應(yīng)用UPLC-QTOF-MS 分析滇烏頭堿中毒大鼠尿液非靶向代謝組學(xué)

周惠黠，劉歡，韓雪，聶勝潔，張榮平，于建云，李樹華

1.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心，云南 昆明 650500；3.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，云南 昆明 650500；4.云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，云南 昆明650500

黃草烏（Aconitum vilmorinianum Komarov）為毛茛科烏頭屬植物，云南特色中草藥，有鎮(zhèn)痛、抗感染等藥理活性，具有較高的醫(yī)學(xué)藥用價(jià)值[1]。但黃草烏毒性強(qiáng)、安全窗口小，因加工不當(dāng)或過量使用引起中毒或死亡?。ò福├喟l(fā)，限制了黃草烏及其制劑的開發(fā)利用。黃草烏中化學(xué)成分復(fù)雜，滇烏頭堿（Yunaconitine）是其主要毒性或活性成分之一，為二萜類雙酯型生物堿。目前對黃草烏及滇烏頭堿的研究，主要集中于黃草烏中生物堿成分的分離及其含量測定[2]、毒性試驗(yàn)研究[3-4]等。

現(xiàn)代毒理學(xué)研究結(jié)果[5-6]表明，藥物的藥效和毒性與其代謝過程及影響的體內(nèi)代謝通路密切相關(guān)。代謝組學(xué)（metabolomics）通過定量檢測內(nèi)源性小分子代謝物的變化，客觀反映藥物或毒物擾動(dòng)所引起的整體代謝變化，作為一種毒性評價(jià)手段，代謝組學(xué)在中草藥毒性機(jī)制、整體療效和安全性評價(jià)等研究中被廣泛應(yīng)用。DONG等[7]通過超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜（ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight high definition mass spectrometry，UPLC-Q-TOF/HDMS）對川烏中毒大鼠尿液進(jìn)行代謝組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)17 種差異代謝物的變化與川烏的心臟和肝毒性有關(guān)。川烏與黃草烏同屬毛茛科烏頭屬，但川烏為北草烏，其主要毒性成分為烏頭堿等生物堿，而黃草烏中的主要毒性成分為滇烏頭堿等生物堿，烏頭堿與滇烏頭堿的毒性存在差異[8]。盧發(fā)煥等[4]采用稀鹽酸溶劑溶解滇烏頭堿，成功建立滇烏頭堿大鼠急性中毒模型，結(jié)合云南多見的食用油脂性食物燉煮黃草烏中毒案例[9]，本研究擬通過超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry，UPLC-QTOF-MS）非靶向代謝組學(xué)技術(shù)對不同溶劑中滇烏頭堿中毒的代謝變化進(jìn)行研究，通過分析毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物的變化和病理形態(tài)學(xué)改變來探討滇烏頭堿中毒的可能毒性機(jī)制，豐富黃草烏中毒的法醫(yī)毒理學(xué)研究數(shù)據(jù)，為法醫(yī)學(xué)鑒定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

1290 Infinity Ⅱ液相色譜系統(tǒng)（美國Agilent 公司），Triple TOF 6600 高分辨質(zhì)譜（美國AB SCIEX 公司），Waters ACQUITY UPLC BEH Amide 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm；美國Waters 公司），Heraeus Fresco 17 微量離心機(jī)（美國Thermo Fisher Scientific公司），BSA124S-CW 天平（德國Sartorius 公司）。

滇烏頭堿（純度為98.89%，成都曼斯特生物科技有限公司），L-2-氯苯丙氨酸（純度≥98%，上海恒柏生物科技有限公司），甲醇、乙腈、乙酸銨、氨水（色譜純，德國CNW Technologies公司），鹽酸（分析純，重慶川東化工有限公司），橄欖油（福建福滿佳食品有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年健康雄性SD 大鼠16 只（湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），體質(zhì)量（270±20）g，于安靜環(huán)境晝夜交替各12 h、溫度22 ℃～23 ℃、濕度50%～60%的環(huán)境飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。

本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)昆明醫(yī)科大學(xué)倫理委員會審查批準(zhǔn)（審批號kmmu2021005）。

1.3 動(dòng)物分組及藥液配制

動(dòng)物分組：滇烏頭堿+橄欖油組、滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組，每組各5 只大鼠，橄欖油組、稀鹽酸溶液組，每組各3 只大鼠。

