交聯(lián)聚維酮與黃芩苷配比對(duì)黃芩苷含量測(cè)定的影響

曾文雪

江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004

交聯(lián)聚維酮（polyvininyl polypyrrodidone，PVPP）是由N-乙烯基2-吡咯烷酮經(jīng)過交聯(lián)反應(yīng)得到的高分子水不溶性聚合物，為白色或近白色的粉末，無臭無味，流動(dòng)性好，在水和各種溶劑中均不溶，也不溶解于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中，但遇水能迅速溶脹，體積增加150%至200%。它具有高度的毛細(xì)管活性和水合能力及相對(duì)較大的比表面積，可迅速地將大量水分吸收到片劑中，一旦片劑內(nèi)部的膨脹壓力超過藥片本身的強(qiáng)度，藥片瞬時(shí)崩解［1］。在藥物制劑上以其崩解時(shí)間短、藥物溶出快的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)得到廣泛應(yīng)用，交聯(lián)聚維酮被稱為片劑中的“超級(jí)崩解劑”之一［2］。

黃芩苷為唇形科植物黃芩（Suutellaria baicalensisGeorgi）的干燥根經(jīng)提取獲得的一種黃酮類化合物，結(jié)構(gòu)上具有多元羥基?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化等作用［3-6］,對(duì)心血管和腦損傷具有保護(hù)作用［7］，還具有抗內(nèi)毒素和調(diào)節(jié)免疫的作用［8］。

PVPP 除具有較好的崩解作用外，還具有與聚乙烯吡咯烷酮相同的絡(luò)合吸附能力，能親水化各種不溶性藥物，穩(wěn)定化各種懸浮劑，能夠絡(luò)合多種物質(zhì)，比如多酚類化合物、碘等多種物質(zhì)［1］。在前期研究中發(fā)現(xiàn)，PVPP 對(duì)中藥丹參中丹酚酸B 進(jìn)行測(cè)定時(shí)，對(duì)其測(cè)定有一定的影響［9］。本文選擇黃芩苷作為研究對(duì)象，探索PVPP 對(duì)其含量的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KQ-250 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；AL104 分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；Agilent-1100 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司，DAD 檢測(cè)器）；DHG-92438-Ⅲ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器（常州隆和儀器制造有限公司）。

1.2 試藥

黃芩苷提取物（購(gòu)于安徽亳州青源中藥材站）；黃芩苷對(duì)照品（中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，供含量測(cè)定用，批號(hào)：111483－202003201506）；交聯(lián)聚維酮（德國(guó)巴斯夫公司）；色譜純甲醇（上海振興化工一廠）；分析純磷酸（廣東光華化學(xué)廠有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 黃芩苷對(duì)照品溶液的制備

取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，即得。

2.2 黃芩提取物溶液制備

稱取0.05 g 黃芩提取物，精密稱定，加入至500 mL 容量瓶中，加入水適量，置于微波超聲儀中超聲20 min，取出，放冷，加水至刻度，即得黃芩提取物溶液，備用。

2.3 黃芩苷溶液與PVPP 吸附樣品制備

稱取0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 g PVPP分別置于8 個(gè)錐形瓶中，各加入20 mL 上述制備的黃芩提取物溶液，進(jìn)行振蕩吸附24 h 后，吸取上清液，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 不同時(shí)間PVPP 與黃芩苷吸附樣品制備

稱取10 g PVPP，加入上述黃芩苷溶液50 mL，分別于5、10、20、40、60、90 min 取樣，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.5 PVPP 與黃芩苷靜態(tài)吸附與解吸附

稱取PVPP 10.0 g，置于錐形瓶中，加入150 mL上述黃芩苷溶液，放入振蕩器中振蕩6 h（37 ℃），充分吸附后取出，抽濾，濾渣PVPP 干燥備用，濾液供含量測(cè)定用。

將抽濾后的PVPP 稱取5 份，每份2.0 g，分別加入至錐形瓶，加入10%、30%、50%、70%、95%的乙醇各50 mL，放入振蕩器中振蕩6 h，進(jìn)行解吸附后取出，靜置15 min，吸取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.6 黃芩苷與PVPP 制劑配比對(duì)黃芩苷吸附的影響

稱取黃芩苷提取物2.4 g，按照表1 稱樣量進(jìn)行混合物的制備［10］：用研缽將混合物研勻，分別稱取五份混合物各0.1 g，放入1 000 mL 的容量瓶中，加入適量水超聲20 min 使溶解，放冷，加水至刻度，搖勻。吸取上清液，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得樣品溶液。

表1 黃芩苷與PVPP配伍樣品制備

2.7 黃芩苷與PVPP 混合物在不同介質(zhì)中的吸附

稱取黃芩苷提取物與PVPP 混合物0.1 g，各三份，分別加入200 mL 的人工胃液、人工腸液、水等進(jìn)行超聲處理20 min，使其溶解，放入振蕩器中振蕩6 h，取出，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得樣品溶液。

2.8 黃芩苷含量測(cè)定方法的建立

2.8.1 色譜條件 Agilent 1100，VWD 檢測(cè)器；色譜柱：大連伊利特ODS2 C18 柱；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；流動(dòng)相：甲醇-水-0.1%磷酸（47∶53∶0.1）；流速：

1.0 mL/mim；柱溫：室溫。

2.8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取“2.1”項(xiàng)配制的黃芩苷對(duì)照品，依次進(jìn)樣1、2、5、10、20、30 μL，按照上述液相測(cè)定方法測(cè)定含量，記錄黃芩苷的峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=156.75X+6.350 2，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明黃芩苷在1～30 μg 線性關(guān)系良好。

2.8.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積，計(jì)算黃芩苷峰面積的RSD 為0.38%，表明該方法精密度良好。

