微小RNA- 365 在高血壓心肌肥厚患者中的表達(dá)及其與血壓、左心室質(zhì)量指數(shù)的相關(guān)性

周序鋒 鄒良英 黃 鶴 鐘文婷 王 碑

1.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，江西贛州 341000；2.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院超聲醫(yī)學(xué)科，江西贛州 341000

心肌肥厚是多種心血管疾病共有的病理特征之一，源于長期機(jī)械刺激、內(nèi)分泌因子改變或機(jī)體代謝紊亂，促使心臟超負(fù)荷工作而發(fā)生的損傷性反應(yīng)[1-4]。有研究顯示[5-6]，病理性心肌肥厚是心血管疾病發(fā)生及死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其病情嚴(yán)重程度對(duì)進(jìn)行性心臟疾病具有重要預(yù)測(cè)作用。臨床已發(fā)現(xiàn)許多重要參與調(diào)控心肌肥厚發(fā)生、發(fā)展的信號(hào)通路，但其發(fā)生的分子機(jī)制還有待深入研究，因此探索新的心肌肥厚調(diào)控基因，為心肌肥厚治療尋找新的靶標(biāo)，對(duì)防治心臟疾病有重要意義。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長度為19~23 nt 的內(nèi)源性單鏈非編碼微小RNA 分子，其表達(dá)或功能異常可介導(dǎo)病理性心肌肥厚的觀點(diǎn)已得到普遍認(rèn)同[7-8]。 有研究表明[9]，miRNA-365 在病理性心肌肥厚進(jìn)展過程中也發(fā)揮著重要作用， 但目前miRNA-365 的表達(dá)及功能研究多集中在動(dòng)物模型上，較少在臨床患者中研究。 前期動(dòng)物預(yù)實(shí)驗(yàn)已明確miRNA-365 對(duì)于心肌肥厚的作用機(jī)制，基于此，本研究進(jìn)一步探究心肌肥厚患者中miRNA-365 表達(dá)水平與臨床心肌肥厚的相關(guān)性，旨在為臨床治療心肌肥厚尋找新的診斷及治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年6 月至2021 年2 月贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的100 例高血壓患者為研究對(duì)象，其中高血壓合并左心室肥厚的患者分為觀察組（50 例），單純高血壓患者分為對(duì)照2 組（50 例），另選取同期進(jìn)行體檢的健康者50 名為對(duì)照1 組。 觀察組中，男26 例，女 24 例；年齡 43~61 歲，平均（50.06±5.46）歲；平均受教育年限（9.4±3.4）年；平均病程時(shí)間（4.5±1.3）年。 對(duì)照 2 組中，男 24 例，女 26 例；年齡 42~60歲，平均（50.10±5.50）歲；平均受教育年數(shù)（8.6±2.8）年；平均病程時(shí)間（4.8±1.5）年。 對(duì)照 1 組中，男 25 例，女 25例；年齡 41~62 歲，平均（51.00±5.50）歲；平均受教育年數(shù)（8.5±2.7）年。 三組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 本研究獲取醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國高血壓防治指南》[10]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)； ②左心室質(zhì)量指數(shù)， 男性＞115 g/m2，女性＞95 g/m2；③所有研究對(duì)象自愿簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①肥厚型、限制型心肌病或繼發(fā)性高血壓者；②合并中重度瓣膜病、甲狀腺功能異常者；③合并惡性心律失常、先天性心臟病者。

1.3 方法

受試者均進(jìn)行動(dòng)態(tài)血壓、診室血壓檢測(cè)及心臟彩超檢查，記錄相關(guān)參數(shù)數(shù)據(jù)。采集受試者外周靜脈血，采用RT-PCR 法檢測(cè) miRNA-365 表達(dá)。 依據(jù) Trizol試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）說明書提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄總RNA 至cDNA，之后行RT-PCR（SYBR Green 法），以 U6 為內(nèi)參。 miRNA-365 正向引物序列：5′-TAATGCCCCTAAAAATCCTTAT-3′；反向引物序列：5′-CACTTCCTCAGCACTTGTTGGTAT-3′。

