 睪酮合成相關(guān)蛋白酶的表達(dá)參考Li等[24]的研究方法，睪丸組織切片常規(guī)脫蠟水化后，通過(guò)緩沖液EDTA修復(fù)切片，滴加山羊血清工作液進(jìn)行封閉，室溫孵育30 min。分別滴加一抗StAR（1:100）和HSD17B3（1:100），4 ℃冰箱過(guò)夜孵育。次日加入山羊抗兔IgG-HRP多聚體（二抗）于37 ℃孵育20 min，PBS輕輕沖洗數(shù)次，滴加稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶繼續(xù)孵育30 min，滴加顯色液DAB（1:20），小心沖洗，蘇木素染色3 min后封片拍照。

1.2.5 抗疲勞功能評(píng)價(jià) 將48只小鼠隨機(jī)分為6組，給藥劑量與給藥方式同1.2.1，給藥42 d，所有動(dòng)物休息30 min后，在泳池中進(jìn)行無(wú)負(fù)荷游泳30 min[25]。游泳30 min后立即從眼球后靜脈收集血液樣本，3000 r/min離心10 min獲得血清，測(cè)定小鼠血清中LDH活性、LA和BUN含量。取小鼠骨骼肌和肝臟組織樣本用于糖原含量的測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 牡蠣肽與人參提取物配伍對(duì)雄性小鼠性功能的影響

2.1.1 臟器指數(shù)與肝臟毒性分析 如表1所示，與空白組相比，牡蠣肽、人參提取物及其配方對(duì)小鼠臟器指數(shù)均沒(méi)有顯著影響（P＞0.05）。肝臟是主要的代謝器官，在動(dòng)物接觸有害物質(zhì)時(shí)最先遭受損傷的器官之一[26]。通過(guò)給予小鼠牡蠣肽、人參提取物及不同劑量的配方溶液42 d，未發(fā)生任何毒性發(fā)作及死亡現(xiàn)象。從肝臟HE切片結(jié)果可知（圖1），各處理組沒(méi)有造成肝細(xì)胞壞死、肝組織損傷等毒性作用。

圖1 小鼠肝臟組織HE染色圖Fig.1 Hematoxylin-eosin （HE） staining of liver tissue

表1 雄性小鼠臟體比Table 1 Organ index of male mice

2.1.2 雄性小鼠性行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表2顯示小鼠性行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果，各處理組均顯著提高小鼠捕捉次數(shù)和射精次數(shù)（P＜0.05），其中高劑量配方組表現(xiàn)出極顯著差異（P＜0.01）。中劑量配方組的騎跨、插入和射精潛伏期均明顯降低，效果優(yōu)于其他處理組，但與空白組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與空白組比較，人參提取物、低、中和高劑量配方組的射精后間隔期分別顯著降低65.77%、60.24%、69.88%和78.20%（P＜0.05）。從交配行為學(xué)可知，人參提取物效果較牡蠣肽強(qiáng)。因此，在配方產(chǎn)品中，人參提取物可能在性功能方面發(fā)揮主要作用。

表2 牡蠣肽、人參提取物及其配方對(duì)小鼠交配行為的影響Table 2 Effect of oyster peptide (OP), ginseng extracts (GE) and combined OP and GE on sexual behavioral related indexes

2.1.3 小鼠性功能相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 圖2a～c顯示雄性小鼠的激素水平。男性的生長(zhǎng)發(fā)育、生育能力以及機(jī)體健康很大程度取決于雄性激素。特別是在中老年時(shí)期，伴隨著睪酮水平的下降，可能會(huì)引起自主神經(jīng)功能絮亂、性功能減退、心理和軀體障礙[27]，低水平雄激素也是男性壽命縮短的危險(xiǎn)因素[28]。各處理組均明顯提高血清睪酮含量，其中中、高劑量配伍組與空白組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），分別提高20.02%和18.77%。FSH可促使睪丸支持細(xì)胞分泌激素結(jié)合蛋白與睪酮結(jié)合，使生精小管內(nèi)維持高濃度睪酮，促進(jìn)精子生成[29]。低、中、高3種不同劑量配方干預(yù)后均顯著提高小鼠促卵泡激素水平（P＜0.05），分別提高17.74%、19.92%和22.07%，效果優(yōu)于牡蠣肽與人參提取物單獨(dú)處理。圖2c表明各處理組的促黃體激素與空白組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。因此，配伍組可能通過(guò)調(diào)控性腺軸功能，提高激素水平和生精能力，從而增強(qiáng)雄性小鼠性功能。

