• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    云錦杜鵑RhLIS基因的克隆與表達(dá)分析

    2022-01-04 01:40:38王文靜呂思佳汪慶昊吳月燕
    核農(nóng)學(xué)報(bào) 2021年12期
    關(guān)鍵詞:云錦芳樟醇杜鵑花

    王文靜 呂思佳 何 凡 汪慶昊 吳月燕

    (浙江萬(wàn)里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院,浙江 寧波 315100)

    杜鵑花為杜鵑花科(Ericaceae)杜鵑花屬(Rhododendron)常綠或落葉灌木,是世界著名的觀賞植物,廣泛應(yīng)用于園林種植和室內(nèi)美化[1-2]。我國(guó)具有豐富的杜鵑花種質(zhì)資源,但僅有少數(shù)杜鵑花種具有香氣,如常綠杜鵑亞屬中的云錦杜鵑(Rh.fortunei)?;ㄏ闶怯^賞植物的重要觀賞性狀之一,因此花香也是評(píng)價(jià)花卉品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[3]。但目前對(duì)杜鵑花的花香性狀及香氣物質(zhì)形成機(jī)理的研究卻鮮有報(bào)道[4]。

    花香是植物散發(fā)出的揮發(fā)性低分子量混合物,植物的部分營(yíng)養(yǎng)器官及花器官均可以散發(fā)芳香物質(zhì)。花的香氣排放量根據(jù)花的發(fā)育階段有所不同[5]?;ㄏ憧梢晕ハx(chóng)完成授粉,抵御生物脅迫以及環(huán)境變化引起的自然脅迫等[6-7]。相對(duì)于花型、花色等易于觀察的植物性狀,目前對(duì)花香的研究相對(duì)滯后[8]。

    通過(guò)對(duì)多種植物花香化合物的成分進(jìn)行分析,已明確萜烯類化合物是植物香氣成分中的主要物質(zhì)[9]。植物香氣中萜類化合物種類多樣,其中芳樟醇是萜烯類化合物的重要組成部分,是桂花(Osmanthusfragrans)[10],百合(Lilium)[11],康乃馨(DianthusCarnation)[12]等具香氣植物的香氣化合物主要成分。芳樟醇常作為香精與香水中的主要香料成分,也可作為食用香料成分[13]。研究表明芳樟醇合酶(linalool synthetase,LIS)是萜烯類化合物生物合成的重要酶,可以將香葉基焦磷酸(geranyl pyrophosphate,GPP)直接催化為揮發(fā)性物質(zhì)芳樟醇[14]。通過(guò)分析擬南芥基因組序列發(fā)現(xiàn),不同種萜烯類合酶基因中,75%的萜烯類合酶基因編碼的氨基酸序列及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)具有相似性,但是這些基因在生物學(xué)功能方面表現(xiàn)差異[15]。

    章辰飛等[16]研究發(fā)現(xiàn)萜烯類化合物是云錦杜鵑香氣成分的主要組成部分,其中芳樟醇含量較高,同時(shí)芳樟醇在云錦杜鵑花不同花期的花瓣中均存在?;谝陨涎芯拷Y(jié)果,推測(cè)芳樟醇可能為云錦杜鵑的主要特征香氣成分。本研究以香氣濃郁且萜烯類化合物含量豐富的云錦杜鵑作為試驗(yàn)材料,克隆杜鵑LIS基因,并對(duì)云錦杜鵑不同花期的花瓣及其他組織進(jìn)行基因表達(dá)水平分析,結(jié)合芳樟醇的含量變化分析結(jié)果,以期深入探討杜鵑花中LIS基因的功能及花香成分代謝機(jī)制,為今后利用LIS基因改良植物花香化合物含量,提高植物花香質(zhì)量和觀賞價(jià)值提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    云錦杜鵑采自寧波四明山國(guó)家森林公園(圖1),根據(jù)花被片開(kāi)放程度將杜鵑花的開(kāi)花過(guò)程分為4個(gè)時(shí)期:花苞期,花被未張開(kāi);半開(kāi)期,花被片張開(kāi);盛開(kāi)期,花被片全部開(kāi)放;衰敗期,花被片開(kāi)始萎蔫。選取10株生長(zhǎng)健壯且長(zhǎng)勢(shì)一致的云錦杜鵑,隨機(jī)選擇處于相同花期,大小相同、著色一致、無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)擠壓損傷的花瓣,用蒸餾水沖洗外部雜質(zhì)后立即置于液氮中,放入-80℃超低溫冰箱內(nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 總RNA提取及cDNA合成 用液氮研磨杜鵑花花瓣樣品,采用植物總RNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)提取花瓣總RNA。分別用1.5%瓊脂糖凝膠電泳和Nanodrop 2000核酸蛋白質(zhì)分析儀(上海賽默飛世爾科技)測(cè)定總RNA的完整性和濃度。按照TransScript Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書(shū)合成cDNA第一鏈[17]。

