EGFR、Her-2 在卵巢漿液性癌中的表達(dá)及臨床意義

王曉慧，曹丹，許玲，馬瑞

（菏澤市立醫(yī)院，山東 菏澤 274000）

卵巢癌尤其是高級(jí)別漿液性癌在婦科惡性腫瘤的病理中最為常見，病死率高。臨床治療晚期卵巢癌的方法通常為綜合治療（手術(shù)聯(lián)合化療），而在聯(lián)合治療后仍有較高的復(fù)發(fā)率，5 年生存率僅為31%，預(yù)后差，因此尋找關(guān)鍵的分子生物學(xué)標(biāo)志物具有重要意義。研究表明，卵巢癌組織絕大部分存在EGFR高表達(dá)[1]，曾有研究對(duì)EGFR 在良性卵巢腫瘤和卵巢癌患者腫瘤組織的表達(dá)情況分析，結(jié)果卵巢癌組織EGFR表達(dá)水平明顯高于良性腫瘤，且隨著臨床分期的進(jìn)展，EGFR 上升水平呈明顯升高趨勢(shì)。Her-2 蛋白是與EGFR 同源的具有酪氨酸蛋白激酶活性的糖蛋白，與EGFR 在結(jié)構(gòu)和功能上相似，同屬Ⅰ型生長因子受體家族，因此兩者在腫瘤的發(fā)生和生物學(xué)行為等方面可能存在協(xié)同作用。有學(xué)者證實(shí)Her-2 過表達(dá)可激活EGFR信號(hào)通路，促進(jìn)EGFR介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生。本研究擬探討高級(jí)別漿液性癌中Her-2 和EGFR的表達(dá)情況、兩者表達(dá)之間的相關(guān)性以及與卵巢高級(jí)別漿液性癌臨床病理特征的關(guān)系，期望篩選探索出Her-2 和EGFR 在卵巢高級(jí)別漿液性癌發(fā)生發(fā)展中的作用，協(xié)助卵巢癌的診療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集菏澤市立醫(yī)院病理科2010—2018 年手術(shù)切除的卵巢漿液性腫瘤標(biāo)本存檔蠟塊400 例，分為四組，高級(jí)別卵巢漿液性癌組170 例、低級(jí)別卵巢漿液性癌組110 例、卵巢交界性漿液性腫瘤組70 例和卵巢漿液性囊腺瘤組50 例。所有病例均無術(shù)前治療。高級(jí)別卵巢漿液性癌組，年齡26～69歲，平均年齡（50.15±10.52）歲。按照WHO《女性生殖器官腫瘤》分類標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)兩位資深病理醫(yī)師確診高級(jí)別和低級(jí)別卵巢漿液性癌。高級(jí)別卵巢漿液性癌臨床分期參照FIGO標(biāo)準(zhǔn)（國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟）：Ⅰ期24例，Ⅱ期20例，Ⅲ期99例，Ⅳ期27例。

1.2 方法 對(duì)400 例卵巢漿液性腫瘤標(biāo)本及170 例高級(jí)別卵巢漿液性癌標(biāo)本的EGFR、Her-2 表達(dá)情況及兩者相關(guān)性進(jìn)行分析。

根據(jù)試劑盒說明染色。各實(shí)驗(yàn)組手術(shù)切除組織經(jīng)4%多聚甲醛固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋，然后進(jìn)行5 μm連續(xù)切片，經(jīng)脫臘、水化、EDTA抗原修復(fù)、內(nèi)源性過氧化物酶去除，加入相應(yīng)的EGFR、Her-2一抗，設(shè)置陰性對(duì)照和陽性對(duì)照組，次日參照說明書進(jìn)行后續(xù)顯色，行蘇木素染核后顯微鏡下觀察。二者均于胞漿或胞膜中表達(dá)，染色陽性者呈棕黃色顆粒。