除了激素水平，eNOS/NO/cGMP信號(hào)通路對(duì)男性性功能同樣起著不可或缺的作用。圖2d和圖2e分別顯示血清與陰莖海綿體中NO含量，結(jié)果表明各處理組沒(méi)有顯著影響小鼠血清NO水平（P＞0.05），但低、中劑量配方組使海綿體NO含量顯著上升（P＜0.05）。與空白組相比，各處理組海綿體中PDE-5水平均有明顯下降趨勢(shì)，但只有人參提取物和中劑量配方組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），分別下降14.34%和16.43%。

圖2 牡蠣肽、人參提取物及其配方對(duì)小鼠性功能指標(biāo)的影響Fig.2 Effect of oyster peptide （OP）, ginseng extracts （GE） and combined OP and GE on sexual function related parameters

2.1.4 小鼠睪丸StAR和HSD17B3免疫組化結(jié)果睪丸間質(zhì)細(xì)胞為睪酮激素合成的主要場(chǎng)所，免疫組化結(jié)果顯示StAR和HSD17B3主要分布于睪丸間質(zhì)細(xì)胞中（陽(yáng)性表達(dá)），見(jiàn)圖3a～b。StAR主要負(fù)責(zé)將膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至線(xiàn)粒體內(nèi)膜，使得線(xiàn)粒體內(nèi)膜上的細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶（P450scc）能夠進(jìn)一步催化膽固醇裂解成孕烯醇酮[30]。與空白組相比，StAR蛋白的表達(dá)沒(méi)有顯著差異（P＞0.05），說(shuō)明處理組可能不是通過(guò)調(diào)節(jié)StAR蛋白來(lái)促進(jìn)睪酮分泌。HSD17B3參與睪酮合成的最后一步，將雄烯二酮轉(zhuǎn)化為睪酮，HSD17B3缺乏的臨床診斷標(biāo)志是血液中雄烯二酮與睪酮的比值增高[28]。中、高劑量配方處理組明顯提高睪丸組織中HSD17B3的表達(dá)，但與空白組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖3 牡蠣肽、人參提取物及其配方對(duì)小鼠睪丸StAR和HSD17B3表達(dá)的影響Fig.3 Effect of oyster peptide （OP）, ginseng extracts （GE） and combined OP and GE on the expression of StAR and HSD17B3

2.2 牡蠣肽與人參提取物配伍對(duì)小鼠抗疲勞相關(guān)指標(biāo)的影響

為探究不同處理對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)損傷和代謝產(chǎn)物水平的影響，每組小鼠游泳30 min后測(cè)定抗疲勞相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果如圖4所示。當(dāng)身體消耗糖原所獲得的能量不足，機(jī)體開(kāi)始分解蛋白以獲得能量維持生理功能，但此時(shí)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝產(chǎn)物BUN含量也增加。運(yùn)動(dòng)時(shí)，碳水化合物進(jìn)行無(wú)氧糖酵解產(chǎn)生大量乳酸，引起生理性運(yùn)動(dòng)疲勞，測(cè)定血清LA含量是判斷疲勞程度及有氧代謝能力的重要指標(biāo)之一，降低LA含量是延緩疲勞產(chǎn)生或加快疲勞消除的有效手段[9]。圖4b和圖4c顯示，與空白組相比，中、高劑量配方干預(yù)均顯著降低小鼠血清乳酸及尿素氮水平（P＜0.05），表明配伍組具有加快代謝物消除的作用。各處理組的乳酸脫氫酶活力雖有不同程度的下降，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖4 牡蠣肽、人參提取物及其配方對(duì)小鼠疲勞指標(biāo)的影響Fig.4 Effect of oyster peptide （OP）, ginseng extracts （GE） and combined OP and GE on anti-fatigue related parameters

