氯氟氰蟲酰胺注干劑在松樹體內(nèi)的殘留動(dòng)態(tài)

熊彩云，陳秋榮，王文輝，李 彬，金明霞

氯氟氰蟲酰胺注干劑在松樹體內(nèi)的殘留動(dòng)態(tài)

熊彩云1，陳秋榮2，王文輝1，李 彬3*，金明霞1

（1. 江西省林業(yè)科學(xué)院，江西 南昌 330013；2. 江西省靖安縣林業(yè)局，江西 靖安 330600；3. 吉安市青原區(qū)林業(yè)局，江西 吉安 343000）

【目的】為探明氯氟氰蟲酰胺注干劑在松樹體內(nèi)的持效時(shí)間?！痉椒ā坎捎酶咝б合嗌V法測定不同時(shí)期松樹體內(nèi)氯氟氰蟲酰胺的含量?！窘Y(jié)果】注干施藥后5～120d均可從樣樹的枝條中檢測到氯氟氰蟲酰胺，注藥劑量為10 mL時(shí)藥后15d含量達(dá)到高峰，為16.54mg/kg，藥后120d含量為1.24mg/kg?！窘Y(jié)論】松樹注藥5～120d內(nèi)枝條上氯氟氰蟲酰胺藥液濃度均高于其對松材線蟲的LC50值而對松材線蟲和松褐天牛等有防治抑制作用。

氯氟氰蟲酰胺；注干劑；傳導(dǎo)；殘留

【研究意義】松材線蟲病是一種松林毀滅性病害，該病主要由媒介昆蟲松褐天牛（Hope）攜帶松材線蟲（（Steiner & Buhrer）NiCKle）傳播，可危害多種松屬植物[1]。前期研究結(jié)果表明，4.8%氯氟氰蟲酰胺注干液對松材線蟲及松褐天牛均有較高的防效，氯氟氰蟲酰胺進(jìn)入松樹體內(nèi)后，在殺死樹體內(nèi)的松材線蟲，清除病原的同時(shí)，還對松褐天牛卵的孵化成活率和低齡幼蟲成活率有較高的抑制作用，能大幅度降低傳播媒介松褐天牛的種群密度，阻隔松材線蟲病的傳播途徑，從而對松材線蟲病有顯著的防治效果[2-3]。因此，開展氯氟氰蟲酰胺注干劑在松樹體內(nèi)的動(dòng)態(tài)輸導(dǎo)研究，旨在為科學(xué)、合理的應(yīng)用該藥劑防治松材線蟲病提供理論指導(dǎo)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】我國自1982年在南京首次發(fā)現(xiàn)松材線蟲病以來，各級林業(yè)工作者做了大量的研究工作，在松材線蟲病發(fā)病規(guī)律、發(fā)生癥狀、傳播途徑、診斷等方面取得了重大研究進(jìn)展。目前已證實(shí)氯氟氰蟲酰胺、阿維菌素、甲維鹽等注干藥劑對松材線蟲病有較好的防效[4-5]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)及擬解決的關(guān)鍵問題】為探明氯氟氰蟲酰胺在松樹體內(nèi)的持效時(shí)間，本研究開展了氯氟氰蟲酰胺在松樹體內(nèi)的輸導(dǎo)研究，采用高效液相色譜法測定了其殘留含量，為明確注干施藥有效時(shí)間提供技術(shù)依據(jù)。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)地設(shè)江西省林業(yè)科學(xué)院松樹林，地處南昌市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)，位于北緯28°41′，東經(jīng)115°48′，為松闊混交林，林內(nèi)松樹主要有馬尾松（Lamb.）、濕地松（）火炬松（L.）等，闊葉樹有油茶（Abel.）、山茶（L.）、樟樹（Levl.）等，林下灌叢主要以白花檵木（（R. Br.）Oliver）為主。

1.2 材料與設(shè)備

4.8%氯氟氰蟲酰胺注干劑（江西大農(nóng)化工有限公司）、98%氯氟氰蟲酰胺原藥、乙腈（色譜純）、丙酮（分析純）、正己烷（分析純）、NaCl（分析純）、MgSO4（分析純）。

充電式手持打孔器、6mm不銹鋼鉆頭、10mL注射器。布氏漏斗、C18-SPE柱、0.22 μm、濾膜；粉碎機(jī)、振蕩器、FJ-200高速分散均質(zhì)機(jī)、C18-SPE凈化柱、全自動(dòng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國海道夫）、Waters 1525高效液相色譜儀、Waters 2998二極管陣列檢測器和Waters 2707自動(dòng)進(jìn)樣器、Milli-Qreference超純水制備系統(tǒng)、150 mm×4.6 mm不銹鋼柱色譜柱。