免疫組化結(jié)果用DAKO Hercept Test及陽性細(xì)胞占觀察細(xì)胞比例兩種方法結(jié)合進(jìn)行評(píng)分[1-2]。每個(gè)切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野判讀結(jié)果。按染色強(qiáng)度分為：陰性，無著色（-）；小于25%細(xì)胞著色（+）；大于等于25%，小于50%細(xì)胞著色（++）；大于等于50%細(xì)胞著色（+++）。用Image J軟件進(jìn)行圖像評(píng)價(jià)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；posttest 兩兩比較采用Bonfferoni 檢驗(yàn)水準(zhǔn)校正；EGFR與Her-2 的相關(guān)表達(dá)采用Spearman 相關(guān)分析；以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組卵巢腫瘤組織中EGFR 和Her-2 表達(dá)的差異 卵巢高級(jí)別漿液性癌EGFR、Her-2表達(dá)陽性率為84.3%、31.2%，在胞漿、胞膜中可見棕黃色沉淀。采用Bonfferoni 檢驗(yàn)水準(zhǔn)校正，EGFR 在卵巢高級(jí)別漿液性癌中的陽性率明顯高于卵巢交界性漿液性腫瘤組（P＜0.001）、卵巢漿液性囊腺瘤組（P＜0.001），但是與卵巢低級(jí)別漿液性癌組EGFR 的表達(dá)率之間差異不明顯（P＞0.05）。卵巢高級(jí)別漿液性癌中Her-2的陽性率明顯高于卵巢低級(jí)別漿液性癌組（P＜0.001）、卵巢交界性漿液性腫瘤組（P＜0.001）、卵巢漿液性囊腺瘤組（P＜0.001）。見表1。

表1 各組卵巢腫瘤組織中EGFR、Her-2表達(dá)與病理特征的關(guān)系

2.2 卵巢高級(jí)別漿液性癌組織中EGFR和Her-2的表達(dá)與患者年齡、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系 在卵巢高級(jí)別漿液性癌組織中，臨床分期Ⅰ～Ⅱ期EGFR 蛋白陽性表達(dá)率為52.3%，Ⅲ～Ⅳ期EGFR 蛋白陽性表達(dá)率為81.7%，不同臨床分期EGFR蛋白的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期Her-2蛋白陽性表達(dá)率為11.4%，Ⅲ～Ⅳ期Her-2蛋白陽性表達(dá)率為31%，不同臨床分期Her-2蛋白的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在卵巢高級(jí)別漿液性癌組織中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組EGFR、Her-2蛋白的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P均＜0.001）。見表2。

表2 高級(jí)別卵巢漿液性癌中EGFR、Her-2表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

2.3 高級(jí)別卵巢漿液性癌組織中EGFR，Her-2 的相關(guān)性分析 高級(jí)別卵巢漿液性癌組織中EGFR 與Her-2協(xié)同表達(dá)，呈正相關(guān)（r=0.277，P＜0.01）。

3 討論

卵巢癌作為嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤，專家公認(rèn)為目前致命的婦科惡性腫瘤之一[2]，2015年中國癌癥中心數(shù)據(jù)顯示，每年新增卵巢癌患者52 100例，卵巢癌死亡患者22 500 例。雖然在過去三四十年里，卵巢癌病死率每年以1%～2%的速度下降，部分原因可解釋為絕經(jīng)后激素使用的減少和使用口服避孕藥[3]。然而，50%以上的女性在診斷后存活時(shí)間不超過5年，卵巢癌多會(huì)復(fù)發(fā)，一旦腫瘤復(fù)發(fā)，病情迅速進(jìn)展和治療的耐藥性會(huì)導(dǎo)致后續(xù)治療的間隔時(shí)間越來越短，75%卵巢癌患者的復(fù)發(fā)是不可治愈的[4-6]。及時(shí)的診斷、系統(tǒng)的治療和適當(dāng)?shù)氖中g(shù)對(duì)卵巢癌的預(yù)后起著至關(guān)重要的作用，而絕大多數(shù)的卵巢上皮性癌是在腫瘤已經(jīng)擴(kuò)散到腹膜腔和腹部臟器時(shí)確診的，因而錯(cuò)過了最佳治療時(shí)間，術(shù)后五年的存活率很低[7]。卵巢惡性腫瘤95%以上屬上皮性癌[4]，上皮性卵巢癌共分為5種組織學(xué)亞型，其中70%以上為卵巢高級(jí)別漿液性癌，是最為常見的組織學(xué)亞型[8]。其早期診斷存在一定困難，發(fā)現(xiàn)時(shí)大多已存在廣泛的盆腹腔轉(zhuǎn)移。雖然目前治療方法上以手術(shù)切除為主，但是術(shù)后5 年生存率僅為40%～60%，且存在一定的術(shù)后復(fù)發(fā)率，術(shù)后40%～70%的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移率明顯限制了患者生存質(zhì)量。盡管治療上有一定的進(jìn)展，但患者病死率仍較高。卵巢癌治療面臨的挑戰(zhàn)被廣泛認(rèn)知，需要深入的分子和細(xì)胞分析研究相結(jié)合，卵巢癌的治療開始在生物標(biāo)志物治療方面經(jīng)歷創(chuàng)新。