    1.2.2RhLIS基因克隆 從GenBank中下載與杜鵑花屬植物親緣關(guān)系較近植物的LIS基因全長(zhǎng)序列,采用ClustalW進(jìn)行多序列比對(duì),在同源性較高的序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物L(fēng)IS-F1和LIS-R1(表1)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)總體系為50 μL:2×Taq PCR Master Mix 25 μL、cDNA模板2 μL、上下游引物各2 μL、RNase-free水19 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸2 min,35個(gè)循環(huán);72℃保溫10 min,4℃保存。根據(jù)簡(jiǎn)并引物的擴(kuò)增序列設(shè)計(jì)RACE擴(kuò)增引物5′GSP和3′GSP,分別擴(kuò)增該基因的5′和3′端序列[18]。RACE-cDNA的合成具體操作按照SMARTer RACE 5′/3′ Kit RACE試劑盒(日本寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。PCR產(chǎn)物經(jīng)回收、連接pMD18-T Vector Cloning Kit(日本寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司)、轉(zhuǎn)化(DH5α感受態(tài)細(xì)胞)、重組子篩選及菌液PCR鑒定后,由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行序列測(cè)定[19]。根據(jù)RACE拼接結(jié)果設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物L(fēng)IS-F2和LIS-R2,用于驗(yàn)證基因的全長(zhǎng)序列。

    表1 LIS基因克隆所用引物Table 1 Primers used for cloning of LIS gene

    1.2.3 生物信息學(xué)分析 采用ORF finder查詢開(kāi)放閱讀框(open reading frame,ORF)并預(yù)測(cè)氨基酸序列;采用DNAMAN 軟件進(jìn)行同源蛋白質(zhì)序列比對(duì);采用MEGA5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù);采用CDD軟件分析蛋白質(zhì)序列的保守結(jié)構(gòu)域;采用Expasy Protparam和ProtScale預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和疏水性/親水性;采用NetPhos分析蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn);采用SOPMA預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu);采用Swiss-Model預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)。

    1.2.4RhLIS基因表達(dá)水平的分析 按照NovoScript Plus All-in-one1st Strand cDNA Synthesis SuperMix(gDNA Purge)試劑盒(日本近岸蛋白質(zhì)科技有限公司)合成實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的模板cDNA。利用 Premier5.0 軟件設(shè)計(jì)qRT-PCR引物L(fēng)IS-F3和LIS-R3。以杜鵑EF1α(DUH018457.1)為內(nèi)參基因,按照Trans Start Tip Green qPCR SuperMixS說(shuō)明書(shū)(北京全式金生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。每個(gè)樣品擴(kuò)增時(shí)均有內(nèi)參基因同時(shí)參與擴(kuò)增,各樣品的基因相對(duì)表達(dá)量均為 3 次生物重復(fù)的平均值,采用 2-ΔΔCT法[20]進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

    1.2.5 云錦杜鵑不同花期的花瓣及其他組織中芳樟醇含量的測(cè)定 采用頂空固相微萃取(solid-phasemicro-extraction,SPME)與氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用技術(shù)(SPME-GC-MS)結(jié)合內(nèi)標(biāo)定量法進(jìn)行芳樟醇含量測(cè)定[21-22]。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    所有樣品均設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù),試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0和Excel 2010進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 LIS基因的克隆

    以云錦杜鵑花苞cDNA為模板,利用簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得1 293 bp保守區(qū)序列(圖2-A);基于保守區(qū)序列的RACE擴(kuò)增,分別獲得541 bp的5′序列(圖2-B)和1 259 bp的3′序列(圖2-C)。利用DNAMAN軟件將保守區(qū)、5′和3′序列進(jìn)行比對(duì)拼接,得到LIS基因全長(zhǎng)為2 071 bp,其中包含1 887 bp的完整ORF序列(圖2-D),編碼628個(gè)氨基酸(圖3)。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列中含有一段天冬氨酸保守區(qū)域(DDxxD)[23],是金屬離子結(jié)合區(qū)域,也是萜類合酶具有的典型結(jié)構(gòu)。利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST序列比對(duì),LIS基因核苷酸序列與茶樹(shù)(Camelliasaluenensis)、葡萄(Vitisvinifera)、桂花的相似性分別為71%、68%和68%。

