不同殺菌劑對煙草赤星病菌室內(nèi)毒力測定

蔡 梁，胡長志，張文梅，李松宴，崔汝強*

不同殺菌劑對煙草赤星病菌室內(nèi)毒力測定

蔡 梁1，胡長志2，張文梅2，李松宴1，崔汝強1*

（1. 江西農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，江西南昌 330045；2. 撫州市煙草公司廣昌分公司，江西廣昌 344000）

【目的】篩選防治煙草赤星病的有效藥劑?！痉椒ā坎捎镁z生長速率法和孢子萌發(fā)法測定7種殺菌劑對煙草赤星病菌（）的毒力作用。【結(jié)果】菌絲生長速率法中56%啶?！る烤ァ?0%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%丙硫菌唑、50%氯溴異氰尿酸的EC50值分別為0.152 5，0.160 3，0.242 0，1.813 7，4.566 3，14.845 7，86.976 1 mg/L，孢子萌發(fā)法中50%啶酰菌胺、50%氯溴異氰尿酸、56%啶?！る烤?、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%肟菌·戊唑醇、30%丙硫菌唑的EC50值分別為0.127 2，0.133 3，0.208 8，1.319 1，1.821 8，3.128 2，27.045 8 mg/L。供試的7種殺菌劑中對菌絲生長的抑制效果最好的是56%啶酰·肟菌酯，EC50值為0.152 5 mg/L；對孢子萌發(fā)的抑制效果最好的是50%啶酰菌胺，EC50值為0.127 2 mg/L。【結(jié)論】56%啶?！る烤ズ?0%啶酰菌胺可優(yōu)先作為煙草赤星病田間防治實驗用藥，72%霜脲·錳鋅和30%肟菌·戊唑醇可用作交替使用殺菌劑。

煙草赤星病菌；殺菌劑；毒力測定

【研究意義】煙草赤星病是由(Fr.) Keissler引起的一種葉部真菌性病害[1]，主要發(fā)生在煙葉成熟后期，嚴重影響煙葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，從而造成不同程度的經(jīng)濟損失[2-3]?！厩叭搜芯窟M展】煙草赤星病是一種典型的流行病，流行速度快，潛育期短，在煙草生長季節(jié)可多次反復侵染植株[4-5]。煙草赤星病一般從植株下部葉片向上部逐漸擴展，發(fā)病初期呈現(xiàn)黃褐色小斑點，后逐漸擴大為圓形或長圓形的深褐色病斑[6]，病斑呈現(xiàn)多重同心輪紋，同時輪紋上有絨毛狀褐色霉層，霉層為病原菌的分生孢子和分生孢子梗[7-8]。煙草赤星病發(fā)病嚴重時，常導致多個病斑相連，使得病斑處穿孔破裂，從而導致整片煙葉破碎而失去經(jīng)濟價值[9]?！颈狙芯壳腥朦c】目前煙草赤星病的防治主要以化學防治為主[10]，市面上防治效果較好的藥劑主要為菌核凈和多抗霉素，由于長期大量使用這2類藥劑，導致了抗藥性和農(nóng)藥殘留的產(chǎn)生，在部分煙區(qū)已經(jīng)表現(xiàn)出防效降低現(xiàn)象，以及菌核凈禁用等現(xiàn)象[11-12]，為此需要篩選更多低毒、高效、降解速度快的殺菌劑，為煙草赤星病的防治提供幫助?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以56%啶?！る烤ァ?0%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%丙硫菌唑、50%氯溴異氰尿酸這7種殺菌劑為材料，測定其室內(nèi)毒力，以期為煙草赤星病的化學防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

煙草赤星病菌（）由江西農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院植物病理實驗室-80 ℃下保存，使用前活化。

