山東省部分養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)馬屬動(dòng)物主要病毒疫病調(diào)查

姜 偉，徐 聰，楚遵鋒，陳 偉，邢林林，孔祥華，劉 存，孫圣福

（1.龍口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東龍口 265701；2.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250100；3.濟(jì)南市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250102）

馬屬動(dòng)物主要由家馬、驢、騾和斑馬組成[1]。我國(guó)養(yǎng)馬歷史悠久，長(zhǎng)期以來(lái)，馬是重要的畜力和交通工具。隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，近年來(lái)馬的傳統(tǒng)役用和交通功能被機(jī)械逐步取代，養(yǎng)殖量逐漸減少，而與馬產(chǎn)業(yè)緊密相關(guān)的體育運(yùn)動(dòng)、休閑騎乘、文化旅游、專業(yè)化馬產(chǎn)品開(kāi)發(fā)等新業(yè)態(tài)開(kāi)始蓬勃發(fā)展[2]。驢產(chǎn)業(yè)是我國(guó)畜牧業(yè)中的重要產(chǎn)業(yè)之一。近年來(lái)驢役用價(jià)值也在不斷萎縮，而其商用價(jià)值快速上升，驢皮、驢肉等產(chǎn)品的市場(chǎng)需求快速增長(zhǎng)，尤其是阿膠產(chǎn)品給驢產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了新的活力[3]。山東省是養(yǎng)驢大省，規(guī)?；H場(chǎng)超過(guò)200 個(gè)，存欄量超過(guò)100 萬(wàn)頭。

馬傳染性貧血（equine infectious anemia，EIA），簡(jiǎn)稱馬傳貧，是由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬馬傳貧病毒引起的一種持續(xù)感染性疫病，可以感染馬、驢、騾等馬屬動(dòng)物，臨床癥狀主要為發(fā)熱、貧血、黃疸、浮腫和消瘦[4]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。非洲馬瘟（African horse sickness，AHS），是由非洲馬瘟病毒引起的一種急性或亞急性傳染病，主要表現(xiàn)為呼吸困難、體溫升高，病死率可達(dá)95%[5]，OIE 將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。馬流行性感冒（equine influenza，EI），簡(jiǎn)稱馬流感，是由正黏病毒科流感病毒屬馬A 型流感病毒引起的一種病毒性呼吸道傳染病，馬、驢、騾等馬屬動(dòng)物對(duì)其均易感，主要表現(xiàn)為發(fā)燒、咳嗽、流鼻液和母畜流產(chǎn)，目前以H3N8 亞型為主[6]，OIE 將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為三類動(dòng)物疫病。為了解山東省馬屬動(dòng)物中上述3 種病毒疫病的流行狀況，2020 年對(duì)山東省部分馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了病原或抗體檢測(cè)，以期為山東省馬屬動(dòng)物疫病防控提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品

2020 年11 月，選擇馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖比較密集的濟(jì)南、青島、聊城和德州等地市的養(yǎng)殖場(chǎng)，場(chǎng)群內(nèi)按照發(fā)現(xiàn)疫病的策略進(jìn)行抽樣，設(shè)置信區(qū)間95%、試驗(yàn)敏感性100%、預(yù)期流行率2%。在青島市的2個(gè)馬場(chǎng)（每場(chǎng)存欄約100 匹），每場(chǎng)隨機(jī)采75 匹馬的血清和全血樣品，共采集馬血清和全血樣品各150 份；在驢存欄數(shù)量較多的濟(jì)南、聊城和德州等地市，選擇存欄約1 000 頭的4 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)隨機(jī)選擇136 只，同時(shí)采集血清和全血樣品，共采集驢血清和全血樣品各544 份。

1.2 試劑

H3N8 亞型EI 血凝抗原、EIA 抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒、AHS 病原熒光PCR 檢測(cè)試劑盒，均由動(dòng)物用生物制品國(guó)家工程研究中心提供；核酸提取試劑盒，由Roche 公司提供；0.016 mol/L 的過(guò)碘酸鉀，由本實(shí)驗(yàn)室配制。

1.3 檢測(cè)與結(jié)果判定

1.3.1 EIA 采用ELISA 方法檢測(cè)抗體，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。檢測(cè)為陽(yáng)性，判定該份樣品為陽(yáng)性，有1 份及以上陽(yáng)性樣品的場(chǎng)，判定為陽(yáng)性場(chǎng)。

1.3.2 AHS 采用熒光PCR 方法進(jìn)行病原檢測(cè)。將全血樣品，采用核酸提取試劑盒提取核酸，然后用AHS 病原熒光PCR 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。檢測(cè)為陽(yáng)性，判定該份樣品為陽(yáng)性，有1 份及以上陽(yáng)性樣品的場(chǎng)，判定為陽(yáng)性場(chǎng)。