診室血壓檢測(cè)采用聽診法用水銀柱血壓計(jì)測(cè)得血壓讀數(shù)， 動(dòng)態(tài)血壓采用動(dòng)態(tài)血壓測(cè)量儀進(jìn)行測(cè)量，設(shè)置定時(shí)測(cè)量，白天每15~30 分鐘1 次，夜間睡眠，每30~60 分鐘1 次；日間有效血壓測(cè)量次數(shù)至少為14次，夜間7 次。 左心室質(zhì)量指數(shù)為左心室質(zhì)量除以體表面積。

1.4 觀察指標(biāo)

①記錄并比較三組的動(dòng)態(tài)血壓、日間血壓、診室血壓及左心室質(zhì)量指數(shù)。 ②比較三組的miRNA-365表達(dá)情況。 ③分析miRNA-365 表達(dá)與血壓參數(shù)及左心室質(zhì)量指數(shù)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗(yàn)。 以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組動(dòng)態(tài)血壓、日間血壓、診室血壓及左心室質(zhì)量指數(shù)的比較

觀察組動(dòng)態(tài)血壓（24 h 平均收縮壓、舒張壓、脈壓）、日間血壓（白天收縮壓、舒張壓、脈壓）、診室血壓（診室收縮壓、舒張壓、脈壓）及左心室質(zhì)量指數(shù)均高于對(duì)照1 組、對(duì)照 2 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)照 2組動(dòng)態(tài)血壓、日間血壓、診室血壓及左心室質(zhì)量指數(shù)均高于對(duì)照 1 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1~4）。

表1 三組動(dòng)態(tài)血壓的比較（mmHg，）

表1 三組動(dòng)態(tài)血壓的比較（mmHg，）

與對(duì)照 1 組比較，aP＜0.05；與對(duì)照 2 組比較，bP＜0.05

組別 24 h 平均收縮壓 24 h 平均舒張壓 24 h 平均脈壓對(duì)照 1 組（n=50）對(duì)照 2 組（n=50）觀察組（n=50）F 值P 值119.21±10.01 152.17±11.37a 158.29±10.30ab 197.506<0.001 80.16±6.37 86.27±8.06a 89.90±8.51ab 20.423<0.001 93.17±8.19 108.24±9.71a 111.36±9.40ab 56.835<0.001

表2 三組日間血壓的比較（mmHg，）

表2 三組日間血壓的比較（mmHg，）

與對(duì)照 1 組比較，aP＜0.05；與對(duì)照 2 組比較，bP＜0.05；1 mmHg=0.133 kPa

組別 白天收縮壓 白天舒張壓 白天脈壓對(duì)照 1 組（n=50）對(duì)照 2 組（n=50）觀察組（n=50）F 值P 值121.26±10.13 154.27±11.56a 159.76±10.51ab 187.624<0.001 82.40±5.20 90.16±8.14a 93.17±8.90ab 26.849<0.001 95.35±7.66 111.53±9.85a 115.37±9.70ab 67.791<0.001

表3 三組診室血壓的比較（mmHg，）

表3 三組診室血壓的比較（mmHg，）

與對(duì)照 1 組比較，aP＜0.05；與對(duì)照 2 組比較，bP＜0.05；1 mmHg=0.133 kPa

組別 診室收縮壓 診室舒張壓 診室脈壓對(duì)照 1 組（n=50）對(duì)照 2 組（n=50）觀察組（n=50）F 值P 值123.34±9.34 155.29±11.59a 158.36±10.07ab 174.679<0.001 83.20±6.08 90.27±8.02a 94.29±9.01ab 25.913<0.001 96.58±7.71 111.94±9.80a 115.65±9.54ab 62.208<0.001

表4 三組左心室質(zhì)量指數(shù)的比較（）

表4 三組左心室質(zhì)量指數(shù)的比較（）

與對(duì)照 1 組比較，aP＜0.05；與對(duì)照 2 組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) 左心室質(zhì)量指數(shù)對(duì)照1 組對(duì)照2 組觀察組F 值P 值50 50 50 97.84±5.27 104.24±4.21a 123.28±5.06ab 369.433＜0.001

2.2 三組miRNA-365 表達(dá)情況的比較

觀察組miRNA-365 表達(dá)水平高于對(duì)照1 組、對(duì)照2 組，對(duì)照2 組miRNA-365 表達(dá)水平高于對(duì)照1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表 5）。

