Bcl-2和C-myc在膽管癌中的表達及意義的研究＊

張大坤

膽管癌是臨床發(fā)生率較高的一種消化道腫瘤疾病，主要集中于50～70歲的中老年人群[1]。近年來隨著社會的發(fā)展和人口老年化的加快，我國膽管癌患病人數(shù)逐漸增多，嚴重危害生命健康。早期階段的膽管癌患者缺少典型癥狀，一般僅出現(xiàn)腹脹、無力、腹部隱痛、消瘦等表現(xiàn)[2]?，F(xiàn)階段臨床對于膽管癌的發(fā)病原理仍沒有準確定論，認為可能和原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡基因失衡等因素有關[3]。本文將對膽管癌患者中Bcl-2和C-myc表達情況進行分析，以此探討B(tài)cl-2和C-myc和膽管癌病理關系及在疾病發(fā)生、進展中的作用，為膽管癌的臨床診療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對象為筆者醫(yī)院普外科2018年4月-2020年4月收治的40例膽管癌患者。其中男17例，女23例；年齡48～67歲，平均（57.45±3.54）歲；臨床分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期17例，Ⅳ期7例；部位：上段膽管癌20例，中段膽管癌6例，下端膽管癌14例。將40例患者的癌旁組織（距離癌組織1 cm的肝管壁組織）標本作為對照組，將40例患者的膽管癌組織（組織學類型均為腺癌）標本作為試驗組。本次研究經(jīng)過筆者所在醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 方法

試驗中的試劑均購自美國MarKer生物公司，涵蓋鼠抗人C-myc單克隆抗體、Bcl-2單克隆抗體及S-P超敏試劑盒。所有標本經(jīng)過10%福爾馬林進行固定，并通過石蠟實施包埋，連續(xù)切片，厚度控制在4 μm。采用免疫組化方法測定Bcl-2和C-myc表達，嚴格按照配套試劑盒說明書操作流程嚴格執(zhí)行，由專業(yè)人員操作。

1.3 觀察指標及評價標準

Bcl-2陽性細胞標準：陽性部位在細胞膜；在顯微鏡觀察下統(tǒng)計5個視野陽性細胞百分度，根據(jù)平均數(shù)進行半定量計數(shù)。陽性標準為切片中陽性細胞率在10%及以上，陰性標準為陽性細胞率在10%以下。

C-myc陽性細胞標準：胞核或胞漿染成棕黃色。陽性標準為切片中陽性細胞率在10%及以上，陰性標準為陽性細胞率在10%以下。

1.4 統(tǒng)計學處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行分析和處理，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組Bcl-2和C-myc表達比較

試驗組C-myc、Bcl-2陽性表達率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組Bcl-2和C-myc表達比較 例（%）

2.2 不同分化程度膽管癌Bcl-2和C-myc表達比較

40例膽管癌標本均為腺癌，其中23例為高分化腺癌，13例為低分化腺癌，4例為黏液腺癌（腺癌組織學亞型）。高分化腺癌和黏液腺癌的C-myc陽性表達率均高于低分化腺癌，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而高分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌的Bcl-2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同分化程度膽管癌Bcl-2和C-myc表達比較 例（%）

2.3 不同組織學級別膽管癌Bcl-2和C-myc表達比較

40例膽管癌標本根據(jù)Bloom標準進行組織學分級，其中18例為Ⅰ級，13例為Ⅱ級，9例為Ⅲ級。Ⅰ級膽管癌組織C-myc陽性表達率高于Ⅱ、Ⅲ級，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級膽管癌組織Bcl-2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 不同組織學級別膽管癌Bcl-2和C-myc表達比較 例（%）

2.4 膽管癌有無轉(zhuǎn)移患者Bcl-2和C-myc表達比較

隨訪資料顯示，40例膽管癌患者中11例發(fā)生膽管外轉(zhuǎn)移，29例未發(fā)生轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移的患者C-myc陽性表達率明顯高于無轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而轉(zhuǎn)移的患者和無轉(zhuǎn)移的患者Bcl-2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 膽管癌有無轉(zhuǎn)移患者Bcl-2和C-myc表達比較 例（%）

3 討論

臨床研究人員通過對膽管癌基因和產(chǎn)物的表達情況進行分析發(fā)現(xiàn)，多種基因共同作用和變化是導致膽管癌發(fā)生的重要原因[4]。在腫瘤疾病中，通常會同時存在原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡基因失衡的情況[5]。C-myc屬于原癌基因的一種，可以加快細胞G0、G1期，一旦和其他活化基因結合并發(fā)揮協(xié)同作用時，會促使細胞轉(zhuǎn)化為惡性細胞[6]。Bcl-2屬于凋亡抑制基因的一種，自身含量大幅上升是導致腫瘤產(chǎn)生的主要原因[7]。Bcl-2存在于18號染色體，當出現(xiàn)移位轉(zhuǎn)移至4號染色體上時，會和免疫球蛋白重鏈基因串聯(lián)成為融合基因，繼而導致Bcl-2基因在B淋巴細胞中的水平大幅升高，引起B(yǎng)cl-2基因編碼的Bcl-2蛋白含量異常增高，抑制細胞的正常凋亡，使細胞大量生長，最終導致腫瘤的產(chǎn)生[8]。

P62核內(nèi)蛋白屬于C-myc癌基因編碼形成的產(chǎn)物之一，能夠促進細胞不間斷的生長，引起細胞轉(zhuǎn)化為惡性細胞[9]。膽管癌患者P62陽性表達率較高。王小玲等[10]學者報道指出，膽管癌患者P62陽性表達率最高可達95%，同時陽性率和染色強度與細胞分化情況之間存在密切聯(lián)系，高分化程度的膽管癌具有更高的陽性表達率和更強的染色強度，而低分化程度膽管癌的P62陽性表達率降低，染色強度下降。本次研究結果顯示，試驗組C-myc陽性表達率為87.50%。同時在高分化腺癌中陽性表達率為100%，而低分化腺癌陽性表達率為61.54%。并且Ⅰ級膽管癌組織C-myc陽性表達率高于Ⅱ、Ⅲ級，轉(zhuǎn)移得患者C-myc陽性表達率明顯高于無轉(zhuǎn)移的患者。李灼日等[11]研究中通過免疫組化法檢測了膽管癌、癌旁組織中C-myc、Bcl-2表達，結果顯示C-myc在膽管癌組織中的陽性表達率高于癌旁組織；在高、中分化腺癌中陽性表達率高于低分化腺癌；在Ⅰ級膽管癌組織的陽性表達率高于Ⅱ、Ⅲ級膽管癌，于本次研究結果一致。C-myc的表達情況和膽管癌細胞分化程度、組織學分級及腫瘤轉(zhuǎn)移等生物學特性之間存在密切聯(lián)系。

近年來凋亡在膽管癌的作用愈發(fā)得到關注，研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤自發(fā)性細胞凋亡中，癌細胞依然存在對抗失控性生長的凋亡機制[11]。劉菊林等[12]指出，在高分化腺癌患者中，Bcl-2通常呈高表達狀態(tài)，但和細胞浸潤深度、組織學分級之間差異較小。柴春艷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2在膽管癌組織中的水平明顯高于正常膽管上皮組織。本次研究中，試驗組Bcl-2陽性表達率高于對照組，在不同膽管癌分化程度、組織學分級及是否轉(zhuǎn)移中，Bcl-2陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。這可能表明Bcl-2水平異常改變主要發(fā)生于膽管癌的早期階段[14]。

綜上所述，C-myc體現(xiàn)了膽管癌的惡性程度，良好地反映了膽管癌發(fā)病機制。