1.3 樣木施藥與樣品處理

在試驗(yàn)地選擇胸徑10cm左右，樹高約5.5m的馬尾松作為樣木。

1.3.1 施藥方法 于2020年3月13日對樣株進(jìn)行注干施藥，施藥劑量分別為10，15，25 mL；每個(gè)劑量注藥5株，以清水為對照。注干方法：在樹干基部距地面30～40cm，用手持充電式電鉆6mm鉆頭在松樹樹干四周各打6～9個(gè)孔，鉆頭與樹干的夾角在45～60°為宜，孔與孔之間錯(cuò)開位置，呈螺旋式，避免在同一水平位置上或同一平面上?？咨罡鶕?jù)樹干的胸徑來決定，處于第二層邊材與心材之間（最深不超過打孔處直徑的一半），用注射器向孔內(nèi)緩慢注入藥液后以濕泥封注藥口。

1.3.2 取樣 于注藥后第5，15，30，60，90，120d用高枝剪分別采集樹干2 m以上相同部位注干樣木枝條，每一枝取粗細(xì)一致長約50cm的部分，將采集到的樣品枝條帶回實(shí)驗(yàn)室劈成細(xì)條，自然陰干后粉碎，過30目篩備用。

1.3.3 樣品處理 （1）提取方法。取20g干燥樣品木屑置于250mL磨口三角瓶中，加入30mL去離子水，靜置10 min后，加入50mL乙腈（含0.1mol/L的乙酸0.5mL），振蕩1h后用均質(zhì)機(jī)高速均質(zhì)3～5min，靜置12 h后再用布氏漏斗抽濾至預(yù)裝有5 g Nacl+8 g MgSO4的具塞量筒中劇烈搖晃1min后靜置1h。吸取25mL上層有機(jī)相轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀圓底燒瓶中濃縮至近干待凈化[6-7]。

（2）凈化。先用10 mL正己烷活化C18-SPE柱，用10 mL的正己烷-丙酮（體積比9﹕1）溶解殘?jiān)蠘樱?0 mL的正己烷-丙酮(體積比8﹕2)洗滌平底燒瓶上樣，流出液均棄掉，然后使用20 mL的正己烷-丙酮（體積比6﹕4）洗脫，收集洗脫液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上（40 ℃）濃縮至近干，氮?dú)獯蹈桑?.0 mL色譜乙腈定容，超聲，過0.22 μm濾膜，待檢測。進(jìn)樣和洗脫過程中，其流速均為1mL/min[8]。

（3）儀器檢測條件。Waters 1525高效液相色譜儀，Waters 2998二極管陣列檢測器和Waters 2707自動(dòng)進(jìn)樣器，Milli-Q reference超純水制備系統(tǒng)，色譜柱：150 mm×4.6 mm不銹鋼柱，內(nèi)裝SB-C18、5μm填充物。

液相色譜操作條件流動(dòng)相：乙腈﹕水（70﹕30），柱溫40 ℃，流速1 mL/min；檢測波長：210nm；進(jìn)樣體積：10μL。在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化＜1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。準(zhǔn)確稱取氯氟氰蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品10mg，先用乙腈配制成1 000 mg /L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再用乙腈逐級稀釋為10，5，1，0.5，0.1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，最后用乙腈稀釋配制成氯氟氰蟲酰胺質(zhì)量濃度分別為0.01，0.05，0.1，0.5，1，5 mg/L的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。在所選儀器檢測條件下檢測，得出儀器響應(yīng)值與進(jìn)樣質(zhì)量濃度的線性回歸方程。以外標(biāo)法定量[9]。

（5）添加回收率。在對照樣品中分別添加13mg、33mg氯氟氰蟲酰胺原藥，按樣品處理方法進(jìn)行提取、凈化；對照樣品用同樣方法提取、凈化。上述凈化液進(jìn)行高效液相色譜測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用上述色譜條件進(jìn)行測定，橫坐標(biāo)代表質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)代表峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。由圖1可知，氯氟氰蟲酰胺質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的一元線性正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)值為0.999 9，線性方程為=4.30e+0.04+5.19e+0.03。氯氟氰蟲酰胺標(biāo)樣色譜圖如圖2，標(biāo)樣色譜保留時(shí)間約為15.0min。

圖1 氯氟氰蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 氯氟氰蟲酰胺標(biāo)樣色譜

2.2 回收率

試驗(yàn)結(jié)果表明，氯氟氰蟲酰胺在松樹上的添加回收率檢測值為78.16%～90.41%，基本符合檢測要求，說明該檢測方法準(zhǔn)確度和精密度較高，基本能滿足檢測要求（圖3）。

圖3 對照樣品加標(biāo)后色譜圖

2.3 施藥后不同時(shí)間馬尾松樹體內(nèi)氯氟氰蟲酰胺含量變化

由高效液相色譜檢測結(jié)果可得，施藥后5～120d均可從樣樹的枝條中檢測到氯氟氰蟲酰胺，檢測數(shù)據(jù)如表1所示。注藥劑量為10mL，藥后5～120 d檢測到的氯氟氰蟲酰胺含量分別為2.98，16.54，0.20，0.32，0.46，1.24mg/kg（圖4）。

