辣木愈傷組織誘導(dǎo)與分化階段內(nèi)源激素的動態(tài)變化

杜建武，阮明菊，王 韋，王 睿，黃蘇南，張 慧，曾千春

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué) a.農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院；b.云南辣木研究所，云南 昆明 650201）

辣木Moringa oleifera為辣木科Moringaeae辣木屬Moringa多年生喬木。辣木幼嫩果莢與嫩梢營養(yǎng)豐富，可作為蔬菜[1-2]；辣木花、葉等是傳統(tǒng)中藥材[3]；辣木籽油是化妝品和保健品的重要助劑；因其速生、生物量大，辣木還有望用作生物燃料[4]。

植物組織培養(yǎng)再生植株過程中，激素、外植體生理狀態(tài)、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件等均影響愈傷組織的形成與分化，其中，內(nèi)源激素的種類、含量及其比值的影響尤為重要。Prado等[5]采用液相層析-酶聯(lián)免疫吸附法測定葡萄花藥愈傷組織中內(nèi)源激素ABA、ABA-葡糖基酯和IAA的含量，結(jié)果表明在葡萄胚性愈傷組織形成體細(xì)胞胚的過程中ABA和ABA-葡糖基酯為決定因素，IAA的作用不大。范建新等[6]采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法研究火龍果內(nèi)源激素含量變化規(guī)律，結(jié)果表明花藥愈傷分化階段，ω(GA3)/ω(ZT)處于較低水平可促進不定芽的分化。張亞芳等[7]采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA）測定雞血藤愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段4種內(nèi)源激素含量的變化，其中IAA含量在愈傷誘導(dǎo)（0.715 μg/g）和分化階段（1.87 μg/g）均較高。

當(dāng)前，基因工程技術(shù)在研究基因功能、定向改變遺傳性狀、改良品質(zhì)、培育優(yōu)良新品種等方面具有廣泛應(yīng)用[8]。建立穩(wěn)定、高效的再生體系是應(yīng)用辣木遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的前提。高燕等[9]和陳涵斌[10]使用辣木帶腋芽莖段作為外植體建立組培快繁體系；向素瓊等[11]以辣木無芽莖段和葉片為外植體進行培養(yǎng)，成功誘導(dǎo)愈傷組織，但未分化出完整植株；黃蘇南等[12]以多油辣木PKM1的花藥為外植體，誘導(dǎo)獲得愈傷組織，并分化出根，但未獲得完整植株。相對于腋芽莖段，以葉片和無芽莖段為外植體，更容易取材；通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生加倍單倍體植株，可較快地獲得純合植株，育種選擇效率高。但是，有關(guān)辣木組織培養(yǎng)階段內(nèi)源激素含量變化與愈傷組織形成、器官分化關(guān)系的研究鮮見報道。本研究中采用ELISA法在辣木葉片、莖段和花藥等外植體愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段，分析生長素（indole-3-acetic acid，IAA）、脫落酸（abscisic acid，ABA）、玉米素（zeatin，ZT）和赤霉素（gibberellic acid，GA3）等內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化，以期為辣木組培再生體系的建立提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

葉片與莖段取自多油辣木品種PKM1的實生無菌苗（將種籽在1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)14～21 d），花藥取自云南農(nóng)業(yè)大學(xué)東校區(qū)溫室種植的多油辣木品種PKM1未開放的花蕾（花藥處于單核靠邊期）。

葉片、莖段和花藥的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L，pH 5.8，其中莖段的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基另添加果糖20 g/L。愈傷組織分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L，pH 5.8。

