結(jié)腸癌組織表達MMP- 9、MIG、細絲蛋白A及其與患者預(yù)后關(guān)系

李建軍，劉琪，郭震

（鄭州人民醫(yī)院 南院區(qū)普外科，河南 鄭州 450000）

結(jié)腸癌是世界范圍內(nèi)較為常見的消化系統(tǒng)癌癥，其發(fā)病率在美國局第三位。 在我國，2012年新發(fā)結(jié)腸癌病例約103170 例，是我國主要疾病負擔(dān)之一[1]。 結(jié)腸癌具有發(fā)病率高、治療效果差、預(yù)后差等特點,結(jié)腸癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的重要原因[2,3]。 研究證實，多種生物學(xué)過程和因子調(diào)節(jié)腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移,如基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMP）、遷移誘導(dǎo)蛋白（Migrationinducible protein，MIG）及細絲蛋白等[4,5]。 目前,MM P-9、MIG-7 及細絲蛋白A 對結(jié)腸癌進展的影響研究較少，本研究旨在觀察結(jié)腸癌組織中MMP-9、MIG-7 及細絲蛋白A 表達情況，并分析其與結(jié)腸癌病理因素及預(yù)后關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2017年1月30 日至2018年6月30 我院收治的80 例接受結(jié)腸癌根治術(shù)治療的患者，男42 例，女38 例，年齡40～78歲，平均54.9±5.9歲，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40 例，漿膜浸潤46 例，脈管浸潤36 例。 納入標(biāo)準(zhǔn)：可手術(shù)結(jié)腸癌；術(shù)后病理證實為結(jié)腸腺癌；第7 版UICC-ACJJ TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)為Ⅰ-Ⅲ期；病例資料完整；依從性可；術(shù)前全身檢查排除遠處轉(zhuǎn)移； 患者和家屬對研究內(nèi)容知情且簽署研究同意書。 排除非首次診斷為結(jié)腸癌或既往接受抗癌治療的結(jié)腸癌患者； 轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)結(jié)腸癌；合并腦部、心臟等基礎(chǔ)疾病可能影響預(yù)期生存；無法獲得隨訪；合并自身免疫性疾病、風(fēng)濕類疾病、感染性疾病、其他腫瘤、哺乳或妊娠、精神疾病者；合并其他消化道疾病，如消化性潰瘍、克羅恩病、結(jié)腸炎等。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化法 取術(shù)后切除結(jié)腸癌組織及癌旁5cm 正常組織作為檢測樣本，采用免疫組織化學(xué)法檢測MMP-9、MIG-7 和細絲蛋白A 表達情況。 兔抗人多克隆抗體MIG-7、MMP-9 及細絲蛋白A 均由北京博奧森生物科技有限公司提供。 將標(biāo)本使用甲醛固定，石蠟包埋，制作切片，并采用蘇木精-伊紅對標(biāo)本進行染色。 烤片后（80℃，共30min）采用乙醇脫水、 枸櫞酸緩沖液水化修復(fù)。 使用3%H2O2 將內(nèi)源性過氧化物酶去除，加入一抗MMP-9（1:100）、MIG-7（1:100）和細絲蛋白A（1:100）。 抗體4℃過夜，加入二抗，孵育30min 后顯色，采用蘇木精進行復(fù)染，PBS 代替一抗作為陰性對照。 病理切片由我院2 位資深病理科主任雙盲閱片。 著色面積： 鏡下棕黃色染色細胞占視野內(nèi)細胞總數(shù)比例≤5%為0 份、6%～25%為1 分、26%～50%為2分、51%～75%為3 分；＞75%為4 分； 染色強度：無著色為0 分、淺黃色為1 分；黃色為2 分；深黃色為3 分。 陽性定義為著色面積與染色強度乘積≥2分，其余為陰性。

1.2.2 隨訪方法 開始隨訪時間為手術(shù)時間，手術(shù)后每3 個月隨訪1 次觀察腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況，隨訪終點為復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移或死亡。 隨訪至2019年4月30 日。 采用門診、電話、查閱病例等方法隨訪。無病生存期（Disease free survival，DFS）指手術(shù)時間至結(jié)腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、疾病進展導(dǎo)致死亡的時間或末次隨訪時間。

1.3 統(tǒng)計分析 使用SPSS 23.0 對獲得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，癌組織及癌旁組織中MMP-9、MIG-7 和細絲蛋白A 表達情況采用配對χ2檢驗比較,MMP-9、MIG-7 和細絲蛋白A 表達情況與臨床病理因素相關(guān)性分析使用χ2檢驗或Fisher 精確概率法。 使用COX 比例模型分析DFS 影響因素。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織及癌旁組織MMP-9、MIG-7、細絲蛋白A 的表達情況 結(jié)腸癌組織MMP-9、MIG-7表達陽性率顯著高于癌旁組織，細絲蛋白A 表達陽性率顯著低于癌旁組織（P＜0.05）。 見表1。

表1 結(jié)腸癌組織及癌旁組織各指標(biāo)表達陽性率的比較[n（%）]

2.2 結(jié)腸癌組織表達MMP-9、MIG-7 和細絲蛋白A 與臨床病理因素的相關(guān)性分析 結(jié)腸癌組織表達MMP-9、MIG-7、細絲蛋白A 與患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、 脈管浸潤呈顯著相關(guān)性，與患者年齡、性別、腫瘤直徑、腫瘤分化程度無顯著相關(guān)性（P>0.05）。 見表2。