1.3.3 H3N8 亞型EI 采用HI 方法進(jìn)行H3N8 亞型抗體檢測(cè)。向待檢血清中加入2 倍體積新配制的0.016 mol/L 過(guò)碘酸鉀溶液，置于（22±2）℃作用15 min；之后加入與血清等體積的含3%甘油的PBS，以中和過(guò)剩的過(guò)碘酸溶液，混合后置于（22 ±2）℃作用15 min；最后，在56 ℃水浴中滅活30 min，采用1%雞紅細(xì)胞進(jìn)行HI 試驗(yàn)。被檢樣品HI 效價(jià)≤3log2，判為陰性；HI 效價(jià)=4log2，判為可疑，進(jìn)行重檢，若重檢效價(jià)≥4log2，判為陽(yáng)性，≤3log2，判為陰性；HI 效價(jià)≥5log2，判為陽(yáng)性。有1份及以上陽(yáng)性樣品的場(chǎng)，判定為陽(yáng)性場(chǎng)。

2 結(jié)果

對(duì)采集的694 份血清樣品進(jìn)行EIA 抗體檢測(cè)，結(jié)果全部為陰性。對(duì)采集的694 份全血樣品進(jìn)行AHS 病原檢測(cè)，結(jié)果全部為陰性。

對(duì)采集的639 份樣品（去除不合格樣品55 份）進(jìn)行H3N8 亞型EI 抗體檢測(cè)，結(jié)果在6 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)均檢測(cè)到陽(yáng)性樣品，場(chǎng)群陽(yáng)性率為100%；檢出520份血清陽(yáng)性樣品，樣品陽(yáng)性率為81.38%（520/639）。其中：147 份馬血清樣品中檢出126 份陽(yáng)性，樣品陽(yáng)性率為85.71%；492 份驢血清樣品中檢出394份陽(yáng)性，樣品陽(yáng)性率為80.08%。詳見(jiàn)表1。

表1 H3N8 亞型EI 抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

本次馬屬動(dòng)物主要病毒性疫病調(diào)查涉及6 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，采樣動(dòng)物均未接種過(guò)所調(diào)查疫病的疫苗，因此檢出陽(yáng)性即為感染。檢測(cè)結(jié)果顯示，EIA 和AHS 均為陰性，而H3N8 亞型EI 群體陽(yáng)性率和樣品陽(yáng)性率分別為100%和81.38%，說(shuō)明H3N8 亞型EI 在這些場(chǎng)點(diǎn)流行普遍，感染率高。

EIA 曾遍及全世界，給養(yǎng)馬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，在國(guó)外尤其是歐美國(guó)家有流行范圍擴(kuò)大的趨勢(shì)，我國(guó)周邊的日本、蒙古國(guó)和印度，也有發(fā)生EIA 的報(bào)道[7]。雖然目前我國(guó)已經(jīng)接近消滅該病，但國(guó)外日趨嚴(yán)峻的疫情形勢(shì)和頻繁的國(guó)際交流給該病防控提出了更高的要求。

2020 年3 月底，泰國(guó)多次向OIE 通報(bào)發(fā)生AHS 疫情，最近的疫點(diǎn)距離我國(guó)邊境不足800 km，再加上該病可經(jīng)蚊蟲(chóng)叮咬傳播，使我國(guó)防控壓力增大。目前該病無(wú)有效治療藥物，主要通過(guò)染疫馬匹撲殺、同群馬匹緊急免疫和蚊蟲(chóng)殺滅等策略進(jìn)行綜合防控，同時(shí)進(jìn)行馬屬動(dòng)物AHS 監(jiān)測(cè)。

EI 在世界許多國(guó)家廣泛存在，我國(guó)許多地區(qū)也存在著不同程度的感染[8-9]。從本次調(diào)查的結(jié)果看，所有的場(chǎng)點(diǎn)均監(jiān)測(cè)到抗體陽(yáng)性，樣品陽(yáng)性率在80%以上，說(shuō)明EI 流行比較嚴(yán)重，流行較為普遍。

由于項(xiàng)目采樣的局限性，僅采集了6 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，場(chǎng)點(diǎn)數(shù)量偏低，檢測(cè)結(jié)果不能代表全省馬屬動(dòng)物疫病的實(shí)際狀況，僅能從側(cè)面了解全省的基本情況。今后應(yīng)結(jié)合國(guó)內(nèi)外馬屬動(dòng)物疫情形勢(shì)，在全省加強(qiáng)馬屬動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)，尤其是要加強(qiáng)H3N8 亞型EI的監(jiān)測(cè)與防控。