1.2 方 法

1.2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化

用手術(shù)刀將無菌苗葉片切割成約5 mm×5 mm，正面朝上接種于培養(yǎng)皿中，每21 d繼代1次；無菌莖段長度約為5 mm，水平方向放置并輕輕壓入培養(yǎng)基中，每14 d繼代1次。葉片和莖段均為每個培養(yǎng)皿放置14塊，10皿為1組，重復(fù)3次。葉片、莖段愈傷組織誘導(dǎo)和分化（含花藥愈傷）階段，培養(yǎng)條件均為溫度(25±3) ℃，相對濕度70%～80%，光照強度約為800 lx，光周期（14 h光/10 h暗）。參照黃蘇南等[12]的方法，剝?nèi)』ㄋ幷T導(dǎo)愈傷組織。為保證有足夠的樣品，連續(xù)8周進行花藥接種，每周接種24瓶，每瓶培養(yǎng)14個花藥。

將3種外植體經(jīng)過28 d誘導(dǎo)的愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)。每瓶5塊愈傷組織，21 d繼代1次。

1.2.2 愈傷組織的內(nèi)源激素含量測定

外植體接種當(dāng)天為愈傷組織誘導(dǎo)階段第0天，每7 d取樣1次，28 d內(nèi)共取樣4次，葉片、莖段愈傷組織每次取樣0.25 g，花藥愈傷組織每次取樣0.04 g，第0天的樣品為葉片、莖段和花藥的預(yù)留材料。外植體經(jīng)28 d誘導(dǎo)的愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基當(dāng)天為愈傷組織分化階段第0天，每7 d取樣1次，連續(xù)取樣4次，每次取樣0.25 g，第0天的樣品為愈傷組織誘導(dǎo)第28天的樣品。每處理3次生物學(xué)重復(fù)，取樣后用液氮速凍放入-80 ℃冰箱中保存，2019年2—6月完成樣品采集。

樣品用液氮研磨后，分別裝于5 mL塑料管，外加干冰保持低溫，送至中國農(nóng)業(yè)大學(xué)作物化學(xué)控制室，使用ELISA法測定內(nèi)源激素含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2007軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計、繪圖等處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣木愈傷組織誘導(dǎo)與分化階段內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化

2.1.1 誘導(dǎo)階段內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化

辣木葉片、莖段和花藥愈傷誘導(dǎo)階段4種內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化如圖1所示。

由圖1可見，葉片外植體培養(yǎng)14 d時最早觀察到細(xì)胞團。培養(yǎng)0 d時，葉片IAA、ABA、ZT和GA3含量依次為90.87、70.30、12.46和7.83 ng/g。葉片愈傷組織誘導(dǎo)過程中，IAA、ABA和ZT含量一直下降，培養(yǎng)28 d時分別減少了53.10、15.77和5.27 ng/g；GA3含量在培養(yǎng)0～14 d時下降，后略有波動。

由圖1可見，莖段外植體培養(yǎng)7 d時最早觀察到細(xì)胞團。培養(yǎng)0 d時，莖段IAA、ABA、ZT和GA3含量依次為70.59、56.70、11.60和9.15 ng/g。莖段愈傷組織誘導(dǎo)過程中，IAA含量呈現(xiàn)先降、后升、再降的變化趨勢，在培養(yǎng)7 d時驟降至34.49 ng/g，培養(yǎng)21 d時上升至46.19 ng/g，培養(yǎng)28 d時下降至45.84 ng/g；ABA含量為56.70～73.85 ng/g，呈現(xiàn)先升、后降、再升的變化趨勢；ZT、GA3含量均呈現(xiàn)先降、后升的變化趨勢，在培養(yǎng)7 d時下降明顯，之后略升高。

由圖1可見，花藥外植體培養(yǎng)21 d時最早觀察到細(xì)胞團。經(jīng)4 ℃低溫處理3 d的花藥中，培養(yǎng)0 d時，IAA、ABA、ZT和GA3含量依次為49.00、61.46、9.51和6.53 ng/g。花藥愈傷組織誘導(dǎo)過程中，IAA含量呈現(xiàn)先降、后升、再降的變化趨勢，在培養(yǎng)28 d時為20.34 ng/g，較起始IAA含量下降了58.49%；ABA含量為51.97～65.10 ng/g；ZT含量呈現(xiàn)下降趨勢，培養(yǎng)21 d時降為5.6 ng/g，培養(yǎng)21～28 d時平穩(wěn)，處于低水平狀態(tài)；在花藥愈傷組織誘導(dǎo)階段，GA3含量無明顯變化，始終處于低水平狀態(tài)。

