豬流行性腹瀉的診斷和預(yù)防

李同斌/山東省濱州市無(wú)棣縣畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心 251900

豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea，PED）是仔豬的一種腹瀉疾病，該病已經(jīng)在歐洲和亞洲有報(bào)道。豬流行性腹瀉與豬傳染性胃腸炎（TEGV）的臨床癥狀極為相似，但其病原是另一種傳染性稍差的冠狀病毒，豬流行性腹瀉病毒（porcineepidemic diarrhea virus，PEDV）。哺乳仔豬在很多暴發(fā)的疾病中都不受感染?；疾∽胸i的主要臨床癥狀是水樣腹瀉，有時(shí)會(huì)導(dǎo)致嘔吐，死亡率可高達(dá)80%。該病毒也可以引起生長(zhǎng)育肥豬的腹瀉。盡管病毒感染成年豬后有時(shí)會(huì)導(dǎo)致腹瀉，但大部分情況下不表現(xiàn)臨床癥狀?？梢酝ㄟ^(guò)在豬原代細(xì)胞培養(yǎng)物或Vero（非洲綠猴腎）細(xì)胞對(duì)病毒進(jìn)行分離，也可以通過(guò)免疫熒光或ELSA 方法來(lái)檢測(cè)小腸或糞便中的PEDV 抗原，通過(guò) RT-PCR 來(lái)檢測(cè)病毒RNA，或者通過(guò)證實(shí)康復(fù)豬體內(nèi)病毒特異的抗體進(jìn)行確定，通過(guò)上述方法以達(dá)到對(duì)該病的診斷。目前，在一些國(guó)家已經(jīng)有針對(duì)該病的弱毒苗在使用。

1 流行情況

自上世紀(jì)80 年代初以來(lái)，我國(guó)就出現(xiàn)了PED 的區(qū)域性暴發(fā)。

2 病理變化

腸系膜血管淤血多見，腸系膜淋巴結(jié)水腫。腸道泌乳不足，作為吸收不良的指標(biāo)之一。受感染的豬持續(xù)嚴(yán)重腹瀉，在腹瀉發(fā)生后3～5d 出現(xiàn)低到中度食欲，隨后就死亡。

病毒復(fù)制發(fā)生在小腸和結(jié)腸的上皮細(xì)胞中。在小腸中，病毒使腸絨毛縮短。但與豬傳染性胃腸炎病毒對(duì)于細(xì)胞的破壞率和嚴(yán)重程度相比，不太明顯。

3 臨床癥狀

潛伏期長(zhǎng)達(dá)4d。受感染動(dòng)物的年齡、相關(guān)的發(fā)病率和死亡率是可變的。一些農(nóng)場(chǎng)中，所有年齡段的豬都會(huì)發(fā)病，1 周內(nèi)仔豬的死亡率可能接近50%。水樣腹瀉加上之前的嘔吐，為主要臨床表現(xiàn)。偶爾有幾只動(dòng)物突然死亡，驗(yàn)尸發(fā)現(xiàn)其可出現(xiàn)背部肌肉明顯壞死。該病毒可能會(huì)通過(guò)豬連續(xù)繁殖，持續(xù)污染大型養(yǎng)殖場(chǎng)。大部分受感染的豬約1 周后痊愈，死亡率通常較低。

4 傳播方式

4.1 直或間接接觸傳播糞口途徑是PEDV 直接傳播的主要途徑。在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部和養(yǎng)殖場(chǎng)之間也經(jīng)常發(fā)生PEDV的間接接觸傳播，特別是在生物安全水平較低的情況下。其他受污染的器械包括：運(yùn)輸拖架、養(yǎng)殖場(chǎng)工人的手、靴子和衣服，飼料、飼料添加劑以及用于運(yùn)輸散裝飼料或飼料袋。PEDV 在室溫下保持35d 的傳染性。飼料制造過(guò)程中也可發(fā)生PEDV 交叉污染。

4.2 氣溶膠（間接接觸）傳播氣溶膠是另一種傳播途徑，也是從養(yǎng)殖場(chǎng)到養(yǎng)殖場(chǎng)空氣傳播的另一條途徑?；疾∽胸i將感染性PEDV 粒子氣溶膠通過(guò)空氣傳播，使PEDV在仔豬群體中傳播，并且新生仔豬對(duì)病毒高度敏感。霧化吸入的PEDV 并不只感染豬的腸道，但它也感染鼻腔里的上皮鼻黏膜固有層或淋巴組織中的樹突狀細(xì)胞攜帶PEDV并將其傳遞給CD3。然而，與新生仔豬相比，可能需要更高劑量的霧化吸入PEDV 來(lái)感染斷奶和年齡較大的豬。

