止痛消炎軟膏對甘露醇所致靜脈炎兔血清TNF-α和IL-6表達的影響

金海琴 石曉雯 于志芳 吳彩虹

靜脈炎是臨床上靜脈用藥后常見的并發(fā)癥，導致局部血管內(nèi)皮受損，引起血管內(nèi)皮細胞凋亡，局部血管炎癥反應(yīng)。血清腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）是機體炎癥與免疫的重要調(diào)節(jié)因子，其濃度高低直接反映了炎癥的嚴重程度[1]。近年來，臨床上常見使用止痛消炎軟膏外敷來預(yù)防靜脈炎。然而其說明書中并未明確說明對靜脈炎有效，因此，本次研究通過動物實驗觀察止痛消炎軟膏對靜脈炎的防治效果，并通過測定IL-6和TNF-α炎癥因子的表達水平，探索其對靜脈炎的防治作用機制，為臨床用藥提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備 2020 年8 月購買由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗研究中心提供的24 只新西蘭兔，體重2.2～2.5 kg，雌雄各12 只，在清潔環(huán)境中單籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。將24 只健康大耳白兔按隨機數(shù)字表法隨機分為四組：止痛消炎膏組、硫酸鎂組、模型組和空白組，每組6 只。四組實驗兔一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）。

1.2 方法 四組實驗兔均使用物理方法備皮，范圍為兔耳緣靜脈全長，注射部位為兔耳緣靜脈距耳尖2 cm 處，用甲紫標記，近心方向穿刺，每次定點穿刺，所有實驗兔的兩耳均同時利用（兩耳都注射）。靜脈輸注時避免藥物外滲，有明確外滲時廢棄模型。采用目前通用的靜脈炎造模方式，即常溫下靜脈輸注20%甘露醇溶液，用藥量2.5 ml/kg，給藥速率為5.0 ml/min，每日2 次，間隔6 h，共2 d。造模成功后，模型組實驗兔不給予任何干預(yù)措施；硫酸鎂組實驗兔予25%硫酸鎂濕紗布外敷，每日2 次更換，間隔6 h；止痛消炎膏組實驗兔予止痛消炎軟膏沿裸露靜脈外敷，厚度為3 mm，用紗布包裹固定，每日2 次更換，間隔6 h；空白組實驗兔常規(guī)飼養(yǎng)，不做任何處置。

1.3 評價指標 評價四組實驗兔的雙耳靜脈炎發(fā)生情況和在6 h、24 h、48 h 靜脈炎嚴重程度評分。靜脈炎嚴重程度評價標準根據(jù)美國護理學會《輸液治療護理實踐標準》中靜脈炎的判斷標準[2]，結(jié)合動物特點去除疼痛指標，將靜脈炎分為5 個等級并評分，評分越高，靜脈炎程度越重。比較四組實驗兔在6 h、24 h、48 h 的IL-6和TNF-α水平變化。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 18.0 軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（）表示。計量資料比較采用單因素方差分析和t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 四組實驗兔在實驗期間飲食、活動基本正常。模型組兔耳靜脈可見紅腫，伴有條索狀改變，可觸及硬結(jié)，部分出現(xiàn)潰爛；硫酸鎂組、止痛消炎膏組兔耳靜脈炎癥均有不同程度的減輕?？瞻捉M兔耳靜脈正常。

2.2 四組實驗兔耳靜脈炎評分、IL-6 和TNF-α 水平比較見表1

由表1 可見，四組實驗兔6 h、24 h、48 h 耳靜脈炎評分比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F分別=21.44、29.94、34.45，P均＜0.05）；四組實驗兔6 h、24 h、48 h的血清IL-6、TNF-α 表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F分別=5.56、25.90、4.30；9.51、16.26、9.08，P均＜0.05）。其中模型組實驗兔6 h、24 h、48 h 的靜脈炎評分、IL-6、TNF-α 指標均高于空白組，差異均有統(tǒng)計學意義（t分別=5.64、8.71、11.17；3.58、2.88、2.79；2.37、6.31、4.75，P均＜0.05）；止痛消炎膏組和硫酸鎂組實驗兔6 h、24 h、48 h 靜脈炎評分、IL-6 水平均低于模型組（t分別=3.80、5.00、8.02；3.22、4.92、7.25；3.26、5.44、2.93；2.47、2.58、2.64，P均＜0.05）；止痛消炎膏組實驗兔6 h、24 h、48 h 的TNF-α 指標均低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（t分別=2.60、3.64、3.91，P均＜0.05）；硫酸鎂組實驗兔6 h、24 h、48 h 的TNF-α 指標與模型組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t分別=2.19、1.23、0.88，P均＞0.05）；止痛消炎膏組實驗兔6 h 靜脈炎評分及6 h、48 h IL-6 和TNF-α 指標和硫酸鎂組實驗兔6 h 的IL-6 和TNF-α 指標與空白組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t分別=1.61；0.30、0.13；0.20、0.75；1.03、0.34，P均＞0.05）；止痛消炎膏組實驗兔24 h、48 h 和硫酸鎂組實驗兔6 h、24 h、48 h 靜脈炎評分均高于空白組（t分別=3.41、2.72；2.42、3.79、3.92，P均＜0.05）；止痛消炎膏組實驗兔24 h IL-6、TNF-α 指標和硫酸鎂組實驗兔24 h、48 h IL-6、TNF-α 指標均高于空白組，差異均有統(tǒng)計學意義（t分別=2.88、2.67；4.97、3.41；5.52、3.55，P均＜0.05）；止痛消炎膏組實驗兔24 h的IL-6和TNF-α指標均低于硫酸鎂組，差異均有統(tǒng)計學意義（t分別=2.31、2.67，P均＜0.05）；止痛消炎膏組6 h、24 h、48 h 靜脈炎評分及6 h、48 h IL-6、TNF-α 指標與硫酸鎂組實驗兔比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t分別=0.81、0.38、1.21；0.74、0.46；0.56、2.19，P均＞0.05）。

