枸骨果活性成分及藥理作用的研究概況

張 蒙，閔 清*

(1.湖北科技學(xué)院醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.鄂南特色中藥湖北省工程研究中心)

枸骨為冬青科冬青屬植物，多產(chǎn)于長(zhǎng)江中下游各省區(qū)灌木叢及溪邊等環(huán)境，包括浙江、江西、湖北、湖南等省區(qū)，安徽安慶、江蘇南京等地，資源十分豐富，隨著全球貿(mào)易的發(fā)展傳入歐洲。唐代中藥學(xué)家陳臧器說：“此木肌白，如狗之骨”，便用“枸”代之，于是將此植物命名枸骨。一方面，其葉四季都保持常青的姿態(tài)，花為傘狀白色，果于秋冬紅色常掛枝頭，都具良好的觀賞性；另一方面，它還可藥用，在藥典中很早就有記載：枸骨葉可養(yǎng)陰清熱、補(bǔ)益肝腎[1-2]，還有保護(hù)心肌細(xì)胞、護(hù)肝、保護(hù)神經(jīng)、抗生育等生物活性[3-4]；枸骨莖具有抑菌[5]及抗炎活性[6-7]；枸骨根清風(fēng)熱，活血化瘀[8]，治療關(guān)節(jié)疼痛、牙痛[9]，健腰膝；枸骨果具補(bǔ)肝腎、止瀉、體質(zhì)虛弱、避孕等功效。冬季采摘成熟果實(shí)，曬干，篩去雜質(zhì)，是可內(nèi)服的一味中藥材：食用方法為煎藥去渣喝藥汁，每天用量在6～10g；或泡酒，其泡酒服具有活血散瘀、堅(jiān)強(qiáng)筋骨、填補(bǔ)髓臟、固斂精血、治筋骨痛等功效[10]。

1 枸骨果的活性成分

查閱資料發(fā)現(xiàn)，枸骨果實(shí)成分主要包含黃酮類、多糖類、皂苷類、花色苷類色素、萜類和多酚類化合物等。

1.1 黃酮類

黃酮廣泛存在于自然界植物中，其總數(shù)約有4 000多種。黃酮不但具備較強(qiáng)的抗氧化活性，作用于各類自由基，也可減少心腦血管疾病的產(chǎn)生；還具抗炎、抗菌、抗病毒的作用[11]。李艷芝等[12]不僅對(duì)提取方法進(jìn)行考察，還對(duì)不同提取溶劑進(jìn)行測(cè)定，用HPLC測(cè)定了不同部位的蘆丁與槲皮素，發(fā)現(xiàn)當(dāng)提取溶劑為90%的乙醇，提取2次，每次30min時(shí)提取率最高，結(jié)果表明枸骨成熟果實(shí)中的黃酮含量比葉子和樹枝中的含量低，但同一部位中蘆丁含量高于槲皮素。李艷芝等[13]為優(yōu)化枸骨果實(shí)中總黃酮的提取工藝，以總黃酮含量為指標(biāo)，在提取溶劑為75%乙醇，超聲60min時(shí)提取率最高。何潔鈺等[14]研究者對(duì)無刺枸骨果實(shí)中黃酮的提取展開研究，在料液比為1∶30，0.15%Tween-20，超聲20min及提取溫度為50℃時(shí)，總黃酮得率最高，而且在低溫30℃及弱酸中性條件下較為穩(wěn)定。

1.2 多糖類

植物多糖可通過與toll樣受體特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞殺死病原體，也可以通過激活自然殺傷細(xì)胞，提高機(jī)體免疫力，改善淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而起到抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗?jié)?、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等藥理活性[15-16]。而枸骨果實(shí)中含有豐富的多糖，王清等[17]對(duì)枸骨多糖的提取進(jìn)行了響應(yīng)面分析，以多糖提取率為指標(biāo)，采用Design軟件發(fā)現(xiàn)液料比、溫度、時(shí)間均與提取率相關(guān)，且溫度影響最大，在溫度80℃、時(shí)間1.5h、料液比1∶150的條件下具最優(yōu)提取率，此時(shí)多糖的提取率達(dá)到28.84%，因此，將其作為多糖提取的最佳工藝。