4.3 豬場(chǎng)間PEDV 直接接觸或氣溶膠傳播速率的變化PEDV 感染和疾病的嚴(yán)重程度，以及PEDV 的傳播能力，取決于豬群的整體免疫和健康狀況以及養(yǎng)殖場(chǎng)的生物安全水平。盡管如此，PEDV 的傳播性直接接觸或氣溶膠接觸也取決于PEDV 基因群。2010 年10 月，一株變異株出現(xiàn)，PEDV 感染急劇增加，嚴(yán)重?fù)p害了養(yǎng)豬業(yè)。

5 診斷

對(duì)于急性腹瀉的豬進(jìn)行安樂死，取小腸樣品做冷凍切片，通過(guò)直接免疫熒光法檢測(cè)，靈敏而可靠，尤其是新生仔豬的標(biāo)本。可以通過(guò)ELSA 法檢測(cè)急性腹瀉的豬的糞便、腸道內(nèi)容物中的病毒抗原。已有報(bào)道，通過(guò)一種雙向設(shè)計(jì)的 RT-PCR 檢測(cè)并可在區(qū)分豬流行性腹瀉病毒和傳染性胃腸炎病毒，成對(duì)的血清樣品，使用阻斷ELSA 或間接免疫熒光法、PEDV 陽(yáng)性腸冷凍切片法都可以檢測(cè)到抗體。

由于PEDV 感染的跡象在臨床癥狀和病理上與傳染性胃腸炎引起的沒有區(qū)別。PED 的診斷不能僅僅根據(jù)臨床癥狀和組織病理學(xué)改變來(lái)進(jìn)行。因此，必須在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行鑒別診斷，以證明PEDV 或其抗原的存在。PEDV 檢測(cè)方法，包括免疫熒光（IF）或免疫組織化學(xué)（IHC）檢測(cè)、電鏡、病毒分離、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和多種逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)已被廣泛應(yīng)用?？紤]到它們的快速傳播時(shí)間和敏感性，常規(guī)和實(shí)時(shí)RT-PCR 系統(tǒng)作為商用試劑盒被廣泛用于流行病或地方病暴發(fā)期間的PEDV 檢測(cè)，以及檢疫或屠宰的豬。

許多血清學(xué)檢測(cè)方法已經(jīng)被用于PEDV 抗體的檢測(cè)，包括間接熒光抗體（IFA）染色、ELISA 和病毒中和（VN）試驗(yàn)。由于新生仔豬對(duì)PEDV 的被動(dòng)免疫，是否存在抗PEDV 抗體在母豬群中需要測(cè)量抗PEDV 中和抗體的數(shù)量（或滴度），特別是抗血清和初乳中S 蛋白的中和抗體，以監(jiān)測(cè)母豬免疫后的免疫水平。在這方面，VN 檢測(cè)對(duì)于評(píng)估仔豬從母豬身上獲得的保護(hù)性抗體水平是必不可少的。然而，這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不能選擇性地檢測(cè)代表黏膜免疫的分泌型IgA 抗體。相反，IFA 和間接ELISA 檢測(cè)抗體的方法與VN 檢測(cè)方法相比，具有同樣的特異性，是耗時(shí)更短和更容易執(zhí)行的方法。可通過(guò)監(jiān)測(cè)PEDV 流行情況確定養(yǎng)殖場(chǎng)的感染狀況。

6 治療和控制

該病沒有特效療法。一般使用疫苗進(jìn)行預(yù)防，一種口服的減毒活疫苗已在韓國(guó)被報(bào)道。農(nóng)場(chǎng)里動(dòng)物之間的適當(dāng)?shù)男l(wèi)生控制措施是預(yù)防疾病所必需的。種豬場(chǎng)內(nèi)如果發(fā)生疫情，良好的衛(wèi)生措施有助于減緩感染的傳播。

7 預(yù)防和控制

7.1 傳統(tǒng)疫苗

1993 年，Wang 等人研制了PEDV組織滅活疫苗。通過(guò)對(duì)仔豬口服強(qiáng)毒PEDV，收集其腸道內(nèi)容物和組織，樣品經(jīng)滅活后制成乳劑，注入尾底。Ma等人（1994 年）研制了一種氫氧化鋁佐劑滅活疫苗，對(duì)Vero 細(xì)胞中的CV 777 株進(jìn)行了減毒，豬尾部接種疫苗后，仔豬主動(dòng)和被動(dòng)免疫率均在85%以上。