給藥劑量的設(shè)置：據(jù)文獻(xiàn)[1，10]報(bào)道，小鼠滇烏頭堿半數(shù)致死量（lethal dose 50，LD50）為2.81 mg/kg（溶劑為1%羧甲基纖維素鈉），經(jīng)體表面積換算和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)得出大鼠滇烏頭堿LD50為2.2 mg/kg（溶劑為稀鹽酸溶液），通過設(shè)置1、1/2、1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/10 LD50劑量灌胃給藥，獲得能保證大鼠可以連續(xù)給藥40 d 以上、又能表現(xiàn)出病理損傷改變的給藥劑量為1/8 LD50（0.27 mg/kg）。

滇烏頭堿+橄欖油組灌胃藥液：準(zhǔn)確稱取1.21 mg滇烏頭堿于具塞試管中，加入16 mL 橄欖油振蕩混勻得到。滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組灌胃藥液：準(zhǔn)確稱取1.21 mg 滇烏頭堿于具塞試管中，加入300 μL 稀鹽酸（0.1 mol/L）溶解后，加入300 μL NaOH（0.1 mol/L），將pH 值調(diào)至7，再加入15.4 mL 蒸餾水振蕩混勻得到。稀鹽酸溶液組灌胃藥液：取300 μL 稀鹽酸（0.1 mol/L）于具塞試管中，加入300 μL NaOH（0.1 mol/L），將pH值調(diào)至7，再加入15.4 mL 蒸餾水振蕩混勻得到。橄欖油組灌胃藥液：橄欖油原液，不做其他處理。

1.4 動(dòng)物染毒與樣品采集

尿液采集：4 組大鼠連續(xù)40 d 于每日15：00 灌胃給藥或溶劑，給藥滇烏頭堿后大鼠出現(xiàn)惡心、嘔逆、心率加快、精神萎靡、步態(tài)不穩(wěn)等癥狀。實(shí)驗(yàn)第39 天先將大鼠禁食12 h，自由飲水，給藥后將大鼠置于代謝籠中，收集各組大鼠24 h 尿液樣本于尿液采集管中，-80 ℃保存。

1.5 組織病理學(xué)檢驗(yàn)

尿液采集完成后，腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，經(jīng)升主動(dòng)脈灌注冰生理鹽水、4%多聚甲醛溶液灌注固定后，提取大鼠心、肝、腦組織，再于4%多聚甲醛溶液中固定48 h，制作石蠟切片。

對前述固定后的4 組大鼠心、肝、腦組織進(jìn)行取材，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、切片等處理后制成石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色和腦組織的Nissl 染色。

1.6 UPLC-QTOF-MS 分析

1.6.1 樣品處理

取尿液樣品100 μL，加入400 μL 提取溶劑（V甲醇∶V乙腈=1∶1），經(jīng)振蕩、13 800×g離心15 min、濾膜過濾后，取75 μL 上清液進(jìn)行UPLC-QTOF-MS 檢測；所有樣品另取10 μL 制成3 個(gè)質(zhì)控（quality control，QC）樣品，在相同條件下進(jìn)行UPLC-QTOF-MS 檢測。

1.6.2 UPLC-QTOF-MS 分析條件

液相色譜條件：柱溫25 ℃，流動(dòng)相A 為水相（含25 mmol/L 乙酸銨與25 mmol/L 氨水），流動(dòng)相B 為乙腈，采用梯度洗脫程序（0～0.5 min，95%B；0.5～7 min，95%～65%B；7～8 min，65%～40%B；8～9 min，40%B；9～9.1 min，40%～95%B；9.1～12 min，95%B），流速為0.5 mL/min。

質(zhì)譜條件：電噴霧電離（electrospray ionization，ESI），采用正、負(fù)離子模式（ESI+、ESI-）掃描，霧化氣壓60 psi，輔助氣壓30 psi，氣簾氣壓35 psi，溫度600 ℃，去簇電壓60 V，噴霧電壓5 000 V（正離子）/-4 000 V（負(fù)離子）；碰撞誘導(dǎo)解離的能量為30 eV，循環(huán)時(shí)間為0.56 s。通過信息依賴性采集（information-dependent acquisition，IDA）模式進(jìn)行高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，Analyst TF 1.7 數(shù)據(jù)采集軟件（美國AB SCIEX 公司）依據(jù)一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)和預(yù)先設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，自動(dòng)選擇離子并采集其二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)。每個(gè)循環(huán)選取12 個(gè)峰強(qiáng)度最強(qiáng)且大于100 的離子進(jìn)行二級質(zhì)譜掃描。

