STAT2、CD24和CD44在卵巢癌組織中的表達及其與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系

梁運霞，張玉文，秦珍珠，王丹，豆穎，邱曉娣

（商丘市第一人民醫(yī)院病理科，商丘 476100）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居婦科三大惡性腫瘤第二位，死亡率位居首位[1]。因卵巢位于盆腔深部，早期診斷困難，預(yù)后差，復(fù)發(fā)率達60%～70%[2]，5年生存率僅25%～30%[3]。卵巢癌病理類型較多，其中上皮性卵巢癌是最常見的病理類型，約占90%[4]，可進一步分為漿液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、透明細胞癌和內(nèi)膜樣癌等[5]。卵巢癌早期篩查主要依靠婦科超聲和血清腫瘤標志物CA125[6]，但卵巢腫瘤早期超聲篩查難以發(fā)現(xiàn)，CA125雖然在卵巢癌患者具有特異性，但部分良性腫瘤和絕經(jīng)后患者也可異常升高，并不能作為早期診斷、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可靠指標[7]。因此，需要尋找新的腫瘤生物學(xué)標志物，做到早期診斷和早期治療。本組研究選取卵巢癌患者信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子2（signal transducer and activator of transcription 2, STAT2）、腫瘤干細胞標記物CD24、CD44的表達水平與其臨床病理特征相關(guān)性分析。

資料與方法

1 研究對象

選取2017年1月至2020年2月我院病理科確診的卵巢癌患者69例，設(shè)為卵巢癌組。納入標準：①為首次確診；②病理診斷明確，參考中華醫(yī)學(xué)會制定標準[11]；③本研究患者充分知情同意；④隨訪資料完整。排除標準：①術(shù)前有放化療史；②合并其它惡性腫瘤。卵巢癌組患者年齡35～72歲，平均年齡（54.6±8.2）歲；按照國際婦產(chǎn)科學(xué)聯(lián)盟（ International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）標準分期[12]：（Ⅰ+Ⅱ）期22例，（Ⅲ+Ⅳ）期47例；病理類型：漿液性癌53例，粘液性癌7例，內(nèi)膜樣癌5例，透明細胞癌4例；分化程度：高分化15例，中分化35例，低分化19例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移39例，無轉(zhuǎn)移30例；腹水：有腹水41例，無腹水28例。并收集同期卵巢良性上皮組織腫瘤患者32例為良性對照組，年齡32～70歲，平均年齡（52.1±8.9）歲。兩組患者平均年齡差別無顯著性，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準（批號：2016-005）。

2 主要試劑

兔抗人STAT2單克隆抗體（Abcam，ab134192），小鼠抗人CD24單克隆抗體（Abcam，ab134234），小鼠抗人 CD44單克隆抗體（Abcam，ab134678），生物素化羊抗小鼠IgG二抗（北京佰瑞達生物科技，SA0103B），DAB顯色劑（DAKO，K5007）。

3 免疫組織化學(xué)染色

應(yīng)用鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶（SP）法免疫組織化學(xué)染色檢測兩組患者卵巢組織中STAT2、CD24和CD44表達。嚴格按照試劑盒說明書進行[13]，卵巢病變組織常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片（4μm厚），依次梯度降酒精水化、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）漂洗、抗原熱修復(fù)、PBS漂洗后入一抗（1:200）4 ℃孵育過夜，PBS漂洗后入二抗（1:1000）、DAB呈色、蘇木精復(fù)染后，梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

4 判定標準

由兩名有5年以上工作經(jīng)驗的病理科醫(yī)師采用半定量法[14]進行評分，判定不一致時，取平均值。根據(jù)染色強度分為：0分，無染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，褐色或深棕色。根據(jù)陽性細胞所占百分比進行評分：1分，陽性細胞百分比≤10%；2分，陽性細胞百分比在11%～50%；3分，陽性細胞百分比在51%～75%；4分，陽性細胞百分比在＞75%。染色強度評分與陽性細胞百分比評分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

5 統(tǒng)計學(xué)分析方法

采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用百分比（%）表示，組間資料比較采用卡方檢驗（χ2）；以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 卵巢癌中STAT2、 CD24和CD44表達率增高

免疫組織化學(xué)染色顯示，卵巢癌組STAT2、CD24和CD44陽性表達率分別高于良性對照組（見表1）。卵巢癌組STAT2主要表達于細胞膜或細胞質(zhì)，CD24蛋白主要表達于細胞膜邊緣部位，CD44蛋白主要表達于細胞膜或細胞質(zhì)，染色呈棕黃色或深棕色；良性對照組無染色或呈淡黃色（圖1）。

圖1 STAT2、 CD24和CD44在卵巢良、惡性腫瘤中表達的免疫組織化學(xué)檢測。A，卵巢癌組STAT2；B，卵巢癌組CD24；C，卵巢癌組CD44；D，良性對照組STAT2；E，良性對照組CD24；F，良性對照組CD44；比例尺，10μmFig.1 Immunohistochemical examination of the expression of STAT2, CD24 and CD44 in benign and malignant tumors of ovarian. A, STAT2 in the ovarian cancer group; B, CD24 in the ovarian cancer group; C, CD44 in the ovarian cancer group; D, STAT2 in the benign control group; E, CD24 in the benign control group; F, CD44 in the benign control group; scale bar, 10μm