表2 臨床病理因素與MMP- 9、MIG- 7 和細絲蛋白A 表達相關(guān)性

2.3 DFS 影響因素分析 中位隨訪時間16.3 個月，復(fù)發(fā)14 例，轉(zhuǎn)移9 例，死亡3 例。 COX 單因素分析顯示，TNM 分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、MMP-9、MIG-7 和細絲蛋白A 與結(jié)腸癌DFS相關(guān)（P＜0.05）。將單因素分析有意義的指標(biāo)納入多因素分析，MMP-9、MIG-7、 細絲蛋白A、TNM 分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是DFS 獨立預(yù)后因素（P＜0.05）。 見表3、表4。

表3 DFS 影響因素的單因素分析

表4 DFS 影響因素的多因素分析

3 討論

腫瘤的轉(zhuǎn)移、 侵襲和進展涉及多種轉(zhuǎn)移介質(zhì)和多種生物學(xué)過程。 其中細胞外基質(zhì)降解是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要機制之一。 細胞外基質(zhì)降解可導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境改變、腫瘤細胞定性轉(zhuǎn)移。 MMPs 是胞外基質(zhì)降解的主要參與酶，MMPs 對細胞外基質(zhì)進行選擇性蛋白降解是腫瘤細胞遷移和侵襲的必要步驟[6]。 MMP-9 是明膠酶的重要成員,基因位于20q 11.2-q13.1。 大量研究證實，MMP-9 通過降解基底膜和細胞外基質(zhì)中膠原蛋白IV 促進腫瘤進展，包括侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等，參與多種人類惡性腫瘤的發(fā)展，如結(jié)腸癌、膀胱癌、骨髓瘤等[7-9]。 本研究證實MMP-9 在結(jié)腸癌組織中高表達，且高表達的MMP-9 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管侵犯有關(guān), 提示MMP-9 與結(jié)腸癌高侵襲性有關(guān)。 周昱等[10]研究證實,結(jié)腸癌患者中MMP-9 水平表達升高，且MMP-9 與TNM 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 與本研究結(jié)果相符。 體外實驗證實結(jié)腸癌細胞通過分泌MMP-9 促進細胞外基質(zhì)降解和腫瘤轉(zhuǎn)移[11]。 此外，本研究還證實高表達MMP-9 與結(jié)腸癌DFS 有關(guān)，是可靠的預(yù)后標(biāo)志物，與既往研究相符[8]。

MIG-7 是一種富含半胱氨酸的蛋白質(zhì),在調(diào)節(jié)腫瘤細胞浸潤和轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用，MIG-7在調(diào)節(jié)腫瘤生長中的功能主要為MIG-7 通過調(diào)節(jié)促有絲分裂和轉(zhuǎn)移信號通路促進腫瘤生長，此外還有研究證實，MIG-7 在腫瘤血管生成之前促進血管模擬，從而促進腫瘤早期生長和轉(zhuǎn)移[12]。 已有大量研究證實，MIG-7 在多種惡性腫瘤細胞質(zhì)和細胞膜中上調(diào)，如肺癌等，并具有轉(zhuǎn)移性癌早期標(biāo)志物的潛力[13]。 目前MIG-7 與結(jié)直腸癌相關(guān)的報道較少，本研究證實MIG-7 在結(jié)腸癌組織中高表達，且高表達與較高臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤有關(guān)，提示其可能參與結(jié)腸癌侵襲和淋巴轉(zhuǎn)移。 本研究還證實MIG-7 是有效的DFS 預(yù)后預(yù)測標(biāo)志物，其水平升高與較短DFS 相關(guān)。 李明玉等[14]研究證實結(jié)腸癌組織中MIG-7 上調(diào)，與本研究結(jié)果一致，且MIG-7 上調(diào)與結(jié)腸癌血管生態(tài)模擬呈正相關(guān)，證實MIG-7 通過促進結(jié)腸癌血管生態(tài)模擬促進腫瘤浸潤。

細絲蛋白A 是參與調(diào)節(jié)細胞增殖和遷移的非肌肉肌動蛋白結(jié)合蛋白，在腫瘤形成和發(fā)展中起重要作用，并參與整合細胞運動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。 體外研究證實細絲蛋白A 能夠阻斷MMP-9 表達信號通路，從而降低細胞侵襲力[15]。 本研究中，結(jié)腸癌組織中細絲蛋白A 表達水平降低，且細絲蛋白A 與較低臨床分期、 較低水平淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和脈管轉(zhuǎn)移率有關(guān)，證實細絲蛋白A 可抑制結(jié)腸癌侵襲。 預(yù)后分析顯示，細絲蛋白A 陽性患者具有更長的DFS，預(yù)后更好。 周昱等[10]研究顯示結(jié)腸癌組織中細絲蛋白A 表達下降，與本研究結(jié)果相符。

綜上所述，MMP-9、MIG-7 在結(jié)腸癌組織中高表達，細絲蛋白A 在結(jié)腸癌組織中低表達，且MMP-9、MIG-7 高表達和細絲蛋白A 低表達與結(jié)直腸癌較短DFS 相關(guān)。