肝糖原含量是反映小鼠疲勞程度的重要指標(biāo)，其含量越高說(shuō)明能給機(jī)體提供的能量越多[31]。牡蠣肽、低劑量以及中劑量配方處理顯著提高小鼠肝糖原含量（P＜0.05），分別提高112.62%、114.44%和152.15%，說(shuō)明配伍組提高肝糖原的能力可能主要來(lái)源于牡蠣肽。與空白組比較，各處理組的肌糖原含量均有不同程度的提升，其中中劑量配方組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。表明同等劑量下，配伍組增加機(jī)體能量?jī)?chǔ)存的能力強(qiáng)于單組分對(duì)照組。

劇烈運(yùn)動(dòng)可能導(dǎo)致骨骼肌產(chǎn)生過(guò)多的活性氧簇（ROS），發(fā)生一系列氧化反應(yīng)，引起外周性疲勞。測(cè)定肌肉中MDA含量和總抗氧化能力（圖4f和圖4g），發(fā)現(xiàn)各處理組的MDA水平與空白組相比均有顯著性差異（P＜0.01），但總抗氧化能力與空白組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。說(shuō)明牡蠣肽、人參提取物及其配伍組具有抑制脂質(zhì)氧化的作用。

3 討論

從性功能方面，配伍組能有效提高小鼠的捕捉次數(shù)、插入次數(shù)及射精次數(shù)，且同等劑量配伍組效果優(yōu)于單組分對(duì)照組。據(jù)報(bào)道，盡管短時(shí)間低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可促使血清睪酮分泌增加（提高運(yùn)動(dòng)機(jī)能），但急性力竭或長(zhǎng)期高負(fù)荷鍛煉會(huì)降低下丘腦-垂體-性腺軸功能，引起雄激素水平下降[32]或精子畸形率上升[30]，而雄性激素缺乏與機(jī)體疲勞、性功能障礙、肌肉運(yùn)動(dòng)力下降等癥狀密切相關(guān)。長(zhǎng)期或不正確運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，不僅導(dǎo)致機(jī)體疲勞，也會(huì)引起睪丸激素水平顯著下降，改變生理參數(shù)，如精子濃度和形態(tài)、精子DNA完整性、抗氧化能力等[32]。Lim[33]表明某些具有促進(jìn)睪丸激素分泌功能的植物活性物質(zhì)能夠在一定程度上幫助疲勞和體質(zhì)虛弱的男性恢復(fù)身體機(jī)能。人參及其有效成分能夠改善機(jī)體荷爾蒙絮亂，皂苷分子結(jié)構(gòu)與類(lèi)固醇激素相似，對(duì)環(huán)孢素誘導(dǎo)的生精細(xì)胞凋亡和睪酮合成能力下降具有改善作用[34]。本研究中人參提取物的總皂苷含量為10.83%，可能發(fā)揮著重要作用。結(jié)果顯示，單獨(dú)人參提取物處理能明顯提高小鼠血清睪酮和促卵泡激素水平，但與空白組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而中、高劑量配方處理均能顯著提高睪酮和促卵泡激素水平，說(shuō)明牡蠣肽與人參提取物在維持睪酮水平和精子生成方面具有潛在的協(xié)同作用。同樣，張亭等[16]研究表明牡蠣低聚肽配伍核桃肽和山藥多糖能顯著升高正常小鼠血清睪酮和降低PDE-5水平，有效增強(qiáng)性功能。此外，基于睪酮水平的升高，本研究測(cè)定兩種睪酮合成關(guān)鍵蛋白StAR和HSD17B3的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)牡蠣肽、人參提取物及配伍組對(duì)正常小鼠的StAR表達(dá)均沒(méi)有顯著影響（P＞0.05）；中、高劑量配伍組能夠明顯提升HSD17B3的表達(dá)，但與空白組比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明處理組可能不是通過(guò)調(diào)節(jié)StAR和HSD17B3來(lái)促進(jìn)睪酮的合成，該作用機(jī)理有待進(jìn)一步深入探究。

