CyclinD1 在乳腺癌中的表達(dá)及其與雌激素受體的關(guān)系

左志博 鄔萬(wàn)新 李鑫 張琳 楊宏杰 汪靜宇 胡少青

乳腺癌是世界上第二常見(jiàn)的癌癥類型，在女性中發(fā)病率最高。乳腺癌盡管在分子基礎(chǔ)方面已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，治療方式也有了很大的改進(jìn)，但仍有相當(dāng)數(shù)量的腫瘤會(huì)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。在過(guò)去的幾年中，關(guān)于乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的研究都集中在針對(duì)治療藥物敏感性的基因調(diào)控上[1]。在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的擴(kuò)增，影響了細(xì)胞周期調(diào)控、擾亂細(xì)胞周期、促進(jìn)生長(zhǎng)和癌變。CyclinD1 是惡性腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)鍵因素，促進(jìn)腫瘤的侵襲性和高增殖活性[2]。本次研究旨在分析在CyclinD1 在乳腺癌中的表達(dá)水平以及與雌激素受體（estrogen receptor，ER）的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019 年9 月至2020 年9 月嘉興市第一醫(yī)院手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本61 份，患者年齡30～88 歲，平均年齡（55.38±10.62）歲；術(shù)前未接受過(guò)放化療等新輔助治療；經(jīng)病理確診為乳腺浸潤(rùn)性癌；有完整的臨床病理資料。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)乳腺癌中CyclinD1 的表達(dá)，選用Roche Benchmark XT全自動(dòng)免疫組織化學(xué)儀。CyclinD1 抗體（SA38-08，1∶100）購(gòu)自北京中杉金橋公司。本次研究用扁桃體組織作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖溶液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)于CyclinD1 的免疫組化結(jié)果判讀采用標(biāo)準(zhǔn)化免疫反應(yīng)評(píng)分（immunoreactive score，IRS）[3]。染色強(qiáng)度和染色腫瘤細(xì)胞百分比乘積即為IRS。染色腫瘤百分比分為5 個(gè)等級(jí)：0%為0 分；1%～10%陽(yáng)性為1 分；11%～50%陽(yáng)性為2 分；51%～80%陽(yáng)性為3 分；＞80%陽(yáng)性為4 分。染色強(qiáng)度分為4 個(gè)等級(jí)：陰性為0 分；弱染色為1 分；中等染色為2 分；強(qiáng)染色為3 分。將兩個(gè)值相乘，所得IRS 得分在0 和12 之間，將IRS≥6 分設(shè)定為高表達(dá)，IRS＜6 分設(shè)為低表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CyclinD1在乳腺癌組織中的表達(dá)情況 61份乳腺癌組織中，根據(jù)IRS 評(píng)分結(jié)果，呈CyclinD1 低表達(dá)33 份，低表達(dá)率為54.10%，呈CyclinD1 高表達(dá)28 份，高表達(dá)率為45.90%。CyclinD1 在乳腺癌組織中的表達(dá)見(jiàn)封三圖3。

圖3 CyclinD1在乳腺癌組織中的表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色，×400倍）

2.2 CyclinD1 在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER 及臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表1

由表1 可見(jiàn)，不同年齡、腫塊大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、孕激素受體（progesterone receptor，PR）表達(dá)水平、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）表達(dá)水平及Ki67 表達(dá)水平的乳腺癌組織中的CyclinD1 表達(dá)無(wú)明顯差異（χ2分別=0.02、1.04、0.12、1.04、2.49、3.87、0.00、1.07，P均＞0.05）。但在ER 陽(yáng)性乳腺癌組織中的CyclinD1 高表達(dá)率明顯高于ER 陰性乳腺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.04，P＜0.05）。

