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    1例血型嵌合體的血清學(xué)特點及測序分析*

    2022-01-05 10:40:28洪健嬌鄧剛賀云蕾寧波市中心血站獻(xiàn)血服務(wù)一科浙江寧波315010
    臨床檢驗雜志 2021年11期
    關(guān)鍵詞:嵌合體血型B型

    洪健嬌,鄧剛,賀云蕾(寧波市中心血站獻(xiàn)血服務(wù)一科,浙江寧波 315010)

    嵌合體指其細(xì)胞衍生自2個或多個受精卵的個體,遺傳學(xué)上指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現(xiàn)的個體,免疫學(xué)上則指一個機(jī)體有2種或2種以上染色體組成不同的細(xì)胞系彼此耐受不排斥的嵌合狀態(tài)。血型嵌合體是嵌合體的一種,又叫血型開米拉,即Twin Chimeras[1];多發(fā)生在異型輸血、異卵雙生或雙精受精以及異型骨髓移植后,其中異型輸血或異型骨髓移植后的血型嵌合屬于暫時性嵌合,而遺傳性嵌合屬于永久性嵌合(先天性嵌合)。血型嵌合體的存在往往帶來血型鑒定困難、輸血困難、親緣關(guān)系疑問等問題。在日常的輸血血型鑒定工作中,時常遇到混合凝集現(xiàn)象,即部分細(xì)胞形成小凝塊,部分細(xì)胞不凝集的狀態(tài)。形成混合紅細(xì)胞凝集原因分為內(nèi)源性和外源性因素,外源性因素通常包括血型不合輸血等,內(nèi)源性因素包括嵌合體、ABO亞型和造血干細(xì)胞移植后血型轉(zhuǎn)變期等。這些混合凝集給血型鑒定造成困難,給臨床安全有效輸血造成一定影響。我們在工作中發(fā)現(xiàn)1例ABO血型嵌合體,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1研究對象 患者,女,73歲,因腎腫物需要進(jìn)行手術(shù),術(shù)前血型鑒定發(fā)現(xiàn)正定型均呈混合凝集外觀。通過查閱患者病歷及經(jīng)醫(yī)生確認(rèn),該患者無輸血史,無移植史。查詢該患者其他血液指標(biāo)均無異常,排除血液病、感染等因素。

    1.2主要儀器與試劑 Labofuge 200小型臺式離心機(jī)(美國賽默飛公司),KA-2200洗滌離心機(jī)(日本久保田公司),凝膠卡離心機(jī)(美國伯樂公司),Veriti 96 Well Thermal Cycler PCR儀(美國Applied Biosystems公司);血型血清學(xué)試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限公司),全血DNA提取試劑盒(西安天隆科技有限公司)。

    1.3標(biāo)本采集與處理 用微柱凝膠法,對EDTA-K2抗凝血標(biāo)本進(jìn)行ABO血型鑒定以及不規(guī)則抗體篩查。

    1.4試管法血清學(xué)血型鑒定 正定型:用洗滌過3遍的紅細(xì)胞制作2%~4%的紅細(xì)胞懸液,分別與抗A、抗B試劑反應(yīng)。反定型:取患者血清2滴與標(biāo)準(zhǔn)A1型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞、O型紅細(xì)胞反應(yīng),加做抗人球蛋白試驗以及抗AB、抗H、抗A1試驗。用人源抗A血清通過凝集有A抗原的紅細(xì)胞和不凝集無A抗原的紅細(xì)胞,分離2群紅細(xì)胞。將不與抗A反應(yīng)的紅細(xì)胞重新檢測血型;同時用DTT處理與抗A發(fā)生凝集的紅細(xì)胞后,也重新檢測血型。同樣用人源抗B血清通過凝集有B抗原的紅細(xì)胞和不凝集無B抗原的紅細(xì)胞,分離2群紅細(xì)胞。將不與抗B反應(yīng)的紅細(xì)胞重新檢測血型;同時用DTT處理與抗B發(fā)生凝集的紅細(xì)胞后,也重新檢測血型。上述所用商品試劑均購自上海血液生物醫(yī)藥公司,人源多克隆抗A及抗B血清均為自制試劑,效價大于128。

    1.5ABO基因測序 用全血基因組DNA提取試劑盒抽提全血基因組DNA,按照參考文獻(xiàn)[2-3]中的引物及擴(kuò)增體系,對ABO基因7個外顯子及其鄰近內(nèi)含子區(qū)域分別擴(kuò)增后送測序公司(深圳華大基因科技公司)測序。擴(kuò)增反應(yīng)總體積25 μL,包括10×PCR緩沖液2.5 μL,基因組DNA標(biāo)本50~100 ng,Taq DNA聚合酶1 U(大連TaKaRa公司),dNTP和MgCl2終濃度分別為0.2 mmol/L和1.5 mmol/L,引物終濃度為0.5 μmol/L。