圖1 辣木愈傷組織誘導(dǎo)階段內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化Fig.1 Dynamic changes of endogenous hormone content in M.oleifera callus during callus induction

2.1.2 分化階段內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化

辣木葉片、莖段和花藥愈傷組織分化階段4種內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化如圖2所示。

由圖2可見，葉片愈傷組織經(jīng)分化培養(yǎng)后，IAA、ZT和GA3含量呈現(xiàn)先升、后降的變化趨勢。其中，IAA含量在培養(yǎng)21 d內(nèi)呈上升趨勢，在培養(yǎng)21 d時達(dá)到峰值（57.97 ng/g），然后快速下降；ZT含量在培養(yǎng)7 d時達(dá)到峰值，培養(yǎng)7～21 d時較平穩(wěn)，培養(yǎng)21 d后下降；GA3含量在培養(yǎng)21 d時達(dá)到峰值，然后下降；ABA含量呈現(xiàn)先升、后降、再升的變化趨勢，ABA含量在培養(yǎng)7 d內(nèi)急劇上升，接近葉片起始ABA含量，培養(yǎng)7 d后下降，培養(yǎng)14 d時降至61.49 ng/g，然后上升，培養(yǎng)21 d時上升至65.20 ng/g，培養(yǎng)21～28 d時較平穩(wěn)。

由圖2可見，在莖段愈傷組織分化階段，IAA含量呈現(xiàn)穩(wěn)定上升的趨勢；ABA含量呈現(xiàn)先降、后升、再降的變化趨勢，培養(yǎng)14 d內(nèi)含量急劇下降，說明消耗了大量的ABA，含量為55.96～73.85 ng/g；ZT、GA3含量均呈現(xiàn)先升、后降的變化趨勢。

由圖2可見，在辣木花藥愈傷組織分化階段，IAA含量變化與葉片愈傷組織分化階段IAA含量的變化趨勢一致，均在培養(yǎng)21 d時達(dá)到峰值；ABA含量表現(xiàn)為先降、后升，培養(yǎng)14 d時含量最低（50.62 ng/g）；ZT含量呈現(xiàn)先降、后升、再降的變化趨勢，含量為5.18～7.72 ng/g，整體處于低水平狀態(tài)；GA3含量變化與葉片、莖段愈傷分化階段其含量的變化趨勢一致，均呈現(xiàn)先升、后降的變化趨勢，在培養(yǎng)21～28 d時下降明顯。

圖2 辣木愈傷組織分化階段內(nèi)源激素含量的動態(tài)變化Fig.2 Dynamic changes of endogenous hormone content in M.oleifera callus at differentiation stage

2.2 辣木愈傷組織誘導(dǎo)與分化階段內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化

2.2.1 誘導(dǎo)階段內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化

供試?yán)蹦救~片、莖段和花藥愈傷組織誘導(dǎo)階段4種內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化如圖3所示。由圖3可見，誘導(dǎo)與分化階段，ω(IAA)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ZT)和ω(ZT)/ω(ABA)的值變化相似且多在1以下，ω(GA3)/ω(ZT)和ω(ZT)/ω(ABA)的值接近零且線條重疊。

由圖3可見，在葉片愈傷組織誘導(dǎo)階段，ω(IAA)/ω(GA3)、ω(IAA)/ω(ZT)均呈先下降、后升高、再下降的變化趨勢，但ω(IAA)/ω(GA3)變化更明顯；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(ABA)、ω(ZT)/ω(ABA)與ω(GA3)/ω(ABA)無明顯變化。

由圖3可見，在莖段愈傷組織誘導(dǎo)階段，ω(IAA)/ω(GA3)和ω(IAA)/ω(ZT)的變化與葉片愈傷組織中的相似，均呈先下降、后升高、再下降的變化趨勢，但波峰推遲7 d到達(dá)；ω(IAA)/ω(ABA)在0～7 d下降明顯；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值未觀察到明顯變化。