1.3 皂苷類

皂苷廣泛存在于植物體內(nèi)，具有多種生物活性如抗菌、抗炎、鎮(zhèn)靜、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保肝活性等作用。有研究[18-19]以齊墩果酸為對(duì)照，采用響應(yīng)面法對(duì)枸骨總皂苷提取做了優(yōu)化工藝，發(fā)現(xiàn)在一定范圍內(nèi)，隨著提取溶劑與原料差異值的增加、溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)，枸骨總皂苷的溶出也隨之升高，在料液比1∶30、功率100W、超聲微波提取3min時(shí)具有最優(yōu)提取率。

1.4 花色苷類色素

天然植物色素不僅具有安全性、著色性等特點(diǎn)，還可預(yù)防心血管疾病、保護(hù)肝臟等，對(duì)人體保健起到輔助作用[20]，枸骨果實(shí)中色素主要為花色苷類水溶性色素，其包含紅色素，易溶于水溶性試劑，而不溶于脂溶性試劑，而且不同的酸堿度也會(huì)對(duì)色素產(chǎn)生一定的影響[21]。為探討枸骨果色素的最佳提取工藝，夏新奎等對(duì)各影響因素進(jìn)行全面分析，優(yōu)化成熟果實(shí)色素的提取工藝參數(shù)，并準(zhǔn)確分析出因素的最佳組合，結(jié)果表明在酸性條件下，提取溶劑為75%乙醇，以料液比1∶30，溫度80℃，提取時(shí)間80min時(shí)，其提取效果最好[22-23]。吳瑛等[24]研究發(fā)現(xiàn)冬青果實(shí)的紅色素在70℃、50min、1∶41的提取條件下吸光值最大，含量最多。目前，隨著研究技術(shù)的發(fā)展，人工合成色素已普遍應(yīng)用于市場(chǎng)，但相較于天然色素，其對(duì)人體存在一定的危害，所以枸骨果天然色素藥理活性需要研究探討開發(fā)[25]。

1.5 萜類

近年來，隨著對(duì)五環(huán)三萜化合物的深入研究探討，發(fā)現(xiàn)其不僅具有抗腫瘤[26]、降血脂、抗菌/病毒，安定、降溫、護(hù)肝作用[27-28]，還可增強(qiáng)免疫功能等藥理活性。有研究者從冬青屬種子內(nèi)提取出一種萜類化合物環(huán)酸[29]。范志英等[30]為測(cè)定枸骨果中萜類的含量，采用HPLC法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)枸骨不同部位中均具有齊墩果酸和熊果酸兩種單體，而果實(shí)中兩種化合物含量均較少，但同一部位中熊果酸含量遠(yuǎn)高于齊墩果酸含量，因此，枸骨可作為提取分離熊果酸的優(yōu)良原料。

1.6 多酚類

多酚類化合物具有良好的抗氧化活性，越來越受科學(xué)界關(guān)注。佘新松等[31]對(duì)正丁醇層進(jìn)行化學(xué)成分分析，首次報(bào)道了枸骨果實(shí)中含有重要藥效分子綠原酸。

2 枸骨果的藥理作用

2.1 抗菌作用

有研究[32]對(duì)無刺枸骨的果實(shí)進(jìn)行了化學(xué)成分、抗氧化能力及抗菌活性分析，發(fā)現(xiàn)不同萃取層均具抗氧化能力，且對(duì)不同菌群的抑制效果各不同，但抗氧化和抗菌活性最佳均集中在正丁醇層。李艷芝等[12]為考察枸骨不同溶劑萃取物的抗菌活性，運(yùn)用擴(kuò)散法和稀釋法對(duì)不同菌群進(jìn)行抗菌試驗(yàn)，結(jié)果表明枸骨果實(shí)在乙酸乙酯萃取層中的抗菌能力相較于其他萃取層強(qiáng)。隨著殺菌時(shí)間的延長(zhǎng)及劑量的增大，枸骨酒精提取物對(duì)金黃色葡萄球菌具有明顯的抑菌殺菌作用[33]，而目前對(duì)枸骨果實(shí)的研究均采用粗提取，因此，今后應(yīng)在活性強(qiáng)的乙酸乙酯部位進(jìn)一步分離富集，進(jìn)行相關(guān)活性檢測(cè)，以尋求枸骨果實(shí)抗菌有效成分，為枸骨抗菌藥效研究提供依據(jù)。