表5 三組 miRNA-365 表達(dá)情況的比較（）

表5 三組 miRNA-365 表達(dá)情況的比較（）

與對(duì)照 1 組比較，aP＜0.05；與對(duì)照 2 組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) miRNA-365 表達(dá)對(duì)照1 組對(duì)照2 組觀察組F 值P 值50 50 50 0.84±0.16 1.02±0.27a 1.22±0.31ab 27.852＜0.001

2.3 miRNA-365 表達(dá)與血壓參數(shù)及左心室質(zhì)量指數(shù)的相關(guān)性

miRNA-365 表達(dá)與觀察組動(dòng)態(tài)血壓、 左心室質(zhì)量指數(shù)均呈正相關(guān)（P＜0.05），與日間血壓、診室血壓均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）（表 6）。

表6 miRNA-365 表達(dá)與觀察組血壓參數(shù)及左心室質(zhì)量指數(shù)的相關(guān)性

3 討論

心肌肥厚是一種基因異常而導(dǎo)致的心肌病理性增厚，可發(fā)生于各個(gè)年齡段，人群發(fā)生率約為0.2%，臨床有胸悶、頭暈、心前區(qū)不適等癥狀，部分患者出現(xiàn)心力衰竭、房顫等嚴(yán)重并發(fā)癥，更有甚者出現(xiàn)心源性猝死，不利于個(gè)體生命健康[11-12]。 研究顯示[13]，心肌肥厚嚴(yán)重程度對(duì)于進(jìn)行性心臟病具有重要預(yù)測(cè)作用，且病理性心肌肥厚最終發(fā)展為心力衰竭是導(dǎo)致心肌肥厚患者死亡的重要原因。目前臨床對(duì)心肌肥厚病理機(jī)制尚未完全明確，為心肌肥厚診治尋找新的靶點(diǎn)仍是臨床試驗(yàn)重點(diǎn)研究方向。

研究證實(shí)[14]，心肌細(xì)胞自噬與心肌肥厚密切相關(guān)， 臨床可通過調(diào)控自噬相關(guān)miRNA 表達(dá)影響心肌肥厚。 miRNA 通過與相關(guān)下游靶基因結(jié)合，調(diào)控細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄后水平，參與細(xì)胞增殖、分化等生理過程，其表達(dá)或功能異?？山閷?dǎo)病理性心肌肥厚的觀點(diǎn)已得到普遍認(rèn)同。 miRNA-365 是miRNA 的重要成員之一，既往多被認(rèn)為參與惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展。 新近研究表明[15]，miRNA-365 可能在病理性心肌肥厚進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。 前期動(dòng)物預(yù)實(shí)驗(yàn)已明確miRNA-365對(duì)于心肌肥厚的作用機(jī)制，此次在前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步去探究在臨床心肌肥厚患者中miRNA-365 的表達(dá)水平與心肌肥厚的相關(guān)性， 結(jié)果顯示，miRNA-365 表達(dá)與高血壓合并心肌肥厚患者動(dòng)態(tài)血壓、左心室質(zhì)量指數(shù)均呈正相關(guān)，表明miRNA-365 表達(dá)在高血壓心肌肥厚病理機(jī)制中有重要作用，猜測(cè)源于miRNA-365 在RNA 聚合酶作用下形成較長的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，在相關(guān)復(fù)合體作用下形成含有核苷酸的發(fā)夾狀RNA，經(jīng)復(fù)合物作用被轉(zhuǎn)運(yùn)出胞核，作為轉(zhuǎn)錄因子中重要的靶分子在細(xì)胞功能調(diào)控中發(fā)揮核心作用，進(jìn)而影響疾病進(jìn)展。

綜上所述，動(dòng)態(tài)血壓、左心室質(zhì)量指數(shù)可輔助診斷高血壓心肌肥厚疾病，且高血壓心肌肥厚患者機(jī)體miRNA-365 表達(dá)與動(dòng)態(tài)血壓、 左心室質(zhì)量指數(shù)呈正相關(guān)，可為臨床診治高血壓合并心肌肥厚提供新的治療靶點(diǎn)。