    注:A:保守區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物;B:5′RACE擴(kuò)增產(chǎn)物;C:3′RACE擴(kuò)增產(chǎn)物;D:LIS基因完整ORF區(qū)。Note:A:Conserved region sequence.B:5′RACE sequence.C:3′RACE sequence.D:LIS gene complete ORF region.圖2 云錦杜鵑LIS基因PCR擴(kuò)增Fig.2 PCR amplification of LIS gene in Rh. fortunei

    注:方框內(nèi)是起始密碼子 ATG 和終止密碼子TAG;DDLYD為天冬氨酸富集模體。Note:The boxes are the start codon ATG and the stop codon TAG.DDLYD is an aspartic acid enriched motif.圖3 云錦杜鵑LIS基因的核苷酸及推測(cè)的氨基酸序列Fig.3 The nucleotide and deduced amino acid sequence of LIS gene from Rh. fortunei

    2.2 LIS蛋白質(zhì)基本理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

    2.2.1 LIS蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域分析 LIS編碼蛋白質(zhì)的保守結(jié)構(gòu)域分析表明,杜鵑花LIS蛋白質(zhì)屬于Isoprenoid-Biosyn-C1 superfamily超家族(圖4)。

    圖4 杜鵑花LIS基因編碼蛋白的保守結(jié)構(gòu)域Fig.4 Conservative domains of LIS encoding protein in Rhododendron

    2.2.2 LIS蛋白質(zhì)生物活性分析 ProtParam分析結(jié)果表明,杜鵑LIS蛋白質(zhì)的預(yù)測(cè)分子質(zhì)量為72.39 kDa,等電點(diǎn)(pI)為5.85,說(shuō)明其為酸性蛋白質(zhì);分子式為C3268H5068N860O949S25,負(fù)電荷氨基酸殘基總數(shù)(Asp+Glu)為85,正電荷氨基酸殘基總數(shù)(Arg+Lys)為70,不穩(wěn)定系數(shù)為37.81,推測(cè)為帶負(fù)電荷的穩(wěn)定蛋白質(zhì),脂溶性指數(shù)為91.61,親水性平均數(shù)為-0.269。ProtScale 分析結(jié)果表明,LIS蛋白質(zhì)存在明顯的疏水區(qū)和親水區(qū),其中第94位最高,為2.2;第50位最低,為-2.8,表明LIS蛋白質(zhì)為親水性蛋白質(zhì)(圖5)。

    圖5 杜鵑花LIS蛋白質(zhì)疏水性/親水性預(yù)測(cè)Fig.5 Prediction of the hydrophobic/hydrophilic of LIS in Rhododendron

    2.2.3 LIS蛋白質(zhì)磷酸化修飾預(yù)測(cè) NetPhos分析表明,杜鵑LIS蛋白存在絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸3個(gè)磷酸化位點(diǎn)(圖6),其中絲氨酸磷酸化位點(diǎn)44個(gè),蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)35個(gè),酪氨酸磷酸化位點(diǎn)24個(gè)。

    圖6 杜鵑花LIS蛋白質(zhì)氨基酸翻譯后磷酸化修飾預(yù)測(cè)Fig.6 Prediction of phosphorylation site after amino acid translation of LIS protein in Rhododendron

    2.2.4 LIS蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 分析杜鵑LIS編碼蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),有393個(gè)氨基酸參與形成α-螺旋,占總氨基酸的62.58%;有173個(gè)氨基酸參與形成無(wú)規(guī)則卷曲,占總氨基酸的27.55%;有37個(gè)氨基酸參與形成延伸鏈,占總氨基酸的5.89%;有25個(gè)氨基酸參與形成β-轉(zhuǎn)角,占總氨基酸的3.98%(圖7)。表明杜鵑花LIS基因的編碼蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中含有豐富的α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲;利用Swiss-Model工具對(duì)杜鵑花LIS基因的編碼蛋白質(zhì)進(jìn)行三級(jí)結(jié)構(gòu)建模,在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇與LIS蛋白質(zhì)序列一致性最高的蛋白質(zhì)為模板進(jìn)行同源模建,得到杜鵑LIS蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)模型。與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果相符,含有大量α-螺旋和不規(guī)則卷曲(圖8)。

    注:橫軸表示氨基酸位置;藍(lán)色區(qū)域表示α-螺旋;紫色區(qū)域表示無(wú)規(guī)則卷曲;紅色區(qū)域表示延伸鏈;綠色區(qū)域表示β-轉(zhuǎn)角。Note:Horizontal axis indicated amino acid position.The blue part indicated alpha helix.The purple indicated random coil.The red part indicated extended strand.The green part indicated beta turn.圖7 杜鵑花LIS 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.7 The prediction of LIS secondary structure in Rhododendron