    2 結(jié)果

    2.1微柱凝膠法正、反定型 正定型呈混合凝集,抗A及抗B均上下分層;反定型為AB型,不規(guī)則抗體陰性(見圖1)。

    注:A,正、反定型結(jié)果;B,不規(guī)則抗體篩檢結(jié)果。圖1 微柱凝膠法血清學(xué)檢測結(jié)果

    2.2試管法血清學(xué)血型鑒定 正定型與抗A凝集4+mf(mf:混合凝集),與抗B凝集4+mf,抗A管及抗B管有明顯游離紅細(xì)胞。反定型為AB型,結(jié)果與微柱凝膠法一致。加做試驗結(jié)果如下:直抗陰性,與抗AB凝集4+,抗A1凝集4+mf,抗H凝集1+。用人源抗A通過凝集有A抗原的紅細(xì)胞和不凝集無A抗原的紅細(xì)胞,分離2群紅細(xì)胞并鑒定其血型。發(fā)現(xiàn)不與抗A反應(yīng)的那群紅細(xì)胞血型為B型;與抗A發(fā)生凝集的那群紅細(xì)胞血型為A型,即該雙群細(xì)胞,分別為A型和B型。用人源抗B通過凝集有B抗原的紅細(xì)胞和不凝集無B抗原的紅細(xì)胞,分離兩群紅細(xì)胞并鑒定其血型。發(fā)現(xiàn)不與抗B反應(yīng)的那群紅細(xì)胞血型為A型;與抗B發(fā)生凝集的那群紅細(xì)胞血型為B型,即該雙群細(xì)胞,分別為A型和B型,與人源抗A實驗結(jié)果一致。

    2.3測序結(jié)果 測序結(jié)果顯示,ABO基因存在c.261delG、c.297A>G、c.467C>T、c.526C>G、c.646T>A、c.657C>T、c.681G>A、c.703G>A、c.771C>T、c.796C>A、c.803G>C、c.829G>A、c.930G>A雜合突變(見圖2)。通過與國際輸血協(xié)會(ISBT)命名的ABO等位基因進(jìn)行比對,發(fā)現(xiàn)患者存在3條ABO等位基因,分別為ABO*O.01.02、ABO*A1.02和ABO*B.01(見表1)。

    注:A,ABO*B.01等位基因突變位點;B,ABO*O.01.02等位基因突變位點;C,ABO*A1.02等位基因突變位點。圖2 ABO基因測序結(jié)果

    表1 測序結(jié)果顯示存在3條ABO等位基因

    3 討論

    血型嵌合體通常在檢測中出現(xiàn)混合凝集外觀,即同時存在2種紅細(xì)胞群。目前國內(nèi)外均有先天性嵌合體血型的報道[4-6],但因其發(fā)生十分罕見,因此相關(guān)報道較少。血型嵌合體不僅表現(xiàn)在ABO血型,其他血型如P系統(tǒng)、Kidd系統(tǒng)以及Duffy系統(tǒng)中均可存在[7]。嵌合體現(xiàn)象常常會導(dǎo)致ABO血型遺傳不符合經(jīng)典遺傳規(guī)律,因為其體內(nèi)存在遺傳上不同類型細(xì)胞的混合。

    先天性嵌合體(又稱永久性嵌合體)的形成機(jī)制目前認(rèn)為主要分為兩類。一類是由于妊娠早期異卵雙生子之間存在血管的交叉吻合,造血干細(xì)胞經(jīng)由吻合的血管通路進(jìn)入對方體內(nèi),同時在獲得性免疫耐受的基礎(chǔ)上,植入的造血干細(xì)胞可在對方體內(nèi)長期增殖,導(dǎo)致由造血干細(xì)胞發(fā)育成熟的體內(nèi)全部細(xì)胞都是嵌合的[8]。另一類是在受精過程中,由2個卵細(xì)胞和2個精子相互結(jié)合而產(chǎn)生的四倍體,這一四倍體受精卵繼續(xù)進(jìn)行減數(shù)分裂,產(chǎn)生多種不同來源的細(xì)胞系[9-10]。由于本研究中的先證者被分娩時并非雙胎,無輸血史和干細(xì)胞移植史,因此推測更可能為第二類嵌合體。

    嵌合體血型應(yīng)引起重視,一方面嵌合體血型誤診能引起嚴(yán)重的輸血反應(yīng)[11],另一方面血型嵌合體免疫耐受的研究對基因干細(xì)胞移植和骨髓移植有著深遠(yuǎn)的影響。臨床上一些血液疾病、藥物使用、移植或者非同型血液的輸注也會導(dǎo)致混合凝集這一現(xiàn)象,因此在出現(xiàn)疑難血型時,首先需要向患者問清病史、輸血史、移植史、藥物使用情況等,在此基礎(chǔ)上可以進(jìn)行相關(guān)的實驗操作。本文中該A+B型嵌合體患者血樣與AB型獻(xiàn)血者血樣交叉配血時,在鹽水法、聚凝胺法、凝膠卡法中均無凝集無溶血,因此可輸注AB型紅細(xì)胞制品。

    目前輸血科的血型鑒定趨于自動化,但對儀器所報告的結(jié)果仍需要仔細(xì)查看,有疑問的血型需要結(jié)合試管法及相關(guān)試驗來驗證。

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