由圖3可見，在花藥愈傷組織誘導(dǎo)階段，ω(IAA)/ω(GA3)和ω(IAA)/ω(ZT)的變化趨勢與葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)階段一致，但花藥內(nèi)源激素含量比值變幅更大；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(ABA)、ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的 值均保持在一個相對穩(wěn)定的水平。

圖3 辣木愈傷組織誘導(dǎo)階段內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化Fig.3 Dynamic changes of endogenous hormone content ratio in M.oleifera callus induction stage

2.2.2 分化階段內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化

供試?yán)蹦救~片、莖段和花藥愈傷組織分化階段4種內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化如圖4所示。由圖4可見，愈傷組織分化階段，ω(IAA)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ZT)和ω(ZT)/ω(ABA)的變化趨勢相似且多在1以下，ω(GA3)/ω(ZT)和ω(ZT)/ω(ABA)的值接近零且線條重疊，與愈傷組織誘導(dǎo)階段情況基本相同。

由圖4可見，在葉片愈傷組織分化階段，ω(IAA)/ω(GA3)的值雖呈現(xiàn)波動變化，但值始終較大；ω(IAA)/ω(ZT)的值呈現(xiàn)先升、后降的變化趨勢，變化幅度較??；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(ABA)、ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值無明顯變化。

由圖4可見，在莖段愈傷組織分化階段，ω(IAA)/ω(GA3)和ω(IAA)/ω(ZT)的值均表現(xiàn)為先降、后升的趨勢；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(ABA)、ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值無明顯變化。

由圖4可見，在花藥愈傷組織分化階段，ω(IAA)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(GA3)的值呈波動上升趨勢，ω(IAA)/ω(ZT)的值波動明顯，ω(IAA)/ω(GA3)的值從4.14上升到6.83，波動相對較??；ω(GA3)/ω(ZT)、ω(IAA)/ω(ABA)、ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值均保持在一個相對穩(wěn)定的水平。

圖4 辣木愈傷組織分化階段內(nèi)源激素含量比值的動態(tài)變化Fig.4 Dynamic changes of endogenous hormone content ratio in M.oleifera callus at differentiation stage

3 結(jié)論與討論

不同種類植物內(nèi)源激素含量的差異較大，內(nèi)源激素含量的比值可更好地反映植物愈傷組織誘導(dǎo)和分化的潛能。建立辣木離體再生體系的瓶頸在于芽的分化非常困難。從辣木愈傷組織誘導(dǎo)階段的內(nèi)源激素含量來看，低含量ZT有利于辣木愈傷組織的形成，高含量GA3抑制辣木愈傷組織的形成；從辣木愈傷分化階段的內(nèi)源激素含量來看，高含量ABA、低含量ZT、高ω(IAA)/ω(GA3)值、高ω(IAA)/ω(ZT)值共同抑制了辣木愈傷組織分化芽和完整植株。

3.1 內(nèi)源激素含量與辣木愈傷誘導(dǎo)和分化的關(guān)系

植物內(nèi)源激素是長期存在于植物體內(nèi)的小分子化合物，含量低，但對調(diào)節(jié)植物生命活動起到?jīng)Q定性作用[13]。辣木愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段，ABA含量波動較大，與歐陽樂軍等[14]的研究結(jié)果一致，說明內(nèi)源ABA在辣木愈傷誘導(dǎo)和分化中發(fā)揮著重要作用。