    圖8 杜鵑花LIS 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.8 Prediction of the three-dimensional structure of LIS protein in Rhododendron

    2.3 LIS蛋白質(zhì)序列的同源性和系統(tǒng)進(jìn)化分析

    利用DNAMAN軟件對(duì)杜鵑花與其他物種LIS基因編碼的蛋白質(zhì)氨基酸進(jìn)行同源性比對(duì),結(jié)果如圖9所示,杜鵑花與其他物種蛋白質(zhì)氨基酸序列中均含有天冬氨酸富集區(qū)域(DDxxD),但存在長(zhǎng)度差異性和組成變異性,杜鵑RhLIS與桂花、麻瘋樹(shù)、萵苣LIS蛋白質(zhì)氨基酸序列相似性分別為56.35%、57.96%、53.44%。為研究杜鵑花與其他物種LIS的進(jìn)化關(guān)系,根據(jù)15個(gè)LIS基因的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。由圖10可知,杜鵑花LIS蛋白質(zhì)與桂花的關(guān)系最近,其次與萵苣、向日葵的關(guān)系較為接近。

    注:Rh:杜鵑;Of:桂花;Jc:麻瘋樹(shù);Ls:萵苣;Ha:向日葵。方框中為DDxxD結(jié)構(gòu)域。Note:Rh:Rhododendron simsii Planch. Of:Osmanthus fragrans. Jc:Jatropha curcas. Ls:Lactuca sativa. Ha:Helianthus annuus. The DDxxD domain was showed by box.圖9 杜鵑花與其他植物L(fēng)IS蛋白質(zhì)氨基酸序列的多重比較Fig.9 Multiple alignment of deduced LIS amino acids sequences from Rhododendron and other plants

    圖10 杜鵑花LIS與其他物種LIS蛋白質(zhì)的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.10 Phylogenetic tree of LIS proteins in Rhododendron and other species

    2.4 云錦杜鵑不同花期的花瓣及其他組織中LIS基因的表達(dá)水平分析

    由圖11-A可知,LIS基因在不同組織中均有表達(dá),在4個(gè)花期的花瓣中,LIS基因的表達(dá)水平呈先上升后下降的變化趨勢(shì),且在盛開(kāi)期表達(dá)量最高,這與花香揮發(fā)物質(zhì)釋放的規(guī)律相符合;在盛開(kāi)期的花蕊中,雄蕊中LIS基因的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于雌蕊,高達(dá)17.5倍;幼葉的LIS基因的表達(dá)水平高于老葉,高達(dá)35倍。在盛開(kāi)期,花瓣(花苞期+半開(kāi)期+盛開(kāi)期+衰敗期)中的表達(dá)量顯著高于花蕊,在雄蕊中也有相對(duì)較高的表達(dá)量,其次為雌蕊,表達(dá)量最低的是老葉。

    2.5 云錦杜鵑不同花期花瓣及其他組織中芳樟醇含量

    根據(jù)SPME-GC-MS分析結(jié)果,云錦杜鵑不同開(kāi)花期花瓣及其他組織的芳樟醇含量的測(cè)定值如圖11-B。結(jié)果表明,在云錦杜鵑4個(gè)花期的花瓣中,芳樟醇含量呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì),與LIS基因的表達(dá)水平變化趨勢(shì)相一致,在半開(kāi)期含量最高;在盛開(kāi)期的花蕊中,雌蕊的芳樟醇含量高于雄蕊;在盛開(kāi)期,花瓣中芳樟醇的含量顯著高于花蕊;此外,幼葉中芳樟醇的含量低于半開(kāi)期的花瓣。

    2.6 相關(guān)性分析

    云錦杜鵑不同花期的花瓣及其他組織中LIS基因表達(dá)水平和芳樟醇含量的相關(guān)系數(shù)為0.827,表明杜鵑LIS基因與芳樟醇的合成密切相關(guān),推測(cè)LIS參與了芳樟醇的生物合成。