2.2 抗氧化作用

李艷芝等[12]對(duì)枸骨的抗氧化與抗菌活性展開研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同溶劑萃取物均有一定的抗氧化能力，且枸骨果實(shí)在實(shí)驗(yàn)5d內(nèi)，具有較強(qiáng)的抗氧化能力。趙玲艷等[18]為檢測(cè)枸骨抗氧化活性，以DPPH的清除力作為指標(biāo)，結(jié)果顯示枸骨總皂苷濃度為62.24μg/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率為24.22%。Yuan等[34]采用DPPH自由基清除法測(cè)定了枸骨提取物的抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)在0～5d時(shí)，枸骨果不同萃取層的抗氧化能力均較強(qiáng)，在5～10d時(shí)其抗氧化能力趨于平緩，10d之后抗氧化能力下降，表明枸骨果具有抗氧化能力。

2.3 抗炎作用

冬青作為傳統(tǒng)的中草藥，常用于治療流感、發(fā)燒和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[35-36]，有研究者發(fā)現(xiàn)三萜類和黃酮類具有明顯的抗炎活性，采用LPS建立RAW264.7損傷模型，對(duì)枸骨化合物的抗炎活性進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)齊墩果酸、熊果酸、羽扇豆醇、槲皮素、蘆丁可抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7中促炎細(xì)胞因子的分泌[37-38]；同時(shí)有學(xué)者研究了在體實(shí)驗(yàn)的組織炎癥，研究結(jié)果表明冬青種子中羅通達(dá)酸(RA)可減輕二甲苯所致的耳水腫、肉芽腫，LPS所致的ALI，提高LPS所致小鼠死亡的存活率[39]。Chang等[40]研究發(fā)現(xiàn)冬青提取物中三萜類化合物絨毛醇酸(TA)、萬古列酸(RAB)可抑制皮膚銀屑病的癥狀，顯示出其具有治療中性粒細(xì)胞炎癥性皮膚病的潛力。

2.4 其他作用

除上述作用外，冬青植物的地上部分中含有的三萜化合物齊墩果酸還具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用，同時(shí)進(jìn)行自由基清除能力測(cè)定，結(jié)果表明三萜類對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用與其自由基清除能力沒有直接關(guān)系，因此，化合物對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究[41]。此外，冬青植物的種子還可降低亞硝酸鹽的含量[39]。

3 結(jié) 語

綜上所述，枸骨果實(shí)化學(xué)成分研究主要集中在總黃酮、總多酚、總皂苷、花色苷類紅色素、萜類等總成份上。其中紅色素具有穩(wěn)定性，提示枸骨果可作為天然色素資源開發(fā)，黃酮類、多糖類、皂苷類、多酚類和萜類均具有抑菌抗炎抗腫瘤及保肝等作用，表明枸骨果具有多種潛在藥理活性待開發(fā)。另外，經(jīng)研究證實(shí)枸骨果粗提物具有抗菌、抗氧化及抗炎作用，然而具體發(fā)揮活性的成分不可得知。由此枸骨果活性成分的研究有必要在冬青屬植物藥理試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步分離測(cè)定，隨著深層次的研究有效活性成分，可探究枸骨果是否具有更多的藥理作用及利用價(jià)值，推動(dòng)枸骨果應(yīng)用的深入研究，也可豐富我國(guó)中藥資源，以防枸骨果的浪費(fèi)。