表1 乳腺癌組織中CyclinD1表達(dá)情況與ER及臨床病理特征的關(guān)系/例（%）

2.3 ER 陽(yáng)性乳腺癌組織中的CyclinD1 表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表2

由表2 可見(jiàn)，不同腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、PR 表達(dá)水平、Ki67 表達(dá)水平的乳腺癌組織中CyclinD1 表達(dá)存在顯著性差異（χ2分別=5.33、5.33、7.99、6.08、6.46，P均＜0.05）；但不同年齡、組織學(xué)分級(jí)、HER2 表達(dá)水平乳腺癌組織中CyclinD1 表達(dá)無(wú)明顯差異性（χ2分別=3.35、4.36、0.09，P均＞0.05）。

3 討論

乳腺癌是全世界女性死亡的主要原因之一，許多研究工作集中在更好地了解其致癌途徑和尋找新的乳腺癌生物標(biāo)志物，探索其預(yù)后預(yù)測(cè)和治療預(yù)測(cè)價(jià)值。目前，有許多生物標(biāo)志物與乳腺癌的進(jìn)展和治療反應(yīng)有關(guān)，但不同的研究之間缺乏一致的結(jié)果，限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用[4]。

CyclinD1 是位于染色體11 q13 上的CCND1 基因的產(chǎn)物。CyclinD1是細(xì)胞周期的一個(gè)重要調(diào)節(jié)因子，在乳腺癌細(xì)胞系中誘導(dǎo)CyclinD1可使通過(guò)G1期的細(xì)胞數(shù)量增加，并加速?gòu)腉1 期向S 期的轉(zhuǎn)變，這表明CyclinD1對(duì)通過(guò)G1期的進(jìn)展具有速率限制性。細(xì)胞周期進(jìn)程中的這一限速過(guò)程受到包括CyclinD1在內(nèi)的多種機(jī)制的調(diào)控，因此，CyclinD1基因的調(diào)控解除可能是導(dǎo)致癌變過(guò)程中細(xì)胞周期失去正?？刂频脑蛑籟5]。小鼠模型中已經(jīng)證實(shí)CyclinD1 可以促進(jìn)正常乳腺和乳腺腫瘤的發(fā)展。CyclinD1 在20%的人類乳腺癌病例中出現(xiàn)基因擴(kuò)增，在50%以上的乳腺腫瘤中蛋白質(zhì)過(guò)度表達(dá)[6]。本次研究分析了CyclinD1 在乳腺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，在61 份乳腺癌組織中，CyclinD1 呈高表達(dá)28 份，高表達(dá)率為45.90%，表明CyclinD1在乳腺癌組織中有較高的過(guò)表達(dá)率。

雌激素在正常乳腺上皮細(xì)胞的增殖分化以及乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著核心作用，同時(shí)ER 參與了一些靶基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，進(jìn)而指導(dǎo)細(xì)胞增殖。在這些基因中，CyclinD1 起著關(guān)鍵性作用[7]。孔令慧等[8]對(duì)78 例乳腺癌患者進(jìn)行了CyclinD1 檢測(cè)，結(jié)果提示ER 陽(yáng)性組的CyclinD1 表達(dá)明顯高于ER 陰性組，并且與程序性細(xì)胞死亡蛋白-1 配體水平呈負(fù)相關(guān)。Huang 等[9]對(duì)101 例女性浸潤(rùn)性乳腺癌患者進(jìn)行回顧性研究，用免疫組化檢測(cè)CyclinD1 和ER 水平，結(jié)果顯示CyclinD1 的表達(dá)與ER 水平呈正相關(guān)。Ortiz 等[4]使用組織芯片技術(shù)，對(duì)179 例乳腺癌進(jìn)行了免疫組化檢測(cè)，CyclinD1 的過(guò)度表達(dá)與ER 表達(dá)及管腔型密切相關(guān)。還有研究表明乳腺癌中CyclinD1 與ER 的mRNA 水平呈正相關(guān)，在ER 陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中，CyclinD1 轉(zhuǎn)錄活性影響著雌激素對(duì)細(xì)胞周期的作用[10]。本次研究分析了ER 陽(yáng)性乳腺癌組織和ER 陰性乳腺癌組織中的CyclinD1 表達(dá)差異，結(jié)果顯示ER 陽(yáng)性乳腺癌組織的CyclinD1 高表達(dá)率明顯高于ER 陰性乳腺癌組織（P均＜0.05），表明CyclinD1 在ER 陽(yáng)性乳腺癌組織中有著更高的表達(dá)水平。