    3 討論

    花香是觀賞植物的重要性狀之一,植物體主要通過(guò)過(guò)氧化物酶體、細(xì)胞質(zhì)以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的甲羥戊酸途徑(mevalonate pathway,MVA)和質(zhì)體中的2-甲基-D赤蘚糖醇-4-磷酸途徑(methylerythritol-4-phosphate pathway,MEP),合成單帖、倍半萜、二萜等化合物[24]。近年來(lái),通過(guò)對(duì)香氣植物中花香化合物成分以及合成機(jī)制的深入探究,從仙女扇[25]、金魚(yú)草(Antirrhinummajus)[26]及其他植物中分離純化出花香合成途徑的關(guān)鍵基因,發(fā)現(xiàn)LIS基因的表達(dá)與芳樟醇的含量密切相關(guān);Lucker[27]在煙草植株中轉(zhuǎn)入3個(gè)單萜合酶基因,轉(zhuǎn)化植物體的產(chǎn)物中萜烯類物質(zhì)β-蒎烯、檸檬烯和芳樟醇等香氣化合物的含量顯著上升,達(dá)到人類嗅覺(jué)感知范圍,由此證明通過(guò)基因工程可以改良花香性狀。

    本研究中,杜鵑花LIS編碼蛋白質(zhì)中含有Isoprenoid-Biosyn-C1 superfamily超家族序列,且含有典型的天冬氨酸富集模體(DDxxD)結(jié)構(gòu),這與小蒼蘭[28]、薰衣草(Lavandulaangustifolia)[29]和丁香(Syzygiumaromaticum)[30]的研究結(jié)果相同。通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn),杜鵑LIS蛋白質(zhì)與桂花、萵苣聚為一小支,與仙女扇和雞血藤聚為一大類,在保持物種特異性的同時(shí)可能具有類似的生物學(xué)功能。本研究還發(fā)現(xiàn),云錦杜鵑花瓣中LIS基因相對(duì)表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì),在盛開(kāi)期最高,這與百合[13]和桂花[31]的研究結(jié)果一致,同時(shí)雄蕊中LIS基因相對(duì)表達(dá)量遠(yuǎn)高于雌蕊,但是芳樟醇含量低于雌蕊。在不同花期的花瓣中,芳樟醇的含量呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì),該結(jié)果與章辰飛等[16]的研究結(jié)果相同,但是衰敗期花瓣中芳樟醇含量略有不同,可能與不同時(shí)期樣品的差異有關(guān),從而導(dǎo)致不同批次花瓣中芳樟醇的相對(duì)含量與絕對(duì)含量變化趨勢(shì)不同。本研究中芳樟醇的含量變化與LIS基因表達(dá)水平變化趨勢(shì)相同,但是與前人研究相比最高值提前了一個(gè)花期,芳樟醇在半開(kāi)期的花瓣中含量最高,可以推測(cè)半開(kāi)期與盛開(kāi)期的芳樟醇含量變化與杜鵑花花瓣吸引昆蟲(chóng)授粉具有重要關(guān)聯(lián)。

    注:不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。Note:Different lowercase letters indicate significant differences at 0.05 level.圖11 云錦杜鵑不同花期的花瓣及花蕊L(fēng)IS基因表達(dá)量與芳樟醇含量分析Fig.11 Expression analysis of LIS gene and linalool content in petals and other tissues of Rh. fortunei in different flowering stages

    在云錦杜鵑中,LIS基因表達(dá)量產(chǎn)生巨大差異的原因可能與組織特異性相關(guān),植物中香氣化合物主要通過(guò)花瓣進(jìn)行合成和排放調(diào)節(jié),盡管在其他組織中(例如萼片、雄蕊、雌蕊和蜜腺)也有部分香氣化合物的形成[32];此外,花瓣相較于花蕊擁有更大的空氣接觸面積,但是在吸引昆蟲(chóng)傳粉和授粉過(guò)程中,葉片并不是主要的香氣貢獻(xiàn)者。本研究克隆出云錦杜鵑中LIS基因,可以在后續(xù)研究中進(jìn)一步確定其上游啟動(dòng)子的序列和功能,通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控目標(biāo)基因在時(shí)間和空間上的特定表達(dá),最終改變花香化合物的組成與含量,完成花香植物新種質(zhì)的創(chuàng)制,但該設(shè)想尚需要通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化等方法進(jìn)行驗(yàn)證。此外,本研究在云錦杜鵑中只克隆得到1個(gè)LIS基因,在杜鵑花中是否存在LIS家族基因,仍需進(jìn)一步研究。今后可進(jìn)一步分析杜鵑花中花香合成途徑中物質(zhì)交換及關(guān)鍵基因的表達(dá)模式,為探明杜鵑花中LIS基因調(diào)控芳樟醇生物合成的機(jī)理提供理論依據(jù)。