表皮生長因子受體EGFR 是迄今為止研究最充分的受體酪氨酸激酶，是首個(gè)被提出以受體二聚化作為跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式的膜蛋白，EGFR可激活多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，其中主要的通路包括PI3K-PKC-IKK通路、RAS-RAF-MEK-MAPK 通路、JAK-STAT 通路?？赏ㄟ^激活上述通路發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞生長的作用,可通過受體發(fā)生自分泌環(huán)活化、磷酸酶失活、受體表達(dá)、受體突變等機(jī)制影響細(xì)胞生長周期，導(dǎo)致惡性轉(zhuǎn)變，人類約1/3惡性腫瘤存在EGFR過表達(dá)[9]。也有研究證實(shí)，EGFR在腫瘤轉(zhuǎn)移和血管生成中發(fā)揮著重要作用，參與細(xì)胞增殖和分化、黏附、生存等多個(gè)過程[10-11]。EGFR 在正常卵巢組織中表達(dá)較低，但是其可通過自/旁分泌等形式促進(jìn)卵巢癌增殖。EGFR 信號(hào)通路在卵巢癌的發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[12-14]。有學(xué)者證實(shí)，在肝癌組織中，EGFR 表達(dá)升高。在卵巢癌組織中，有約60%的患者EGFR 存在表達(dá)異常，且這種表達(dá)異常與不良預(yù)后相關(guān)。EGFR 在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于良性者，且與腫瘤臨床進(jìn)展呈顯著正相關(guān)[15-16]。鉑類化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖可產(chǎn)生抑制作用，但與此同時(shí)會(huì)增加細(xì)胞內(nèi)EGFR蛋白表達(dá)。EGFR 蛋白表達(dá)水平在預(yù)后不良以及化療效果不佳患者中極高，說明EGFR表達(dá)水平與患者預(yù)后以及化療療效存在相關(guān)性。前期研究表明EGFR陽性患者治療有效率、3 年生存率均明顯低于陰性者。國外學(xué)者研究顯示EGFR 在腫瘤組織中的陽性率與臨床分期呈正相關(guān)。本研究結(jié)果表明EGFR 在卵巢腫瘤各組中的表達(dá)也證明前期研究結(jié)果，卵巢腫瘤組織中EGFR 的表達(dá)與病理類型、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P均＜0.001），尤其在高級(jí)別卵巢漿液性癌中，臨床分期為Ⅲ、Ⅳ期者EGFR 的表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期[16]，說明EGFR 參與高級(jí)別卵巢漿液性癌的進(jìn)展并影響其預(yù)后。