表1 兩組患者STAT2、CD24和CD44蛋白陽性表達率Tab.1 Positive expression rate of STAT2, CD24 and CD44 protein in the two groups

2 STAT2、 CD24和CD44表達與卵巢癌病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水相關(guān)

卡方檢驗顯示：STAT2、 CD24和CD44陽性率與卵巢癌患者年齡、病理類型無顯著相關(guān)，但與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水顯著相關(guān)，即在（Ⅲ+Ⅳ）期陽性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化陽性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率高于未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有腹水患者陽性率高于無腹水患者（表2）。

表2 STAT2、 CD24和CD44與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)分析Tab.2 Analysis of STAT2, CD24 and CD44 expression and clinicopathological parameters of patients with ovarian cancer

臨床病理參數(shù) n STAT2(n=47) CD24(n=45) CD44(n=51)陽性率 χ2 P 陽性率 χ2 P 陽性率 χ2 P低分化 19 17(89.47) 17(89.47) 18(94.74)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 5.341 0.021 11.206 0.001 5.329 0.021有39 31(79.49) 32(82.05) 33(84.62)無30 16(53.33) 13(43.33) 18(60.00)腹水 4.590 0.032 4.810 0.028 4.257 0.039有41 32(78.05) 31(75.61) 34(82.93)無28 15(53.57) 14(50.00) 17(60.71)

3 術(shù)后分析

術(shù)后隨訪表明：卵巢癌組患者1年總生存率為78.26%（54/69），STAT2、CD24和CD44陽性者1年生存率為72.34%、71.11%和74.51%，均低于STAT2、CD24和CD44陰性者1年生存率90.91%、91.67%和88.89%，其中CD24陽性性1年生存率低于CD24陰性患者1年生存率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（表3）。

表3 STAT2、 CD24和CD44蛋白不同表達患者1年生存率Tab.3 One-year survival rate of patients with different expression level of STAT2, CD24 and CD44

討 論

卵巢癌的發(fā)生發(fā)展主要與長期的性激素受體敏感性改變以及家族易感基因攜帶有關(guān)，尤其在45歲以后伴有卵巢癌家族史的人群中發(fā)病率進一步升高[15]、全球每年有239 000例新發(fā)病例，152 000例死亡病例[16]。臨床上一直缺乏早期有效的診斷，約75%的患者出現(xiàn)臨床癥狀時為中晚期[17]，失去手術(shù)根治機會[18]。盡管近年卵巢癌的手術(shù)和化療取得較大進展，以及新的靶向藥物的問世[19]，患者生存期得到不斷延長，但早期診斷仍然比較困難，患者術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[20]。針對卵巢癌發(fā)病機制從分子水平研究致病相關(guān)基因，尋找新的治療靶點是臨床研究熱點。腫瘤干細胞的提出，為卵巢癌早期診斷提供新的思路。2005年，Bapat首次證實卵巢癌組織中存在腫瘤干細胞，可能來源于卵巢表面上皮，當(dāng)細胞DNA損傷無法修復(fù)時，可轉(zhuǎn)化為腫瘤干細胞。

細胞粘附分子是一類可以介導(dǎo)細胞間，細胞與細胞外基質(zhì)之間相互作用的分子的統(tǒng)稱[21]。STAT2是STATs家族重要成員，是構(gòu)成JAK-STAT信號通路的重要組成，是最常見腫瘤干細胞之一，可介導(dǎo)多種細胞因子和生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在免疫、炎癥反應(yīng)、抗病毒、腫瘤血管生成、腫瘤細胞增殖和腫瘤耐藥等多種生物學(xué)行為發(fā)揮重要作用，其高表達與卵巢癌密切相關(guān)[22]。CD24是一種糖蛋白，不僅參與人體正常生理過程，在乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤可呈過表達狀態(tài)，可能與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)，既往有關(guān)于CD24參與卵巢癌發(fā)病過程報道，但是其與臨床病理資料相關(guān)性鮮有研究[23]。CD44屬于跨膜糖蛋白，是卵巢癌腫瘤干細胞的一種，在多種惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程高表達，在卵巢癌腫瘤干細胞同樣高表達，介導(dǎo)卵巢癌細胞生存、生長和種植轉(zhuǎn)移的重要信號分子[24]。

本組研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組患者STAT2、CD24和CD44陽性表達率均高于良性對照組，提示STAT2、CD24和CD44蛋白可能為卵巢癌生物學(xué)標志物。進一步研究發(fā)現(xiàn)，STAT2、CD24和CD44蛋白陽性表達水平與年齡、病理類型無顯著相關(guān)性，而與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水顯著相關(guān)，即在（Ⅲ+Ⅳ）期陽性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化陽性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率高于未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有腹水患者陽性率高于無腹水患者，再次佐證其高表達可能在卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌細胞播散等病理過程發(fā)揮一定作用。此外，尤其是CD24陽性表達患者1年生存率顯著低于CD24陰性表達患者，說明CD24高表達可能為潛在預(yù)后不良標志物；STAT2和CD44表達與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腹水的相關(guān)性還需要收集更多樣本研究證明。

卵巢癌患者STAT2、CD24和 CD44表達水平明顯高于卵巢良性腫瘤患者的結(jié)果除了提示其可作為卵巢癌患者腫瘤標志物外，還提示下調(diào)其（尤其是CD24）表達水平可能成為卵巢癌治療的潛在靶點。