2.8.4 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取一定量的同一提取物六份，精密稱定，按照樣品制備的方法項(xiàng)下進(jìn)行制備，依次進(jìn)樣，按照上述色譜條件下測(cè)定峰面積，RSD 值為0.40%。

2.8.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于制備后的0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，按照上述測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，以黃芩苷的峰面積計(jì)算，測(cè)得結(jié)果RSD值為0.87%（n=6），表明樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8.6 加樣回收試驗(yàn) 取同一批已測(cè)定含量的“2.2”項(xiàng)提取物溶液10 mL 共9 份，分成三組，精密測(cè)定，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液，照供試品溶液的制備方法進(jìn)行樣品制備，測(cè)定樣品中黃芩苷的含量，計(jì)算黃芩苷的平均回收率為99.53%，RSD為0.74%。見表2。

表2 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

2.9.1 黃芩提取物黃芩苷的含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液以及供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量，即得。結(jié)果顯示黃芩提取物中黃芩苷的含量為86.83%，對(duì)照品及樣品圖譜見圖1。

2.9.2 不同量PVPP 對(duì)黃芩苷的吸附 精密吸取“2.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按照“2.8.1”液相條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。結(jié)果可知，隨著PVPP 加入量的增加，黃芩苷的含量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，最大下降超80%。其中加入量在0.1 g～1.2 g 區(qū)間時(shí)，下降的幅度顯著，斜率較大，在1.2 g～2.5 g 的區(qū)間內(nèi)，下降趨緩。

表3 不同量PVPP對(duì)黃芩苷吸附結(jié)果

2.9.3 不同時(shí)間PVPP 對(duì)黃芩苷吸附的影響 精密吸取“2.4”項(xiàng)下制備的供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按照“2.8.1”液相條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖2。結(jié)果可知，PVPP 與黃芩苷的吸附較為快速，5 min 內(nèi)即吸附達(dá)到最大，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，吸附量增加緩慢。

圖2 黃芩苷吸附量隨時(shí)間的變化

2.9.4 不同乙醇濃度對(duì)黃芩苷與PVPP 吸附的解析 精密吸取“2.5”項(xiàng)下制備的供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按照“2.8.1”液相條件進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算解析率，見表4。結(jié)果可知，PVPP 與黃芩苷吸附后在30%～70%乙醇濃度下解析率較高，70%乙醇解析達(dá)到84.64%，濃度偏高或偏低都不利于其解析。

表4 PVPP 與黃芩苷吸附后在不同濃度乙醇下解析率

2.9.5 黃芩提取物及混合物在不同介質(zhì)中的吸附 將黃芩提取物以及與PVPP 配伍后在水溶液、人工胃液、人工腸液中按照上述液相測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果可知，黃芩苷與PVPP 吸附后在人工胃液中，吸附更顯著，檢測(cè)出的黃芩苷量最少，而在人工腸液中，含量有所增加，可能產(chǎn)生了解離。見表5。

表5 不同介質(zhì)下PVPP對(duì)黃芩苷的吸附結(jié)果

2.9.6 PVPP 與黃芩苷制劑配比含量測(cè)定 將制備的5%、10%、12%、15%、20%的樣品溶液按照上述測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果可知，PVPP 對(duì)黃芩苷具有吸附作用，隨著PVPP 在制劑中用量的增加，可檢測(cè)出的黃芩苷含量呈現(xiàn)逐漸下降，當(dāng)用量達(dá)到20%時(shí)，下降比例可達(dá)到50%以上。見表6。

表6 制劑配比下PVPP對(duì)黃芩苷的吸附結(jié)果

3 討論

中藥成分復(fù)雜，在制劑制備的過程中需要加入各種輔料，輔料對(duì)制劑的制備成型及藥效發(fā)揮起到了關(guān)鍵的作用。藥用輔料應(yīng)是一種生理惰性物質(zhì)，既不影響藥物的藥效，也不對(duì)人體產(chǎn)生毒副作用，但往往忽視了其對(duì)藥品質(zhì)量控制的影響。交聯(lián)聚維酮是由N-乙烯基2-吡咯烷酮經(jīng)過交聯(lián)反應(yīng)得到的高分子水不溶性聚合物，為一種惰性輔料，但其結(jié)構(gòu)中具有內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)，可能與含有羥基（-OH）的物質(zhì)形成吸附，在釀酒行業(yè)以及茶飲料上被廣泛用作為澄清劑。

黃芩苷母體為黃酮類結(jié)構(gòu)，其分子結(jié)構(gòu)具有兩個(gè)鄰位酚羥基（Ar-OH）和一個(gè)葡萄糖酸的羧基（-COOH），可與PVPP 的內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)上的羰基形成氫鍵而被絡(luò)合吸附，降低黃芩苷的含量。在人工胃液、人工腸液、水溶液中，可檢測(cè)出的黃芩苷含量下降順序?yàn)槿斯の敢海舅芤海救斯つc液。其原因可能是黃芩苷在人工胃液呈分子狀態(tài)，有利于與PVPP 氫鍵的形成，含量降低較多；而在人工腸液中黃芩苷則呈離子狀態(tài)，不利于氫鍵的形成，含量變化不明顯。

黃芩苷與PVPP 具有吸附作用，隨著PVPP 量的增加，黃芩苷含量隨之降低，當(dāng)制劑中用量達(dá)到20%，含量可下降50%。在制劑的生產(chǎn)過程中應(yīng)注意PVPP 對(duì)黃芩苷成分的影響，尤其在選擇指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，需要充分考慮其影響。當(dāng)然，含量的下降對(duì)藥效是否會(huì)產(chǎn)生影響，需要后續(xù)進(jìn)一步深入研究。