表1 藥后不同時(shí)間氯氟氰蟲酰胺含量

由表1可得，各施藥劑量藥后在松樹體內(nèi)的氯氟氰蟲酰胺含量隨時(shí)間的變化，注藥10mL藥后15 d含量達(dá)到高峰，為16.54mg/kg，藥后120 d含量為1.24mg/kg；而注藥15mL藥后60 d含量達(dá)到高峰，為9.21mg/kg，藥后120 d含量為2.02mg/kg，均大于氯氟氰蟲酰胺毒力測定的LC50值0.685mg/L，說明注藥5 d后的松樹對松材線蟲和松褐天牛等有防治抑制作用?？傮w上，藥液進(jìn)入松樹體內(nèi)后隨著松樹植株生理作用達(dá)到枝條，高峰后隨著時(shí)間增加而衰減，藥后120d枝條的氯氟氰蟲酰胺的含量仍對松材線蟲和松褐天牛有抑制防治作用。

圖4 注藥10 mL 5 d的檢測色譜圖

3 小結(jié)與討論

注干施藥對林木蛀干害蟲及樹干部病害具有良好的防效，且施藥部位精準(zhǔn)，作用時(shí)間較長，不損害生態(tài)環(huán)境，在近年來得到廣泛應(yīng)用[10-13]。松材線蟲病防控，關(guān)鍵是對松褐天牛的防控，而打孔注干施藥被證實(shí)是一種非常有效的措施[14-15]。

馬尾松注干施用氯氟氰蟲酰胺，5d后即可在松樹枝條內(nèi)檢測到氯氟氰蟲酰胺，藥液含量明顯高于其對松材線蟲的LC50值，藥后120 d枝條的氯氟氰蟲酰胺的含量仍高于LC50值，說明注藥5～120d內(nèi)對松材線蟲和松褐天牛等有抑制作用。許志春等[16]在楊樹上注干施用吡蟲靈防治光肩星天牛及黃斑星天牛成蟲，認(rèn)為楊樹樹干木質(zhì)部中吡蟲啉的持留量隨時(shí)間而動(dòng)態(tài)變化，施藥后5 d左右持留量最高，以后又逐漸下降，40 d后藥劑在樹體內(nèi)仍然有較高的持留量；張揚(yáng)等[17]認(rèn)為氯氟氰蟲酰胺在馬尾松樹體內(nèi)具有較好的內(nèi)吸輸導(dǎo)性，注干3個(gè)月后在松樹體內(nèi)仍有較大的殘留量，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本一致。

松褐天牛在江西隨地理緯度不同發(fā)生時(shí)間和世代存在差異，以1年發(fā)生1代為主，在贛南和贛中有不同比例的2代發(fā)生，3月下旬即可見成蟲，最晚11月中旬才結(jié)束[18-19]。因此，氯氟氰蟲酰胺在樹體內(nèi)的殘留時(shí)間越長，對松褐天牛的有效防治時(shí)間就越長，本實(shí)驗(yàn)只檢測了氯氟氰蟲酰胺注干120 d內(nèi)的殘留量，更長時(shí)間如1年后或2年后是不是還能檢測到殘留量，有待后續(xù)進(jìn)一步進(jìn)行取樣檢測。

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Dynamic Residues ofDry Injection in Pines

XIONG Caiyun1, CHEN Qiurong2, WANG Wen-hui1, LI Bin3*, JIN Mingxia1

(1. Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013, China; 2. Forestry Bureau of Jing’an County, Jing’an, Jiangxi 330600, China; 3. Forestry Bureau of Qingyuan District, Ji’an, Jiangxi 343000, China）

This study was conducted to find out the durative time of dry injection ofin pines.The contents ofin pine trees at different times were determined by High-performance liquid chromatography (HPLC).After 5-120 days,could be detected in the branches of the pine trees. The content ofreached a peak of 16.54 mg/kg at 15 days and 1.24 mg/kg at 120 days, and the LC50value was 0.685 mg/kg determined by the toxicity test.The LC50value ofin the branches of pine trees was higher than that of pine wood nematode from 5 to 120 days after the injection of, and so it could inhibitand.

; dry injection; transmit; residuals

S481+.8

A

2095-3704（2021）04-0431-05

熊彩云, 陳秋榮, 王文輝, 等. 氯氟氰蟲酰胺注干劑在松樹體內(nèi)的殘留動(dòng)態(tài)[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2021, 44(4): 431-435.

2021-09-03

2021-09-06

江西省林業(yè)創(chuàng)新專項(xiàng)（202131）和江西省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（20171BBF60077，20202BBFL63016）

熊彩云（1972—），女，研究員，主要從事林業(yè)有害生物防治工作，526928485@qq.com；

通信作者：李彬，工程師，1123834797@qq.com。