1.2 供試藥劑

56%啶酰·肟菌酯SC（京博農(nóng)化科技有限公司）、50%啶酰菌胺WG（巴斯夫中國有限公司）、30%肟菌·戊唑醇SC（浙江中山化工集團股份有限公司）、72%霜脲·錳鋅WP（京博農(nóng)化科技有限公司）、80%戊唑醇WP（陜西先農(nóng)生物科技有限公司）、30%丙硫菌唑SC（安徽久易農(nóng)業(yè)股份有限公司）、50%氯溴異氰尿酸WP（綠亨科技集團股份有限公司）。

1.3 供試藥劑對病原菌的毒力測定

1.3.1 菌絲生長速率法 將供試菌株接種于PDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，制備直徑為1 cm的菌餅備用。各供試藥劑先用無菌水配置成母液，再用無菌水稀釋，配置成6個不同濃度梯度的藥液。各藥劑的試驗濃度梯度為：0.1，0.5，1，5，10，50 mg/L。分別取1 mL稀釋液加入裝有9 mL滅菌PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，搖勻后倒入直徑10 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，凝固后制成含藥平板培養(yǎng)基。將直徑為1 cm的菌餅接種于含藥PDA培養(yǎng)基上。對照組為加無菌水的PDA培養(yǎng)基，每個處理3次重復。將接種后的培養(yǎng)基置于25 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，7 d后用“十字交叉法”測量菌落直徑。計算各處理組菌落增長直徑及菌絲生長抑制率[13]。菌絲生長抑制率按下式計算。

菌絲生長抑制率=（對照組菌落增長直徑-處理組菌落增長直徑）/對照組菌落增長直徑×100% （1）

1.3.2 孢子萌發(fā)法 用無菌水配置孢子懸浮液（105～106孢子/mL）。各待測藥劑濃度梯度與菌絲生長速率法中的濃度梯度相同。用移液槍吸取20 μL孢子懸浮液于凹玻片內(nèi)，再分別加入20 μL各濃度梯度的藥液，配成含藥劑的孢子懸浮液。對照組為加入等量無菌水，每個處理3次重復。將凹玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)25 ℃黑暗保濕培養(yǎng)，24 h后鏡檢孢子萌發(fā)情況，每個處理隨機觀察3個視野，共100個孢子。計算孢子萌發(fā)率及藥劑對孢子萌發(fā)的抑制率[13]。孢子萌發(fā)率和萌發(fā)抑制率分別按以下公式計算。

孢子萌發(fā)率=孢子萌發(fā)數(shù)/檢查孢子總數(shù)×100% （2）

孢子萌發(fā)抑制率=（對照組孢子萌發(fā)率-處理組孢子萌發(fā)率）/對照組孢子萌發(fā)率×100% （3）

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS25.0軟件進行統(tǒng)計分析。以各藥劑濃度的對數(shù)為橫坐標（x），抑制率的幾率值為縱坐標（y），求出各藥劑對供試菌株的毒力回歸方程及有效抑制中濃度（EC50值）和相關(guān)系數(shù)（R2）。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對菌絲生長的抑制作用

7種殺菌劑對煙草赤星病菌菌絲生長的抑制作用測定結(jié)果見表1，不同濃度下56%啶?！る烤煵莩嘈遣【z生長抑制效果見圖1。由表1可知7種殺菌劑抑制菌絲生長的EC50值介于0.152 5～86.976 1 mg/L，其中56%啶酰·肟菌酯、50%啶酰菌胺、30%肟菌·戊唑醇、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇這5種殺菌劑對菌絲生長的抑制活性較強，其EC50值分別為0.152 5，0.160 3，0.242 0，1.813 7，4.566 3 mg/L，而30%丙硫菌唑和50%氯溴異氰尿酸對菌絲生長的抑制活性弱，其EC50值分別為14.845 7，86.976 1 mg/L，均顯著大于10 mg/L。