雖然自2010 年底以來(lái)，已經(jīng)試驗(yàn)了各種方法，包括自體疫苗、商業(yè)化疫苗和腸道內(nèi)容物喂養(yǎng)，以控制PED的暴發(fā)，但它們的效果一直很差。一些豬場(chǎng)仍有反復(fù)腹瀉疫情的報(bào)道。對(duì)PEDV 變異體的致病機(jī)制及其免疫應(yīng)答的認(rèn)識(shí)不足，限制了所使用的預(yù)防方法的有效性。在2013 年美國(guó)暴發(fā)PED 之后，Collin 等人開發(fā)了一種滅活疫苗。以分離的美國(guó)變異型PEDV株系為基礎(chǔ)，對(duì)4 周齡仔豬進(jìn)行免疫接種，滅活疫苗可激發(fā)足夠的體液免疫，以防止感染。2015 年3 月，由減毒的TEGV（H 株）、PEDV（CV 777 株、GI 亞組）和PoRV（NX 株）研制的三價(jià)疫苗在中國(guó)獲得批準(zhǔn)。2015 年1 1 月，由TGEV（HB08 株）和PEDV（ZJ 08 株，GI-b 亞組）組成的雙弱毒疫苗也正式投放市場(chǎng)?？紤]到疫苗商品化（GI 基因群）與現(xiàn)場(chǎng)流行株（GII 基因群）的差異，應(yīng)研制新一代疫苗，以控制PED。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)研究人員在GII基因群中根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)流行的PEDV 株研制了二價(jià)（PEDV）和TGEV（TGEV）滅活疫苗，實(shí)驗(yàn)和臨床資料表明，該疫苗對(duì)GII 流行的PEDV 有較好的保護(hù)作用。以GII 基因群內(nèi)PEDV 變異株為基礎(chǔ)的滅活疫苗免疫豬，其抗PEDV變異株（GII 基因群）的中和抗體滴度（GII 基因群）明顯高于商業(yè)化疫苗（GI基因群）。目前，以流行的PEDV（GII基因群）為基礎(chǔ)的疫苗在我國(guó)正處于臨床復(fù)檢階段。

7.2 PEDV 滅活消毒劑及受污染拖車清理用消毒藥可降低PEDV RNA 的含量，對(duì)糞便中PEDV 進(jìn)行滅活。超氧化水（pH6.0）經(jīng)10～90 min 接觸后，在室溫下也能有效地滅活PEDV。使用高壓動(dòng)力清洗拖車，然后進(jìn)行消毒和干燥，對(duì)其去污是有效的。過(guò)氧化氫或高氧消毒劑30 min 后，在20℃的污染金屬（拖車）表面有效地滅活PEDV。

7.3 畜牧管理加強(qiáng)生物安全，如運(yùn)輸拖車和其他可能受污染的器材的去污和消毒，供應(yīng)安全飼料或飼料添加劑及維持豬場(chǎng)及豬場(chǎng)工人的衛(wèi)生措施，是防止PEDV 直接或間接接觸傳播的關(guān)鍵。在2013～2017 年流行期間，運(yùn)輸拖車（19/72群；26.4%）或飼料（21/72群；29.2%）被認(rèn)為是美國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)的主要污染動(dòng)物（共計(jì)55.6%）。感染PEDV 的豬場(chǎng)對(duì)其他人或野生動(dòng)物的蔓延也應(yīng)通過(guò)高度隔離協(xié)議加以控制，在腹瀉結(jié)束和疾病得到控制之前不應(yīng)進(jìn)行生豬貿(mào)易。

8 結(jié)語(yǔ)

流行病PED 的消失和再次出現(xiàn)表明，PEDV 能夠有效地?cái)[脫現(xiàn)有的疫苗接種、生物安全和控制系統(tǒng)。地方性PED 是一個(gè)嚴(yán)重的問題，由于多個(gè)PEDV 變異體出現(xiàn)或可能輸入各國(guó)，這一問題更加嚴(yán)重。流行的PEDV 毒株迅速傳播，造成大量的豬死亡和巨大的經(jīng)濟(jì)損失，以便在受影響地區(qū)預(yù)防和控制這種疾病，并研制出有效的疫苗。

高死亡率的PEDV 感染，血清陰性哺乳仔豬最可能與廣泛脫水，造成嚴(yán)重的絨毛萎縮。在感染的哺乳仔豬中，隱窩細(xì)胞增殖增加，受損的腸上皮細(xì)胞重組，成熟的腸細(xì)胞遷移到絨毛尖端，可能不足以防止仔豬嚴(yán)重脫水。