CyclinD1 在乳腺癌中是否是危險(xiǎn)因素是一個(gè)有爭(zhēng)議的課題[3]。Ahlin 等[11]認(rèn)為當(dāng)ER 陽(yáng)性和ER 陰性病例一起分析時(shí)，CyclinD1 信號(hào)異常對(duì)總體預(yù)后沒(méi)有影響。然而，在ER 陽(yáng)性患者中，CyclinD1 的高表達(dá)與乳腺癌的死亡風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，并且與腫瘤大小和分級(jí)相關(guān)，這提示CyclinD1 表達(dá)的預(yù)后影響取決于ER 受體狀態(tài)。Ahlin 等[11]在研究表明CyclinD1 的過(guò)度表達(dá)增加了ER 陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞系的干細(xì)胞樣行為和遷移，而ER 陰性細(xì)胞則相反，這表明CyclinD1 在ER 陽(yáng)性和ER 陰性乳腺癌中的表達(dá)效果可能有著根本的不同。本次研究結(jié)果分析了ER陽(yáng)性乳腺癌組織中的CyclinD1 表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示CyclinD1 高表達(dá)率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高TNM 分期密切相關(guān)，提示CyclinD1 在ER 陽(yáng)性乳腺癌組織中可能具有著不利因素，ER陽(yáng)性乳腺癌組織中的CyclinD1高表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致惡性程度增高。

Lundberg 等[12]在管腔A 型乳腺癌中發(fā)現(xiàn)，CyclinD1 擴(kuò)增組出現(xiàn)了PR 表達(dá)減少以及Ki67 表達(dá)增加，這可能可以解釋為什么在管腔A 型乳腺癌中CyclinD1擴(kuò)增腫瘤相對(duì)于非擴(kuò)增腫瘤表現(xiàn)出較差的生存率。Ortiz 等[4]研究顯示CyclinD1 基因擴(kuò)增與Ki67 蛋白高表達(dá)密切相關(guān)，提示了CyclinD1 與高增殖活性的相關(guān)性。Mohammedi 等[5]在乳腺癌中發(fā)現(xiàn)CyclinD1 和Ki67 之間存在明顯的相關(guān)性，這與更具侵襲性的腫瘤表型有關(guān)，他們認(rèn)為CyclinD1 過(guò)表達(dá)的腫瘤具有更強(qiáng)的生長(zhǎng)潛力，并且更容易促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展，從而導(dǎo)致Ki67 的過(guò)表達(dá)。同時(shí)，本次研究分析了在ER 陽(yáng)性乳腺癌中CyclinD1 表達(dá)狀況與PR 水平及Ki67 指數(shù)的關(guān)系，結(jié)果顯示CyclinD1高表達(dá)組的PR 水平明顯降低，并且其Ki67 指數(shù)明顯增高，表明CyclinD1 可能通過(guò)降低孕激素水平及增強(qiáng)細(xì)胞增殖活性來(lái)促進(jìn)腫瘤的惡性程度。

綜上所述，CyclinD1在ER陽(yáng)性乳腺癌組織中表達(dá)更高，并且CyclinD1 高表達(dá)在ER 陽(yáng)性乳腺癌組織中可能是不利因素。本次研究的不足之處是納入研究的樣本量有限，并且缺少隨訪資料，今后會(huì)擴(kuò)大樣本量并加入隨訪資料來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證乳腺癌中CyclinD1 與激素受體的關(guān)系，為乳腺癌患者提供預(yù)后信息及治療指導(dǎo)方針。