圖1 不同濃度下56%啶?！る烤煵莩嘈遣【z生長抑制效果

表1 7種殺菌劑對煙草赤星病菌菌絲生長的抑制作用測定結(jié)果

圖2 各藥劑濃度為1 mg/L時對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果

2.2 7種殺菌劑對孢子萌發(fā)的抑制作用

7種殺菌劑對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測定結(jié)果見表2，各藥劑濃度為1 mg/L時對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果見圖2。由表2可知7種殺菌劑抑制孢子萌發(fā)的EC50值介于0.127 2～27.045 8 mg/L，其中50%啶酰菌胺、50%氯溴異氰尿酸、56%啶?！る烤?、72%霜脲·錳鋅、80%戊唑醇、30%肟菌·戊唑醇這6種殺菌劑對孢子萌發(fā)的抑制活性較強，其EC50值分別為0.127 2，0.133 3，0.208 8，1.319 1，1.821 8，3.128 2 mg/L。但30%丙硫菌唑?qū)︽咦用劝l(fā)的抑制活性較低，其EC50值為27.045 8 mg/L，顯著大于10 mg/L。

表2 7種殺菌劑對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本試驗采用菌絲生長速率法和孢子萌發(fā)法分析了7種殺菌劑對煙草赤星病菌的毒力，結(jié)果表明，50%啶酰菌胺、56%啶?！る烤ァ?2%霜脲·錳鋅、30%肟菌·戊唑醇對菌絲生長和孢子萌發(fā)均有較好的抑制效果，其中50%啶酰菌胺和56%啶?！る烤サ囊种菩Ч顬轱@著。本結(jié)果與沈宏等[14]、陳杰等[15]對煙草赤星病菌藥劑篩選的研究結(jié)果類似。啶酰菌胺通過葉面滲透在植物中轉(zhuǎn)移，抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶，阻礙三羧酸循環(huán)，干擾細胞的分裂和生長，對病害有神經(jīng)活性[16]。啶?！る烤ネㄟ^細胞色素b與c1之間的電子傳遞而阻止細胞ATP合成，從而抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用[15]。本試驗還發(fā)現(xiàn)50%氯溴異氰尿酸對于菌絲生長的抑制活性不強，但對于孢子萌發(fā)的抑制活性較強，因此該藥物適合在發(fā)病前期孢子萌發(fā)階段進行預防應用。30%丙硫菌唑?qū)z生長和孢子萌發(fā)的抑制活性均不強，因此不建議使用該藥劑對赤星病菌進行防治。

基于本試驗結(jié)果，建議在進行煙草赤星病田間防治時可優(yōu)先選用50%啶酰菌胺和56%啶?！る烤?，72%霜脲·錳鋅和30%肟菌·戊唑醇可以用作交替使用殺菌劑。本試驗只在室內(nèi)測定了藥劑對菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制活性，對煙草實際生產(chǎn)中的藥劑防治效果有待進一步研究。

[1] 易龍. 煙草赤星病防治研究進展[J]. 植物保護, 2003, 29(5): 10-14.

[2] 譚仲夏. 煙草赤星病的生物防治研究現(xiàn)狀及展望[J]. 中國煙草學報, 2005, 11(3): 34-38.

[3] 劉學敏. 煙草赤星病研究現(xiàn)狀及存在問題[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學學報, 2000, 31(1): 80-85.

[4] 濮瑜, 馬旭, 王恒昊, 等. 煙草赤星病流行動態(tài)與不同打頂時期的相關(guān)性[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學, 2010(23): 86-89.

[5] 何可佳, 湯光忠, 黃聲儀, 等. 煙草赤星病發(fā)生規(guī)律與防治研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學學報, 1997, 23(5): 445-449.

[6] 劉會合. 煙草赤星病的發(fā)生與防治措施[J]. 農(nóng)業(yè)科技通訊, 1998(5): 26.

[7] 申榮艷. 煙草赤星病菌()毒力變異機制及病斑擴展規(guī)律研究[D]. 哈爾濱: 東北農(nóng)業(yè)大學, 2003.