    4 結(jié)論

    本研究通過(guò)RT-PCR和RACE技術(shù)首次從云錦杜鵑中克隆獲得LIS基因全長(zhǎng)cDNA序列,ORF序列長(zhǎng)度為1 887 bp,編碼628個(gè)氨基酸,生物信息學(xué)分析表明,杜鵑花LIS基因編碼1個(gè)酸性、帶負(fù)電荷的穩(wěn)定親水性蛋白質(zhì),屬于Isoprenoid-Biosyn-C1 superfamily超家族,具有典型的DDxxD結(jié)構(gòu)。LIS基因在云錦杜鵑不同花期的花瓣及其他組織中均有表達(dá),但表達(dá)量表現(xiàn)出較大的差異性,云錦杜鵑中LIS基因相對(duì)表達(dá)量與香氣釋放規(guī)律一致,呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì);不同部位中,花瓣LIS基因相對(duì)表達(dá)量高于花蕊,幼葉高于老葉,具有組織特異性。對(duì)比芳樟醇含量變化趨勢(shì)發(fā)現(xiàn),杜鵑LIS基因表達(dá)水平與芳樟醇含量及香氣變化密切相關(guān)。本研究結(jié)果為進(jìn)一步探究杜鵑花LIS基因的功能奠定了基礎(chǔ),也為今后改良杜鵑花香氣化合物的成分、提高花香質(zhì)量和觀賞價(jià)值提供了參考。