多項(xiàng)研究表明，性刺激時(shí)NO擴(kuò)散到血管平滑肌細(xì)胞中并激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，導(dǎo)致環(huán)狀鳥(niǎo)苷酸（cGMP）依賴(lài)性蛋白激酶（PKG）信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活，使血管快速舒張而勃起[35]。Gao等[35]發(fā)現(xiàn)人參皂甙Re（GS-Re）通過(guò)調(diào)節(jié)eNOS/NO/cGMP通路促使血小板源生長(zhǎng)因子-BB（PDGF-BB）誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖，顯著增加NO和cGMP水平以及phoseNOSSer1177/eNOS比值。同樣，本研究表明中劑量配伍組可明顯提高海綿體中NO水平，有利于提高雄性小鼠性功能，且效果優(yōu)于單組分對(duì)照組。在NO-cGMP通路中，PDE-5酶促進(jìn)cGMP水解，導(dǎo)致cGMP不能進(jìn)一步激活PKG，造成勃起障礙。目前多數(shù)治療勃起功能障礙的藥物為PDE-5抑制劑，但此類(lèi)藥物價(jià)格昂貴，并且可能產(chǎn)生一些不良反應(yīng)[36]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)配伍組能有效降低PDE-5水平，是一種潛在的PDE-5抑制劑。

從抗疲勞方面，本研究發(fā)現(xiàn)單組分牡蠣肽和中劑量配方均顯著提高小鼠肝糖原含量，人參提取物組則沒(méi)有顯著變化，說(shuō)明在能量?jī)?chǔ)存方面，牡蠣肽在組分中起主要作用。同樣，Zhang等[37]從海馬中提取活性肽（SH200），發(fā)現(xiàn)SH200明顯延長(zhǎng)小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間，提高肝糖原和ATP含量，并激活A(yù)MMPK/PGC-1α信號(hào)通路改善小鼠線(xiàn)粒體功能，增強(qiáng)骨骼肌代謝和保護(hù)肌纖維。陶雅浩等[38]研究表明，補(bǔ)充牡蠣肽能夠提高無(wú)訓(xùn)練小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)蛋白質(zhì)/氨基酸分解供能的能力，降低肌糖原和肝糖原的消耗。運(yùn)動(dòng)不僅導(dǎo)致能量的消耗，同時(shí)也使代謝產(chǎn)物大量堆積，擾亂機(jī)體穩(wěn)態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)與空白組相比，只有中、高劑量配方組使小鼠血清BUN和LA水平明顯下降，說(shuō)明配伍組比單組分處理的效果更佳。MDA是細(xì)胞膜多不飽和脂肪酸氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，能夠反映運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)細(xì)胞氧化損傷程度[39]。Wang等[40]研究表明經(jīng)過(guò)30 min游泳后，帶魚(yú)肽組的小鼠BUN和MDA含量均比空白組低，具有抗疲勞功效。同樣，本研究各處理組均明顯降低運(yùn)動(dòng)后小鼠骨骼肌中MDA水平，表明兩種活性物質(zhì)在減小細(xì)胞脂質(zhì)氧化損傷方面具有潛在活性。

4 結(jié)論

牡蠣肽與人參提取物復(fù)配具有緩解疲勞和提高雄性小鼠性功能的潛力，且效果優(yōu)于單獨(dú)的牡蠣肽和人參提取物組。結(jié)果表明，配伍組主要通過(guò)提高糖原含量，降低乳酸、尿素氮和MDA含量表現(xiàn)出抗疲勞作用。在性功能方面，配伍組顯著提高小鼠交配行為學(xué)指標(biāo)，并可能通過(guò)調(diào)節(jié)激素水平，改善eNOS/NO/cGMP信號(hào)通路中NO和PDE-5的表達(dá)，從而有效增強(qiáng)小鼠性功能。但兩種活性物質(zhì)配伍在不同模型或運(yùn)動(dòng)模式下是否還具有良好的功效，通過(guò)何種機(jī)制影響性功能仍需進(jìn)一步深入探究。此外，本研究提示植物提取物與活性肽配伍具有潛在的增效作用，有利于降低成本和推動(dòng)功能食品產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。