[8] 張萬良, 翟爭光, 謝揚軍, 等. 煙草赤星病研究進展[J]. 江西農(nóng)業(yè)學報, 2011, 23(1): 122-124.

[9] 譚蔭初. 煙草赤星病的為害癥狀與藥劑防治[J]. 植保技術(shù)與推廣, 1997, 17(3): 29-30.

[10] 吳凌飛. 煙草赤星病的防治[J]. 河南農(nóng)業(yè), 2002(9): 18.

[11] 李梅云. 煙草赤星病菌對菌核凈的抗藥性測定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學報, 2007, 20(3): 412-416.

[12] 孟建玉, 曹毅, 陸寧, 等. 貴州省煙草赤星病菌對菌核凈的抗藥性[J]. 植物保護學報, 2013, 40(5): 479-480.

[13] 方中達. 植病研究法[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1998: 124.

[14] 沈宏, 張家韜, 崔志燕, 等. 12種藥劑對煙草赤星病菌的抑菌效果研究[J]. 植物醫(yī)生, 2020, 33(3): 6.

[15] 陳杰, 李六英, 高敏, 等. 煙草赤星病室內(nèi)防治藥劑篩選及田間防治效果[J]. 中國煙草科學, 2017, 38(1): 73-77.

[16] 雷飛斌, 汪漢成, 代園鳳, 等. 貴州省煙草赤星病菌對啶酰菌胺的敏感性基線[J]. 農(nóng)藥學學報, 2021, 23(4): 812-816.

Determination of Laboratory Toxicities of Different Fungicides on Tobacco Brown Spot

CAI Liang1, HU Changzhi2, ZHANG Wenmei2, LI Songyan1, CUI Ruqiang1*

(1. School of Agronomy Science, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China; 2. Guangchang Branch of Fuzhou Tobacco Company, Guangchang, Jiangxi 344000, China)

This study was conducted to screen effective fungicides for the prevention and control of tobacco brown spot.The virulence of seven fungicides againstwere determined by mycelial growth rate method and spore germination method.The EC50values of 56% boscalid-oxime, 50% boscalid, 30% oxime tebuconazole, 72% fenoxycarb-manganese zinc, 80% tebuconazole, 30% prothioconazole and 50% chlorobromoisocyanuric acid in the mycelial growth rate method were 0.152 5, 0.160 3, 0.242 0, 1.813 7, 4.566 3, 14.845 7, 86.976 1 mg/L. While, the EC50values of 50% boscalid, 50% chlorobromoisocyanuric acid, 56% boscalid-oxime, 72% thiram-manganese zinc, 80% tebuconazole, 30% oxime tebuconazole, and 30% prothioconazole in the spore germination method were 0.127 2, 0.133 3, 0.208 8, 1.319 1, 1.821 8, 3.128 2, 27.045 8 mg/L. The control effect of 56% boscalid-oxime onin tobacco was the best inhibitor of mycelial growth among the seven fungicides, with EC50of 0.152 5 mg/L; and, the best inhibitor of spore germination was 50% boscalid, with EC50of 0.127 2 mg/L.56% boscalid-oxime and 50% boscalid could be preferred for experimental field prevention and control of tobacco brown spot, and 72% fenoxycarb-manganese zinc and 30% oxime tebuconazole could be used as alternate fungicides.

; fungicide; toxicity test

S435.72

A

2095-3704（2021）04-0465-04

蔡梁, 胡長志, 張文梅, 等. 不同殺菌劑對煙草赤星病菌室內(nèi)毒力測定[J]. 生物災害科學, 2021, 44(4): 465-468.

2021-11-24

2021-12-08

撫州煙草公司項目（撫煙科[2018]8號）

蔡梁（1996—），男，碩士生，主要從事植物病理研究，liangcai996@163.com；

通信作者：崔汝強，教授，博士，cuiruqiang@qq.com。