1.7 數(shù)據(jù)處理

1.7.1 峰物質(zhì)鑒定

使 用ProteoWizard V3 軟 件（http://proteowizard.sourceforge.net/）將質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)成mzXML 格式。再使用XCMS 3.6.2 對實(shí)驗(yàn)樣品和3 個(gè)質(zhì)控樣品的二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行保留時(shí)間矯正、峰識別、峰提取和過濾、缺失值進(jìn)行模擬、內(nèi)標(biāo)歸一化處理后，使用R 軟件包和二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫對峰進(jìn)行物質(zhì)鑒定。

1.7.2 數(shù)據(jù)分析

對數(shù)據(jù)進(jìn)行一系列的多元變量模式識別分析，使用SIMCA 15.0.2 軟件（瑞典Sartorius Stedim Data Analytics AB 公司）將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal projections to latent structures-discriminant analysis，OPLS-DA）和t檢驗(yàn)，通過組間比較找到橄欖油組與滇烏頭堿+橄欖油組、稀鹽酸溶液組與滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組的差異代謝物，獲得直觀反映滇烏頭堿給藥組與對應(yīng)溶劑對照組組間代謝物差異的火山圖。設(shè)定篩選標(biāo)準(zhǔn)為OPLSDA 模型的第一主成分的變量投影重要度（variable importance in the projection，VIP）大于1、變化倍數(shù)（fold change，F(xiàn)C）大于3或小于0.33、P＜0.05。

比較2 種不同溶劑滇烏頭堿給藥組與其對應(yīng)溶劑組所得的共同差異代謝物，使用SPSS 17.0 軟件（美國IBM 公司）進(jìn)行t檢驗(yàn)，比較共同差異代謝物變化倍數(shù)的差異，將符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的差異代謝物作為與滇烏頭堿毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物，將其信息通過HMDB（https://hmdb.ca/about）、PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、KEGG（https://www.kegg.jp/）等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，確定潛在生物學(xué)標(biāo)志物的結(jié)構(gòu)。

通過MetaboAnalyst（https://www.metaboanalyst.ca/）網(wǎng)站進(jìn)行代謝通路的拓?fù)浞治龊透患治觯@得通路分析氣泡圖，篩選出差異顯著的關(guān)鍵代謝通路。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)檢驗(yàn)

組織病理學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果（圖1～3）顯示，與橄欖油組相比，滇烏頭堿+橄欖油組大鼠的肝竇擴(kuò)張，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多量散在的小空泡樣變性；與稀鹽酸溶液組相比，滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組大鼠肝小葉中央靜脈周圍中央帶出現(xiàn)肝索連續(xù)性中斷、肝索紊亂，肝小葉結(jié)構(gòu)不清等；滇烏頭堿+橄欖油組與滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組大鼠的心臟組織出現(xiàn)局部少量心肌細(xì)胞均質(zhì)嗜酸樣變性，大腦皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元出現(xiàn)少部分神經(jīng)元固縮變性。

圖1 各組大鼠肝組織病理學(xué)檢驗(yàn)（HE×400）Fig.1 Histopathological examination of rats hepatic tissue in each group（HE×400）

圖2 各組大鼠心肌組織病理學(xué)檢驗(yàn)（HE×400）Fig.2 Histopathological examination of rats myocardium in each group（HE×400）

圖3 各組大鼠腦組織病理學(xué)檢驗(yàn)（Nissl×400）Fig.3 Histopathological examination of rats brain tissue in each group（Nissl×400）

2.2 代謝組學(xué)研究

PCA 顯示，滇烏頭堿+橄欖油組和橄欖油組、滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組和稀鹽酸溶液組的樣本代謝輪廓分離，而滇烏頭堿+橄欖油組、滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組的代謝輪廓有差異，但存在部分重疊交叉（圖4）。

圖4 全部樣本的PCA 得分散點(diǎn)圖Fig.4 PCA score scatter plot of total samples

OPLS-DA 分析結(jié)果顯示，滇烏頭堿+橄欖油組、滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組與橄欖油組、稀鹽酸溶液組樣品區(qū)分非常顯著；OPLS-DA 置換檢驗(yàn)結(jié)果顯示，模型R2Y 值接近于1，Q2的回歸線與縱軸的截距小于零，說明所建模型有良好的穩(wěn)定性，不存在過擬合現(xiàn)象。

差異代謝物篩選結(jié)果顯示，滇烏頭堿+橄欖油組和橄欖油組、滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組和稀鹽酸溶液組的代謝物差異明顯，且兩種不同溶劑滇烏頭堿藥物組的代謝物也存在差別（圖5～6）。

圖5 橄欖油組和滇烏頭堿+橄欖油組的火山圖Fig.5 Volcano plot for olive oil group against Yunaconitine plus olive oil group

圖6 稀鹽酸溶液組和滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組的火山圖Fig.6 Volcano plot for dilute hydrochloric acid solution group against Yunaconitine plus dilute hydrochloric acid solution