在辣木愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)階段，與葉片、莖段相比，花藥中IAA含量最低，花藥形成愈傷組織需時最長，推測高含量的IAA促進愈傷組織的形成，這與大豆[15]和苦瓜[16]的離體培養(yǎng)結(jié)果一致。在培養(yǎng)7～28 d時，葉片、莖段和花藥愈傷誘導(dǎo)階段IAA含量變化趨勢各異，與秦小舒等[17]、田春英等[18]和董雯[19]的研究結(jié)果一致。在辣木愈傷組織的培養(yǎng)過程中，葉片和莖段IAA的含量始終高于花藥，這也可能是辣木花藥誘導(dǎo)愈傷率始終比葉片和莖段低的原因。在培養(yǎng)7～28 d時，4種內(nèi)源激素中ABA含量始終處于最高水平，與董雯[19]和賈小霞等[20]分別得出的短葶山麥冬和玉米中ABA含量在愈傷誘導(dǎo)階段處于低水平的研究結(jié)果相反，推測過高ABA含量對辣木愈傷組織誘導(dǎo)不利。辣木葉片、莖段和花藥愈傷誘導(dǎo)階段，ZT、GA3含量均處于較低水平，這與劉清等[21]、楊宏偉等[22]分別得出的水稻和黑果枸杞中ZT含量處于較低水平的研究結(jié)果一致，與韓繼紅等[23]、喬孝祿等[24]分別得出的無患子和納塔櫟中GA3含量處于較低水平的研究結(jié)果一致，說明低含量ZT有利于辣木愈傷組織的形成，高含量GA3抑制辣木愈傷組織的形成。

在辣木愈傷組織分化培養(yǎng)階段，愈傷組織的量明顯增多，但28 d內(nèi)未分化出芽。本試驗中辣木莖段IAA含量在28 d內(nèi)逐漸增加，與周思宇等[25]的研究結(jié)果一致，后者在研究枇杷葉片愈傷組織分化時發(fā)現(xiàn)IAA含量在30 d內(nèi)逐漸增加。辣木葉片和花藥IAA含量呈現(xiàn)先升、后降的變化趨勢，葉片ABA含量波動上升，花藥ABA含量先降、后升，與葉片和花藥不同，辣木莖段IAA含量呈現(xiàn)緩慢上升趨勢，ABA含量呈現(xiàn)波動下降趨勢，一定程度上說明取材部位的不同，可能導(dǎo)致激素水平的差異，這與范建新等[6]的研究結(jié)果一致。張亞芳等[7]和陳凌艷等[26]分別對雞血藤和西洋杜鵑愈傷組織培養(yǎng)過程中內(nèi)源激素的變化進行了研究，結(jié)果表明，在愈傷組織分化過程中，芽體誘導(dǎo)階段所需要IAA的含量較低，在芽體生長階段，IAA起到了一定的促進作用，IAA含量呈現(xiàn)先降、后升的變化趨勢，此結(jié)果與本研究結(jié)果相反，推測這可能是辣木難以分化芽的一個原因。分化階段，在4種內(nèi)源激素中，3種辣木外植體愈傷組織的ABA含量始終處于最高水平，ZT含量處于低水平。張媛媛[27]經(jīng)研究得出草地早熟禾愈傷組織分化階段高含量的ABA（0.141 μg/g）對愈傷組織分化有一定的促進作用；但張亞芳等[7]在雞血藤葉片愈傷分化的研究中發(fā)現(xiàn)ABA處于低水平，ZT處于高水平，有利于芽的分化。推測辣木愈傷組織中過高含量的ABA、低含量的ZT抑制了其愈傷組織的分化。除花藥愈傷組織中GA3含量在分化培養(yǎng)21～28 d時明顯下降外，葉片、莖段及花藥愈傷組織分化培養(yǎng)0～21 d時GA3含量的變化均不明顯。范建新等[6]的研究結(jié)果表明，高含量的GA3對芽分化有負(fù)面影響；陳凌艷等[26]的研究結(jié)果表明，隨著芽體的形成，GA3含量逐漸提高，促進了芽體的生長和伸長。辣木GA3含量與愈傷組織分化的關(guān)系尚需深入研究。王瑞等[28]和饒丹丹[29]分別在研究油茶和紫薇組培苗生根時發(fā)現(xiàn)，高濃度的內(nèi)源IAA及低濃度的內(nèi)源ABA有利于不定根根原基的誘導(dǎo)分化和生長發(fā)育，高濃度的內(nèi)源GA3抑制了不定根的形成，此結(jié)果與本研究中花藥愈傷分化階段結(jié)果相反，推測這可能是辣木花藥誘導(dǎo)分化出根但未分化芽[12]的原因，各內(nèi)源激素及其比例關(guān)系共同調(diào)節(jié)著辣木愈傷組織的生成。