人類表皮生長因子受體2（Her-2）屬EGFR 家族成員之一，位于17q12-21染色體上，編碼相對(duì)分子量為185KD的跨膜受體蛋白，具有酪氨酸激酶活性，參與調(diào)控細(xì)胞的分化與生成。Her-2 的過表達(dá)具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)血管淋巴管新生、增強(qiáng)腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的作用，其發(fā)生突變或高表達(dá)可促使腫瘤細(xì)胞生長增殖和腫瘤發(fā)生，并能介導(dǎo)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。相關(guān)研究證實(shí)Her-2 在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，如乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、胰腺癌、肺癌、食管的腺癌和鱗狀細(xì)胞癌等[17]，而其在卵巢癌中高表達(dá)率為9%～52%。國內(nèi)有學(xué)者研究顯示Her-2 蛋白陽性表達(dá)在上皮性卵巢癌中為43.33%，明顯高于上皮性卵巢腫瘤（15.56%）及正常卵巢（6.67%），表明Her-2表達(dá)與卵巢癌患者生存率之間存在明顯負(fù)相關(guān)[17]。Her-2在漿液性卵巢癌中的陽性表達(dá)率為29%，高于其他類型比如透明細(xì)胞癌（231%）和子宮內(nèi)膜癌（20%）等，表明組織學(xué)類型不同，Her-2 的表達(dá)陽性比例也有不同[18]。這種Her-2 在患者的組織分級(jí)中的差異性表達(dá)，也與患者對(duì)化療藥物的反應(yīng)性及生存率有關(guān)。Her-2 在卵巢癌不同分期中表達(dá)不盡相同。目前傾向于將Her-2 表達(dá)作為晚期卵巢癌的重要預(yù)后因子。所以Her-2 的高表達(dá)可能是卵巢癌不良預(yù)后的重要因素。Yan Wang等針對(duì)卵巢癌患者的meta分析結(jié)果顯示，Her-2可能與卵巢癌患者不良預(yù)后相關(guān)[19]。但是也有小樣本研究顯示晚期卵巢癌組織中Her-2 陽性表達(dá)降低[20]。本研究中高級(jí)別卵巢漿液性癌組中，Her-2 蛋白陽性表達(dá)率為31.2%，明顯高于卵巢低級(jí)別漿液性癌組（P＜0.001）、卵巢交界性漿液性腫瘤組（P＜0.001）、卵巢漿液性囊腺瘤組（P＜0.001），與上述研究結(jié)果相符，Her-2 在卵巢高級(jí)別漿液性癌中的表達(dá)較高，與此種類型卵巢癌的不良預(yù)后有關(guān)。同時(shí)FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期的卵巢高級(jí)別漿液性癌中Her-2蛋白的陽性表達(dá)率為11.4%，顯著低于Ⅲ～Ⅳ期的31%。在本研究的170例高級(jí)別卵巢漿液性癌組中，有淋巴轉(zhuǎn)移組Her-2蛋白表達(dá)陽性率為40.9%，顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組的20.1%，表明Her-2蛋白表達(dá)與病理分級(jí)、臨床分期及有無淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Her-2 在臨床應(yīng)用上已作為評(píng)價(jià)乳腺癌預(yù)后的關(guān)鍵因子，指導(dǎo)乳腺癌的臨床治療。也已有相關(guān)臨床研究顯示上皮性卵巢癌患者中Her-2的高表達(dá)與臨床預(yù)后呈明顯負(fù)相關(guān)。

本研究結(jié)果表明，EGFR、Her-2蛋白的表達(dá)與卵巢腫瘤的病理類型、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移均有關(guān)（除外高級(jí)別卵巢漿液性癌和低級(jí)別卵巢漿液性癌兩組病理分組之間差異不明顯，二者表達(dá)皆與年齡無關(guān)（P＞0.05）。EGFR、Her-2在卵巢惡性腫瘤組織尤其是高級(jí)別卵巢漿液性癌中較良性腫瘤明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且二者存在相關(guān)性，提示上述標(biāo)志物可聯(lián)合用于卵巢癌高級(jí)別與其他類型的漿液性腫瘤的診斷和臨床預(yù)后評(píng)價(jià)。卵巢高級(jí)別漿液性癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移涉及多基因、多種環(huán)境因素相互作用，特別是對(duì)于晚期患者，聯(lián)合診斷EGFR、Her-2能為進(jìn)一步提高其診斷、指導(dǎo)靶向藥物治療和預(yù)后評(píng)估提供一定的參考依據(jù)。