    猜你喜歡
    云錦芳樟醇杜鵑花
    南京云錦
    幼兒100(2024年17期)2024-05-30 07:32:56
    明清云錦色彩符號(hào)的探究及應(yīng)用
    包裝工程(2023年20期)2023-10-28 03:23:30
    杜鵑花開(kāi)
    南京云錦的故事
    氧化芳樟醇合成及應(yīng)用的研究進(jìn)展*
    廣州化工(2021年19期)2021-10-25 14:03:02
    天工云錦繼夢(mèng)漣漪佳地
    待到杜鵑花開(kāi)時(shí)
    心聲歌刊(2020年4期)2020-09-07 06:37:14
    杜鵑花
    哦,杜鵑花!
    花椒酒中檸檬烯和芳樟醇的測(cè)定
    在线观看三级黄色| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品日本国产第一区| 春色校园在线视频观看| 在线观看免费高清a一片| 久久97久久精品| 咕卡用的链子| 高清欧美精品videossex| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品在线美女| 九九爱精品视频在线观看| videos熟女内射| h视频一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产精品一国产av| 制服人妻中文乱码| 热re99久久精品国产66热6| 精品一区二区三卡| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久视频综合| a 毛片基地| 国产xxxxx性猛交| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| av免费观看日本| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美精品国产亚洲| 2021少妇久久久久久久久久久| 久热久热在线精品观看| 在线观看国产h片| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲,欧美,日韩| 国产探花极品一区二区| 黄色配什么色好看| 男的添女的下面高潮视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产在线视频一区二区| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲在久久综合| 国产在线免费精品| 国产熟女欧美一区二区| freevideosex欧美| 亚洲综合色惰| 少妇的丰满在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 色播在线永久视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 9热在线视频观看99| 国产成人欧美| 久久久久久久亚洲中文字幕| 18+在线观看网站| 久久久国产精品麻豆| 国产 一区精品| 欧美精品av麻豆av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品不卡视频一区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产毛片在线视频| 国产精品av久久久久免费| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久精品久久久久真实原创| 午夜激情久久久久久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99久久人妻综合| 热99久久久久精品小说推荐| 黑丝袜美女国产一区| 国产一区二区三区av在线| 天堂8中文在线网| 超碰97精品在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 婷婷色综合大香蕉| 久久午夜福利片| videos熟女内射| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 777米奇影视久久| 老司机影院成人| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品熟女久久久久浪| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线看a的网站| 国产男女内射视频| 国产亚洲一区二区精品| 看免费成人av毛片| xxx大片免费视频| 国产片特级美女逼逼视频| 精品一品国产午夜福利视频| 中文欧美无线码| av在线播放精品| 自线自在国产av| 大陆偷拍与自拍| 一级毛片 在线播放| 一本大道久久a久久精品| 欧美av亚洲av综合av国产av | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美清纯卡通| 免费少妇av软件| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲欧洲日产国产| 欧美 日韩 精品 国产| 国产免费现黄频在线看| 大片电影免费在线观看免费| 超碰97精品在线观看| 岛国毛片在线播放| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲国产精品999| av免费观看日本| 亚洲成人手机| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲av中文av极速乱| 9色porny在线观看| 伊人久久国产一区二区| 美女大奶头黄色视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲综合色惰| 看免费成人av毛片| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中文欧美无线码| 精品国产一区二区久久| 久久热在线av| www日本在线高清视频| www.自偷自拍.com| 尾随美女入室| av网站免费在线观看视频| 最新中文字幕久久久久| 制服人妻中文乱码| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久人人爽av亚洲精品天堂| av女优亚洲男人天堂| 精品亚洲成国产av| 国产成人精品福利久久| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲,一卡二卡三卡| 日日啪夜夜爽| 国产精品国产三级专区第一集| 久久97久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产成人精品无人区| av一本久久久久| 蜜桃国产av成人99| 国产免费福利视频在线观看| 免费观看性生交大片5| 国产野战对白在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 日韩欧美精品免费久久| 午夜福利,免费看| 一区二区av电影网| 青春草国产在线视频| 免费大片黄手机在线观看| 成人手机av| 97在线视频观看| 亚洲精品日本国产第一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 久久久久精品久久久久真实原创| www.精华液| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美日韩亚洲高清精品| a级片在线免费高清观看视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 99久久中文字幕三级久久日本| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 少妇的丰满在线观看| 亚洲综合精品二区| 老熟女久久久| 久久国产精品大桥未久av| 日本vs欧美在线观看视频| 精品国产国语对白av| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美日韩视频精品一区| 男女高潮啪啪啪动态图| a级毛片黄视频| 国产免费又黄又爽又色| av.在线天堂| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 欧美激情高清一区二区三区 | 少妇人妻久久综合中文| 中文字幕av电影在线播放| 热re99久久精品国产66热6| 18+在线观看网站| 国产极品天堂在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 韩国av在线不卡| 国产不卡av网站在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 成年人午夜在线观看视频| 91精品三级在线观看| 色吧在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产一区二区 视频在线| 国产野战对白在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲欧美清纯卡通| 成人免费观看视频高清| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲图色成人| 免费观看av网站的网址| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 成人手机av| 国产亚洲最大av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久国内精品自在自线图片| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 五月天丁香电影| 99国产精品免费福利视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 婷婷色综合www| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 黄色配什么色好看| 成人黄色视频免费在线看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线观看www视频免费| 蜜桃在线观看..| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 天美传媒精品一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av.av天堂| 丰满饥渴人妻一区二区三| 黄色一级大片看看| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人精品婷婷| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产又爽黄色视频| 制服丝袜香蕉在线| 国产精品免费大片| 亚洲国产色片| 欧美在线黄色| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美另类一区| 99热全是精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 午夜av观看不卡| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 免费看av在线观看网站| 成年人免费黄色播放视频| 黄片无遮挡物在线观看| 国产 精品1| 国产精品一区二区在线观看99| 国产激情久久老熟女| 久久人人爽人人片av| 欧美人与善性xxx| 亚洲天堂av无毛| 91精品国产国语对白视频| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲欧美精品自产自拍| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久人人爽人人片av| av.