在兩組不同溶劑滇烏頭堿組與其對應(yīng)溶劑組對比所得的共同差異代謝物中，最終篩選出16種與滇烏頭堿毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物（表1）。16 種代謝物中，甲基丙二酸與尿囊素在滇烏頭堿+橄欖油組與橄欖油組對比所得的FC較滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組與稀鹽酸溶液組對比的FC低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 滇烏頭堿中毒相關(guān)潛在生物學(xué)標(biāo)志物信息Tab.1 Information on potential biomarkers related to intoxication of Yunaconitine

通過差異代謝物篩選出的代謝通路中，有6 條可能與滇烏頭堿毒性作用相關(guān)的潛在代謝通路（圖7）：（1）纈氨酸、亮氨酸與異亮氨酸的生物合成；（2）纈氨酸、亮氨酸與異亮氨酸的降解；（3）戊糖和葡萄糖醛酸的相互轉(zhuǎn)化；（4）丙酸代謝；（5）丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝；（6）酪氨酸代謝。

圖7 代謝通路分析（氣泡圖）Fig.7 Metabolic pathway analysis（bubble chart）

3 討論

本研究采用UPLC-QTOF-MS 技術(shù)研究滇烏頭堿中毒大鼠尿液中代謝組學(xué)譜的特征，結(jié)合組織病理學(xué)檢驗(yàn)所見，探索內(nèi)源性代謝物與生物體病理生理之間的關(guān)系，以此探討滇烏頭堿中毒的可能機(jī)制，發(fā)現(xiàn)16種與滇烏頭堿毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸是支鏈氨基酸（branched chain amino acid，BCAA），可由蘇氨酸或丙酮酸經(jīng)若干酶促反應(yīng)合成，羥基異己二酸、甲基丙二酸是BCAA 的代謝產(chǎn)物，BCAA 可為神經(jīng)遞質(zhì)的合成提供氮，有研究[11]報(bào)道，高濃度的支鏈氨基酸會誘導(dǎo)大腦皮層神經(jīng)元的興奮性毒性，本研究結(jié)果與此相符。腺苷琥珀酸可由其前體L-天冬氨酸合成而來，據(jù)報(bào)道[12]，腺苷琥珀酸酶缺乏會導(dǎo)致體內(nèi)腺苷琥珀酸堆積，并與神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)。N-乙酰基-D-苯丙氨酸是苯丙氨酸的衍生物，苯丙氨酸可由羥化酶生成酪氨酸，進(jìn)一步生成多巴胺。3-甲氧基酪胺是多巴胺的代謝產(chǎn)物，多巴胺作為一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，在腦內(nèi)主要參與調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)、精神情緒活動(dòng)、神經(jīng)內(nèi)分泌功能等，其水平異常與帕金森病、雙相情感障礙、抑郁癥等疾病密切相關(guān)[13]。本研究中，滇烏頭堿中毒大鼠尿液L-異亮氨酸、羥基異己二酸、甲基丙二酸、腺苷琥珀酸、N-乙酰基-D-苯丙氨酸、3-甲氧基酪胺含量增加，表明滇烏頭堿誘導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)毒性，可能與纈氨酸、亮氨酸與異亮氨酸的生物合成與降解，丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸等氨基酸代謝通路紊亂有關(guān)。

D-木糖、2-C-甲基-D-赤蘚糖醇2，4-環(huán)二磷酸酯、6-磷酸-D-山梨醇均是葡萄糖的代謝產(chǎn)物，可通過磷酸戊糖、糖醛酸以及多元醇等途徑生成。磷酸戊糖途徑主要為核酸的合成提供磷酸核糖和產(chǎn)生還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，參與多種反應(yīng)，對維持肝、脂肪組織等生理功能發(fā)揮重要作用。糖醛酸途徑的主要作用是生成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，參與肝生物轉(zhuǎn)化的結(jié)合反應(yīng)。此外，葡萄糖代謝還可經(jīng)多元醇途徑生成木糖醇、山梨醇等，多元醇對肝、腦等組織具有重要生理作用[14]。大鼠在給藥滇烏頭堿后，尿液中D-木糖含量增加，2-C-甲基-D-赤蘚糖醇2，4-環(huán)二磷酸酯、6-磷酸-D-山梨醇含量降低，提示滇烏頭堿誘導(dǎo)的肝毒性可能與戊糖和葡萄糖醛酸的相互轉(zhuǎn)化失調(diào)、糖代謝異常有關(guān)。酵母氨酸是在肝經(jīng)賴氨酸分解代謝的中間體，是一種線粒體毒素，可通過破壞線粒體的穩(wěn)態(tài)損害發(fā)育[15]。常見支鏈氨基酸代謝障礙會導(dǎo)致丙酸、甲基丙二酸等有機(jī)酸的蓄積，導(dǎo)致有機(jī)酸血（尿）癥，有研究[16]報(bào)道丙酸可抑制肝細(xì)胞的氧化代謝。大鼠滇烏頭堿給藥后尿液酵母氨酸、丙酸含量升高，丙酸代謝紊亂，說明滇烏頭堿的肝毒性可能與其相關(guān)。