3.2 內(nèi)源激素含量比值與辣木愈傷誘導(dǎo)和分化的關(guān)系

在辣木葉片、莖段和花藥的愈傷誘導(dǎo)和分化階段，ω(IAA)/ω(GA3)的值均最高，其次為ω(IAA)/ω(ZT)，ω(ZT)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值較小且穩(wěn)定，ω(IAA)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ZT)和ω(ZT)/ω(ABA)的值均保持在一個相對穩(wěn)定的水平。賈小霞等[20]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在愈傷誘導(dǎo)階段ω(IAA)/ω(ABA)和ω(GA3)/ω(ABA)的值大幅度上升阻礙胚性愈傷的形成，本研究中未觀察到2種比值的明顯變化。周思宇等[25]和張守杰等[30]報道ω(IAA)/ω(ZT)的降低能誘導(dǎo)愈傷組織的分化，這與本研究結(jié)果相反，推測辣木愈傷組織中ω(IAA)/ω(ZT)的值過高，抑制了其愈傷組織的分化。范建新等[6]報道ω(GA3)/ω(ZT)處于較低水平可促進不定芽的分化，張媛媛[27]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)低ω(IAA)/ω(ABA)促進不定芽的形成，均與本研究結(jié)果一致。張亞芳等[7]和郭敏敏等[31]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織分化過程中，ω(IAA)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ABA)和ω(ZT)/ω(ABA)均呈現(xiàn)先降、后升的變化趨勢，促進不定芽的分化，在本研究中ω(IAA)/ω(ABA)、ω(GA3)/ω(ABA)和ω(ZT)/ω(ABA)在 整個愈傷組織分化階段表現(xiàn)相對穩(wěn)定。陳凌艷等[26]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在愈傷組織分化過程中，IAA含量處在較低水平，GA3含量逐漸提高，促進了芽體的生長和伸長，推測較高的ω(IAA)/ω(GA3)值抑制了辣木愈傷組織的分化。由此看來，內(nèi)源激素是否平衡決定著愈傷組織的狀態(tài)和品質(zhì)，從而直接影響到愈傷組織的分化[32]。李代麗[33]在進行白刺愈傷組織培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，外源激素與內(nèi)源激素存在較強的相互作用，添加不同的單一外源激素后，其內(nèi)源激素總體含量水平提高，還引起激素含量間比值發(fā)生變化。黃科等[34]在進行藍(lán)莓離體培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，添加細(xì)胞分裂素ZT能促進藍(lán)莓愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖，因此在辣木愈傷組織誘導(dǎo)和分化過程中可考慮添加ZT。此外，辣木愈傷組織中ω(IAA)/ω(GA3)、ω(IAA)/ω(ZT)的值較高，在后續(xù)研究中可考慮先誘導(dǎo)生根，再生芽。

通過使用外源激素可控制愈傷組織的誘導(dǎo)和分化，外源激素是通過改變內(nèi)源激素含量水平起調(diào)控作用的[35]。本研究中僅初步探索了辣木葉片、莖段和花藥等外植體在愈傷誘導(dǎo)和分化階段4種內(nèi)源激素的含量及其比值的動態(tài)變化，未研究4種內(nèi)源激素與外源激素的相互作用對辣木愈傷組織分化的影響，后續(xù)研究可系統(tǒng)探討辣木愈傷組織培養(yǎng)中內(nèi)外源激素的相互作用關(guān)系，篩選辣木愈傷組織培養(yǎng)的適宜激素配比，建立高效、穩(wěn)定的辣木離體再生體系。