在线天堂| 国产av国产精品国产| 亚洲人成电影观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 18+在线观看网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品偷伦视频观看了| 国产在视频线精品| 少妇的逼水好多| 欧美精品一区二区免费开放| 我的亚洲天堂| 18禁动态无遮挡网站| 成人免费观看视频高清| 最黄视频免费看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩视频在线欧美| 男女边摸边吃奶| 久久影院123| 中文字幕亚洲精品专区| 大陆偷拍与自拍| 一边亲一边摸免费视频| 日韩一区二区三区影片| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 老熟女久久久| 精品国产一区二区久久| 男人舔女人的私密视频| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久国内精品自在自线图片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 99国产精品免费福利视频| 男女国产视频网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成人国语在线视频| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲国产av新网站| 乱人伦中国视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 三级国产精品片| 老鸭窝网址在线观看| 午夜老司机福利剧场| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲天堂av无毛| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲久久久国产精品| 国产成人精品婷婷| 国产成人欧美| 国产有黄有色有爽视频| 一区二区三区乱码不卡18| 黄色一级大片看看| 免费观看无遮挡的男女| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久 成人 亚洲| 91精品三级在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 熟女av电影| 精品一区在线观看国产| 国产成人午夜福利电影在线观看| av天堂久久9| 午夜福利一区二区在线看| 欧美精品国产亚洲| 精品视频人人做人人爽| 在线观看三级黄色| 美女中出高潮动态图| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产一区二区在线观看av| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 七月丁香在线播放| 一级a爱视频在线免费观看| 不卡视频在线观看欧美| 久久99热这里只频精品6学生| a级片在线免费高清观看视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲,一卡二卡三卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久97久久精品| 日本黄色日本黄色录像| 中文字幕av电影在线播放| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 久久久精品区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 激情视频va一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久视频综合| 成人二区视频| 老鸭窝网址在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 免费看不卡的av| 91aial.com中文字幕在线观看| 咕卡用的链子| 黄片小视频在线播放| 色吧在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日韩视频在线欧美| 亚洲美女视频黄频| 国产亚洲一区二区精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品视频女| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久影院123| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人av激情在线播放| 99国产精品免费福利视频| 久久99热这里只频精品6学生| 捣出白浆h1v1| 国精品久久久久久国模美| av有码第一页| 午夜福利影视在线免费观看| 免费观看av网站的网址| 丝袜脚勾引网站| 一级片免费观看大全| 人妻少妇偷人精品九色| 2022亚洲国产成人精品| 老汉色∧v一级毛片| 大香蕉久久成人网| 三级国产精品片| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产乱来视频区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇熟女欧美另类| 2022亚洲国产成人精品| 青春草国产在线视频| 一级片免费观看大全| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 青春草视频在线免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜福利,免费看| 国产成人91sexporn| 久久久久网色| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 又黄又粗又硬又大视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久久久久久久免费视频了| av在线老鸭窝| 欧美精品一区二区免费开放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品.久久久| 免费观看性生交大片5| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产精品熟女久久久久浪| 日本免费在线观看一区| 日日爽夜夜爽网站| 人妻 亚洲 视频| 亚洲综合色惰| 免费看av在线观看网站| 成人毛片60女人毛片免费| 久久午夜福利片| 亚洲精品一二三| av天堂久久9| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 欧美成人午夜精品| 亚洲人成电影观看| 在线观看www视频免费| 久久精品亚洲av国产电影网| 黄色 视频免费看| 欧美日韩视频精品一区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99久国产av精品国产电影| 成人免费观看视频高清| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 男女国产视频网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 一级,二级,三级黄色视频| 老司机影院成人| 天堂中文最新版在线下载| 热99国产精品久久久久久7| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 美女大奶头黄色视频| 久久精品国产综合久久久| 久久av网站| 国产亚洲欧美精品永久| 97在线人人人人妻| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产乱人偷精品视频| 亚洲综合色惰| 欧美97在线视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 男女无遮挡免费网站观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 一区福利在线观看| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成人国语在线视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲成人一二三区av| 国产精品成人在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 亚洲av成人精品一二三区| 免费看av在线观看网站| 青草久久国产| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 精品福利永久在线观看| 午夜激情av网站| 男人操女人黄网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品一区二区在线观看99| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲精品国产一区二区精华液| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲中文av在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 日本黄色日本黄色录像| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区三区综合在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| www.av在线官网国产| 热99国产精品久久久久久7| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲精品第二区| 99热国产这里只有精品6| 美女中出高潮动态图| 看免费av毛片| 大话2 男鬼变身卡| 老汉色∧v一级毛片| 久久久久视频综合| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品国产av成人精品| freevideosex欧美| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 一区二区三区激情视频| 女人精品久久久久毛片| 国产精品不卡视频一区二区| 精品久久久精品久久久| 国产精品偷伦视频观看了| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久影院123| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲三区欧美一区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 尾随美女入室| 国产精品久久久久成人av| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本爱情动作片www.在线观看| 男女免费视频国产| 如何舔出高潮| 人成视频在线观看免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 桃花免费在线播放| kizo精华| 我的亚洲天堂| 黄色配什么色好看| 午夜老司机福利剧场| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲四区av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 韩国av在线不卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 男人舔女人的私密视频| av片东京热男人的天堂| 美女午夜性视频免费| 免费av中文字幕在线| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产在视频线精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 美女中出高潮动态图| 久久韩国三级中文字幕| freevideosex欧美| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久99热这里只频精品6学生| 边亲边吃奶的免费视频| 久久精品国产亚洲av天美| av一本久久久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品久久久久久精品古装| 一级片'在线观看视频| av有码第一页| 秋霞在线观看毛片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲av免费高清在线观看| 最黄视频免费看| 少妇的逼水好多| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲美女黄色视频免费看| 日韩电影二区| 9191精品国产免费久久| 国产黄频视频在线观看| 亚洲国产看品久久| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产又爽黄色视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 2022亚洲国产成人精品| 一级爰片在线观看| 91精品国产国语对白视频| 国产极品天堂在线| 午夜影院在线不卡| 午夜福利视频精品| 在线观看免费日韩欧美大片| 男人添女人高潮全过程视频| 大片免费播放器 马上看| 黄片无遮挡物在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 丰满少妇做爰视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产av一区二区精品久久| 最近手机中文字幕大全| 欧美bdsm另类| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品日本国产第一区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 黄色 视频免费看| 久久久精品94久久精品| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲国产成人一精品久久久| av天堂久久9| 边亲边吃奶的免费视频| 涩涩av久久男人的天堂|