人體內(nèi)尿酸是嘌呤核苷酸分解代謝的終產(chǎn)物，而在大多數(shù)哺乳動(dòng)物體內(nèi)尿酸可進(jìn)一步被分解代謝為尿囊素排出體外，有研究[17]報(bào)道，外源性尿囊素可通過減輕糖尿病腎病大鼠的氧化應(yīng)激和炎癥，從而發(fā)揮對腎的保護(hù)作用。本研究中給藥滇烏頭堿的大鼠尿液中尿囊素含量升高，可能與體內(nèi)核酸大量分解致嘌呤代謝紊亂有關(guān)，推測滇烏頭堿可能產(chǎn)生腎毒性。N-乙?；?DL-甲硫氨酸是甲硫氨酸的衍生物，甲硫氨酸屬于含硫必需氨基酸，主要參與體內(nèi)甲基的轉(zhuǎn)移，有研究[18]表明甲硫氨酸水平與慢性心衰密切相關(guān)。本研究中給藥滇烏頭堿的大鼠尿液中N-乙酰基-DL-甲硫氨酸含量增高，提示滇烏頭堿的心臟毒性可能與其有關(guān)。

4-硝基喹啉-1-氧化物，是一種誘變劑，可誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生氧化應(yīng)激而致癌[19]。二氫硫辛酸酯具有抗氧化活性，有研究[20]顯示，二氫硫辛酸酯可通過減少體內(nèi)活性氧的積累而起到保護(hù)神經(jīng)元免受缺血性損傷的作用。硫酸吲哚酚，主要源于結(jié)腸微生物對色氨酸分解代謝產(chǎn)生的吲哚，在肝代謝為硫酸吲哚酚，通過腎小管清除隨尿排泄，是一種尿毒癥毒素，可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，參與慢性腎疾病、心血管疾病和骨骼疾病的進(jìn)展[21]。本研究中給藥滇烏頭堿的大鼠尿液中4-硝基喹啉-1-氧化物、二氫硫辛酸酯、硫酸吲哚酚含量增高，推測滇烏頭堿毒性作用可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。值得關(guān)注的是，本研究篩選出的16 種與滇烏頭堿毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物中，甲基丙二酸與尿囊素在滇烏頭堿+橄欖油組與橄欖油組對比所得的FC 較滇烏頭堿+稀鹽酸溶液組與稀鹽酸溶液組對比的FC 低，這與肝組織病理學(xué)表現(xiàn)相吻合，提示滇烏頭堿在橄欖油中以原藥存在，而在稀鹽酸溶液中以鹽的形式存在，后者水溶性強(qiáng)，更容易被生物體吸收和利用，致使其毒性增強(qiáng)。

綜上所述，本研究采用UPLC-QTOF-MS 技術(shù)研究了不同溶劑（橄欖油和稀鹽酸溶液）中的滇烏頭堿對大鼠尿液代謝組學(xué)譜的影響，結(jié)果表明，給藥滇烏頭堿的大鼠出現(xiàn)了明顯的代謝紊亂，代謝輪廓發(fā)生偏移，滇烏頭堿在不同溶劑中的代謝組學(xué)譜存在部分交叉重疊，從中篩選出的16 種與滇烏頭堿毒性相關(guān)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物，結(jié)合組織病理學(xué)改變，提示滇烏頭堿可能擾動(dòng)氨基酸和糖代謝紊亂，誘發(fā)氧化應(yīng)激引起神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、肝等毒性，其毒性作用機(jī)制可能與纈氨酸、亮氨酸與異亮氨酸的生物合成、降解，戊糖和葡萄糖醛酸的相互轉(zhuǎn)化，丙酸代謝，丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸代謝等代謝通路紊亂有關(guān)。但相較于滇烏堿+稀鹽酸溶液組，溶解于橄欖油中的滇烏頭堿的肝毒性和代謝擾動(dòng)的趨勢相對較小，本研究豐富了黃草烏的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對法醫(yī)學(xué)鑒定實(shí)踐具有指導(dǎo)作用。