表1 四組實驗兔耳靜脈炎評分、IL-6和TNF-α水平比較

3 討論

止痛消炎軟膏作為臨床廣泛應(yīng)用的中藥制劑，主要用于治療關(guān)節(jié)疼痛，風濕病，關(guān)節(jié)炎等導致的疼痛，有止痛消炎的功效，近年來也被廣泛應(yīng)用于靜脈炎的預(yù)防。本次研究利用20%甘露醇誘導兔耳靜脈炎模型，應(yīng)用止痛消炎軟膏外敷可有效防治靜脈炎。本次研究結(jié)果顯示，模型組實驗兔6 h、24 h、48 h 的靜脈炎評分、IL-6、TNF-α 指標均高于空白組（P均＜0.05），說明應(yīng)用20%甘露醇造模方法造模成功，這主要是由于20%甘露醇是一種高滲性液體，輸注時可以使血漿滲透壓升高，導致靜脈壁通透性增加，引起血管炎性改變，導致血管內(nèi)皮細胞凋亡，各類炎癥細胞釋放[3，4]。IL-6 和TNF-α作為炎癥反應(yīng)的早期和重要的炎癥指標，其濃度高低與炎癥反應(yīng)的程度密切相關(guān)[5]。本次研究結(jié)果顯示，止痛消炎軟膏外敷干預(yù)后靜脈炎的評分、IL-6、TNF-α 各指標均較模型組低（P均＜0.05），說明止痛消炎軟膏外敷能降低靜脈炎的發(fā)生，這與林燕如等[4]、張益娥等[5]的研究結(jié)果一致，原因可能與中藥外敷時藥物直接作用于血管，通過透皮吸收，直接發(fā)揮藥效有關(guān)。止痛消炎軟膏成份中包含獨活、生天南星、生草烏、皂莢、芒硝、水楊酸甲酯和冰片，這些中藥成份有祛風散寒、止痛、散結(jié)、消腫、行氣、通絡(luò)之功效。同時，止痛消炎軟膏中的獨活含有香豆素、揮發(fā)油等類化學成分，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等藥理活性。也有動物實驗表明，獨活的活性成分為二氫山芹醇、二氫山芹醇乙酸酯等，能有效抑制IL-6 和TNF-α 等炎癥因子的表達，有抗炎作用[6]。止痛消炎軟膏的輔助成份芒硝和冰片屬于性寒之物，外用時芒硝的主要成分硫酸鈉水解產(chǎn)生大量硫酸根離子，使局部滲透壓升高，從而減輕局部炎癥以及降低急性炎癥指標，起到抗炎作用[7]。另外，本次研究結(jié)果顯示，硫酸鎂組的IL-6 表達濃度與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義，而TNF-α 表達濃度與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義，這可能是因為IL-6 比TNF-α 在炎癥指標表達過程中靈敏度更高[8]。止痛消炎膏組在24 h 時IL-6 和TNF-α 表達水平均低于硫酸鎂組，這說明止痛消炎軟膏在24 h 對靜脈炎的療效優(yōu)于硫酸鎂，這與多項臨床觀察研究結(jié)果一致[5，9，10]。這可能是因為硫酸鎂濕敷后會在皮膚表面形成結(jié)晶，水分較快揮發(fā)，紗布干燥，影響藥效的發(fā)揮，而止痛消炎軟膏為混合油狀膏體，直接涂擦于皮膚表面，不僅接觸更好，而且其為油狀，涂擦后不易干燥揮發(fā)，可長時間保持濕潤狀態(tài)，故能更好的發(fā)揮藥效。而6 h 和48 h 兩者療效無差異，可能與靜脈炎的嚴重程度有關(guān)，從模型組的數(shù)據(jù)可見，隨著時間的延長，靜脈炎的程度越重，硫酸鎂可能對輕度的靜脈炎療效確切，而止痛消炎軟膏對靜脈炎的療效相對更加持久且有效，而對于重度靜脈炎的療效還有待進一步研究。

綜上所述，止痛消炎軟膏能夠防治甘露醇引起的靜脈炎，不僅改善了靜脈炎的癥狀，同時，對IL-6和TNF-α 炎癥因子均有不同程度的減輕，特別是對輕中度靜脈炎的療效優(yōu)于硫酸鎂，這為止痛消炎軟膏在臨床上的應(yīng)用提供了重要的依據(jù)。但是，本次研究由于樣本量有限，可能對相關(guān)研究結(jié)果造成偏差，因此，今后會進一步擴大樣本量驗證止痛消炎軟膏對靜脈炎的防治作用，及對IL-6和TNF-α炎癥因子表達的影響。另外，目前認為靜脈炎的病理機制為藥物的刺激對血管內(nèi)膜造成損傷，促使靜脈壁發(fā)生炎癥反應(yīng)，釋放炎癥因子，產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)NF-KB p65 被激活。因此，今后的試驗研究方向考慮從NF-KB 炎癥信號通路進一步探討止痛消炎軟膏防治靜脈炎的作用及機制，尋找更有針對性的防治靜脈炎的方法。